Способ определения содержания фосфолипидов в сливочном масле

Способ определения содержания фосфолипидов в сливочном масле

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (») 567I33

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 23.04.75 (21) 2128806/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.07.77. Бюллетень № 28

Дата опубликования описания 08.08.77 (51) М. Кл. - G 01N 33/04

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 637.1.002 (088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Г. 3. Якубов и Г. П. Браверман

Всесоюзный научно-исследовательский институт холодильной промышленности (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

ФОСФОЛИПИДОВ В СЛИВОЧНОМ МАСЛЕ

Изобретение относится к пищевой промышленности.

Известны различные способы определения содержания фосфолипидов в сливочном масле. Наиболее близким к изобретению решением поставленной задачи является широко используемый в настоящее время способ экстракции:фосфолипидов из плазмы сливочного масла с последующим хроматографированием экстракта фосфолипидов в тонком слое силикагеля.

Известный способ экстракции фосфолипидов заключается в следующем.

Сливочное масло (80 — 100 т) расплавляют при температуре 45 С и отделяют плазму центрифугированием. Плазму выдерживают при низких положительных температурах и удаляют застывшие частицы молочного жира.

Полученную плазму разбавляют дистиллированной водой, добавляют последовательно

NaC1, концентрированный раствор аммиака, этиловый спирт, смесь петролейного и диэтилового эфиров, встряхивают и отделяют орга-. ническую фазу. Затем к водной фазе вновь добавляют этиловый спирт, смесь эфиров, встряхивают и отделяют органическую фазу.

Объединенные экстракты (органическая фаза) упаривают в вакууме, и полученный концентрат используют для определения фосфолипидов методом тонкослойной хроматографии.

Однако на осуществление такого способа требуются значительные затраты сливочного масла, реактивов, труда и времени, при отборе плазмы сливочное масло необходимо выдерживать в течение довольно длительного промежутка времени при 45"С, что может привести к частичному гидролизу и окисле10 нию фосфолипидов. Известным способом удается извлечь не более 90% фосфолипидов сливочного масла.

Целью изобретения является интенсификация процесса, обеспечение полного выделения фосфолипидов и исключение изменения фосфолипидов в процессе анализа.

Для этого по предлагаемому способу навеску сливочного масла растворяют в хлороформе с получением хлороформного экстракта

20 фосфолипидов с молочным жиром и нерастворимого белково-фосфолип идно го остатка, на который воздействуют метиловым спиртом для получения метанольного раствора фосфо. липидов с последующим удалением метанола

25 упариванием в вакууме и смешиванием выделенных фосфолипидов с хлороформным экстрактом, полученный объединенный раствор наносят капилляром в одну точку на тонкий слой сорбента и затем хроматографируют в

30 системе растворителей, например хлоро567133

Содержание фосфолипидов, чО

Образец, ро

Содержание влзги, %

Масло по известному способу по предложенному способу

0,126 0,006"

0,139 0,004

0,122 0,008

0,139 0,003

0,166 0,018

0,188 0,001

0,185 0,012

0,189 0,020

Слздкосливочиое

„Крестьянское"

* Среднее значение + стандартное отклонение (из пяти опытов).

Примечание. Определение фосфолипидов по обоим способам производят после хроматографии экстракта фотодеисиметрическим методом.

Формула изобретения

3 форм — метанол — аммиак (25% -ный) в соотношении 14:6: 1.

Пример. К 1 г сливочного масла добавляют 1,3 мл хлороформа, выдерживают в течение 30 мин, фильтруют через бумажный фильтр, осадок на фильтре промывают 0,5 мл хлороформа и затем отдельно 2 мл метилового спирта, после чего осадок (белок) отбрасывают. Спирт удаляют в вакууме при комнатной температуре, и к остатку приливают хлороформный экстракт. Объем смеси доводят до 2 мл хлороформом.

