Реактив для качественного определения пролина

Реактив для качественного определения пролина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

пп 566873

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистимеских

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 09.04.75 (21) 2122752/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30,07.77. Бюллетень № 28

Дата опубликования описания 20.10.77 (51) M. Кл 2 С 12D 13/06 государственный комитет

Соаата Министроа СССР по делам иэооретений и открытий (53) УДК 668.394(088.8) (72) Авторы изобретения

М. Ф,. Томашевская и Б. С, Зименковский (71) Заявитель

Львовский государственный медицинский институт (54) РЕАКТИВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ПРОЛ ИНА

=-т — н — с — кнв, 1

=о

I сн, Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается применения тиосемикарбазона-3 1-метилизатина и его производного 1,6- бис - (1 - метилизатинтиосемикарбазон - 3 — ил -4) гексана общей формулы где К вЂ” водород или — (СН2) 6 —, в качестве органических реактивов для качественного определения пролина, в частности для специфического проявления пятен пролина на «роматограммах, и может быть использовано в биохимических и клинических лабораториях.

Неза мещенный тиосемикарбазон-3 1-метилизатин, известный под названием Метисазон, применяется в настоящее время только в качестве лекарственного средства (1).

Для выявления аминокислот применяют очень много реагентов, из которых наиболее известны нингидрин, аллоксан, незамещенный изатин, хинизатин, индандион-1,3 (2).

Указанные соединения неспецифичны для отдельных аминокислот и применяются наиболее часто для полихромного проявления этих кислот на фоне тонкослойпых хроматограмм.

Целью изобретения является выявление среди производных изатина соединений, которые могли бы быть использованы в качестве специфических проявителей пятен аминокислот

5 на хроматограммах.

Это достигается применением известного лекарственного препарата метисазона и его производных в качестве специфических реагентов лишь на пролин, которые позволяют

10 идентифицировать его наличие даже в смеси с другими 1 -аминокислотами.

При взаимодействии пролина с тиосемикарбазоном-3 1-метилизатиена образуется соединение, для которого определен максимум по15 глощепия Х„,„„.,=586 нм (в метаноле).

П р и м ер 1. На хроматографическую бумагу Filtralc № 14 наносят микропипеткой по

0,01 мл, 0,02 мл, ... до 0,07 мл водного раствора, содержащего в 1 мл 0,02 мг пролина, 20 После кратковременного высушивания при

50 С бумагу протягивают через 0,4%-ный раствор метисазона B ацетоне, подкисленном уксусной кислотой (смесь 96 мл ацетона и 4 мл ледяной уксусной кислоты), Затем бумагу по25 мещают на 3 — 5 мин в термостат, нагретый до 115 С, при этом пятна, содержащие 1 мг и более пролина, окрашиваются в зеленый цвет.

Аналогично проявляют пятна пролина при помощи 1,6 - бис - (1 - метилизатинтиосеми30 карбазоп — 3 — ил - 4)-гексана, применяя более

566873 сн, 10 сн, Составитель М, Ларина

Текред М. Семенов

Корректор Л. Денискина

Редактор Г. Лановая

Заказ 1885/14 Изд. М 635 Тираж 563

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4 5

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2 сильно подкисленные (до получения прозрачного раствора) растворы препарата. Чувстви,При мер 2. Одну каплю водного раствора аминокислот, содержащую по 1 мг DL-а-аланина, L-аргинина солянокислого, аминоуксусной кислоты, 1 -аспарагина, И.-р-аланина, DI -P-фенил-а-аланина, DL-валина, 1 -гистидина солянокислого, 1 - глутаминовой кислоты, 01 - лейцина, Р1 - лизина солянокислого, DL-метионина, DL-норвалина, И -норлейцина, DL-орнитина солянокислого, L — цистеина солянокислого, И - серина, 01 - триптофана, 1 -оксипролина и пролина, наносят на хроматографическую бумагу Filtrak № 14. Бумагу высушивают и производят хроматографирование в системе растворителей н-бутиловый спирт — ледяная уксусная кислота — вода (4: 1: 5 — верхний слой). Через 18 ч хроматограмму высушивают в термостате при 70 С и опрыскивают растворами (как в примере 1) тиосемикарбазона-3 1-метилизатина и его гексаметиленбиспроизводного. После нагревания хроматограммы в течение 3 — 5 мин при 115 С проявляются только пятна пролина.

Предлагаемые реагенты не дают цветных пятен на хроматограммах с 1-аминокислотами (за исключением пролина), даже в количестве 20 мг. В то же время пролин дает заметное зеленое пятно уже при количестве

1,0 мг, при 20 мг пятно является темно-синезеленым, фон хроматограммы — светло-оранжевый. тельность выявления пролина почти аналогична предыдущему способу.

Предлагаемые реагенты позволяют быстрее и качественнее по сравнению с существующи5 ми методами проводить анализ по определению наличия пролина в аминокислотной смеси.

Формул а изобретения

Применение тиосемикарбазона-3 1 - метилизатина и его производного 1,6-бис-(1 - метилизатинтиосемикарбазон - 3- ил-4) гексана общей формулы

20 где R — водород или — (СН2) 6 —, в качестве реактива для качественного определения пролина.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США № 3253991, кл. 424 — 274, 1966.

30 2. Аналитические методы белковой химии.

М., изд-во иностранной литературы, 1963, с. 491 — 560.