Полученный хлороформный раствор фосфолипидов и молочного жира используют для определения содержания фосфолипидов. С этой целью 100 мкл раствора наносят стеклянным капилляром (внутренний диаметр

0,5 мм, длина 40 мм) в одну точку в виде пятна (диаметр не более 12 мм) .на хроматографическую пластину с тонким слоем силикагеля КСК (200 меш).

Для приготовления хроматогра фической пластины (12) 18 см) тонкий слой из смеси силикагеля (6,0 г), гипса (0,3 г) и воды (15 мл) высушивают на воздухе в течение

24 час, активируют 40 мин при 105 С. При нанесении хлороформного раствора липидов сливочного масла на тонкий слой силикагеля

КСК фосфолипиды прочно сорбируются в точИз представленных данных видно, что при определении содержания фосфора известным и предложенным способами большее извлечение фосфолипидов (на,25 — 35%) наблюдается при использовании предложенного способа.

Отсюда следует, что при использовании известного способа истинное содержание фосфолипидов удается определить лишь с большой ош и б кой.

На чертеже представлены результаты тонкослойной хроматографии на силикагеле КСК фоофолипидов сливочното масла:

1 — сладкосливочное масло, фосфолипиды определены известным способом;

I I — сладкосливочное масло, фосфолипиды определены предложенным способом;

III — «крестьянское» сливочное масло, фосфолипиды определены известным способом;

IV — «крестьянское» сливочное масло, фос5

25 ке нанесения, в то время как нейтральные липиды (молочный жир) образуют пятно значительно большего диаметра из-за их леткой растворимости в хлороформе. При последующем хроматографировании в системе растворителей нейтральные липиды отделяются от старта и передвигаются с фронтом системы, а фосфолипиды в этой системе образовывают четкие компактные пятна, соответствующие отдельным фракциям фосфолипидов. Хроматографию осуществляют в системе хлороформ — метанол — 25%-ный аммиак (14: 6: 1 по объему.).

После хроматографическото разделения пластину проявляют реактивом Васьковского и Костецкого, с которым только фосфолипи.ды дают синие продукты реакции. Проявленные хроматограммы подвергают фотоденситометрированию для определения содержания суммы и отдельных фракций фосфолипидов.

Следует отметить, что хроматограммы можно использовать и для определения содержания фосфолипидов другим путем, т. е. экстракцией фосфолипидов из силикагеля с последующим определением липидного фосфора сжиганием.

Результаты определения содержания фосфолипидов в сливочном масле по известному и предлагаемому способам приведены в таблице. фолипиды определены предложенным способом;

1 — 6 — кефалин, лецитин, сфингомиелин, серинфосфатид, инозитфосфатид, фосфатидные кислоты соответственно.

При использовании известного способа выделения фосфолипиды частично разрушаются, поскольку, помимо основных фракций, на хроматограмме выявляются продукты их частичного разрушения (фосфатидные кислоты). В то же время при использовании предложенного способа продукты изменения фосфолипидов на хроматограмме не обнаруживаются (см. чертеж).

Способ определения содержания фосфолипидов в сливочном масле, предусматриваю567133

+0&У/Р ф,Ф

М

Спирт о 1 е—

Составитель И. Привалова

Техред М. Семенов

Реда: тор H. Хубларова

Корректор Д. Брахнина

Заказ 1834/16 Изд. ЛЪ 607 Типаж 1109 Г1од:шсное

Ц11ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, «р. Сапунова, 2 щий извлечение фосфолипидов с использованием хлоро форма и метиловото спирта и тонкослойную хроматографию выделенных фосфолипидов на силикателе, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности анализа, навеску сливочного масла растворяют в хлороформе с получением хлороформного экстракта фосфолипидов с молочным жиром и нерастворимого белковофосфолипидното остатка, на который воздействуют:метиловым спиртом для получения метанольного раствора фосфолипидов с последующим удалением метанола упариванием в вакууме и смешиванием выделенных фосфолипидов с хлороформным экстрактом, а полученный объединенный раствор наносят капилляром в одну точку на тонкий слой сорбента и затем «роматографируют в системе растворителей, например хлороформ — метанол — ам10 миак 25 -ный в соотношении 14: 6: 1.