Способ получения оксидазы д-аминокислот

Способ получения оксидазы д-аминокислот

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (11) 567748 (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено27.04.76 (21) 2352115/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано05.08.77. Бюллетень № 29 (51) М. Кл

С 12 D 13/10

С 07 G 7/026

Государственный квинтет

Совета Мнннстров СССР оо делам нэооретеннй н открытнй (53) УДК 577.15. .07(088.8) (45) Дата опубликования описания,2 .09.77 (72) Авторы изобретения

Д. Я. Кукуранс, П. С. Ругайнис и А. К. Арен (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКСИДАЗЫQ -АМИНОКИСЛОТ

Изобретение относится к способам получения очищенных ферментов, а именно оксидаэы Д-аминокислот (К.Ф. 1.4.3.3.), которая используется в биохимических исследованиях при анализе аминокислот, б

Известен способ получения оксидазы Д-аминокислот из животного сырья, включаюший гомогенизацию сырья, экстракцию гомо-гениэата буферным раствором, очистку экспракта бензойной кислотой, разрушение комп -IO лекса бенэойная кислота -фермент, освобождение от балластных белков и выделение фермента (11

С целью повышения вьмода целевого продукта и упрошения процесса по предлагаемо-15 му способу используют бензойную кислоту, ковалентно связанную с водонерастворимой матрицей-силохромом С-80 посредством

N -сукцинил f -аминопропилтриэтоксисиланах и очистку осуществляют при рН 7,8- r Ы

8,9.

При этом освобождение от балластных белков проводят раствором хлористого натрия в буферном растворе.

Пример 1. Исходное сырье -25 г 25

2 коры свинных почек гомогенизируют. Гомогенат экстрагируют 0,02 М пирофосфатным буферным раствором (рН 8,3). Нерастворимые примеси отделяют центрифугированием (1 ч, 1000о ). После этого 50 мл полученного экстракта с обшей активностью оксидазы 3 -аминокислот 234 Е и специфической активностью 0,60 E/ìã пропускают через .хроматографическую колонну, наполненную 25 r сорбента, представляюшего бензойную кислоту, ковалентно связанную с аэросилоь -Силохромом С-80 посредством

N -сукцинил- f -аминопропилтриэтоксисилана и уравновешенную 0,02 М пирофосфатным буферным раствором (рН 8,3), со скоростью 15 мл/ч. Далее сорбент отмывают от примесей 200 мл 0,02 М пирофосфатного буферного раствора (рН 8,3), содержашего 1 М хлористого натрия, а затем дистиллированной водой.

Десорбцию адсорбированного фермента осушествляют пропусканием через i колонну

50 мл 0,5 М раствора D> L -аланина.

Чистоту полученного ферментного препарата определяют диском-электрофорезом на

567748

Составитель Т. Серебренникова

Редактор Л. Гончарова Техред Н. Андрейчук Корректор. С. Юдченко

Заказ 2692/19 Тираж 541 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета Совета Миьистров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-ÇS, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

7,5%-ном полиакриламидном геле. В результате получают одну зону, что свидетельствует о гомогенности препарата.

Общая активность полученной оксидазы

2 -аминокислот 230 Е. Специфическая 5 активность 312 Е/мг. Выход 98%.

Пример 2. Исходное сырье -. 15 r коры свиных почек гомогенизируют. Гомогенат экстрагируют 0,02 М пирофосфатным бубуферным раствором (рН 8,3). Нераство-1 l0 римые примеси отделяют центрифугированием (1 ч. 1000 g ). После чего 30 мл полученного экстракта с общей активностью

l оксидазы 23 -аминокислот 139 Е и специфической активностью 0,55 Е/мг пропуска 1Ь о ют через термостатированную {2 С) хроматографическую колонну, наполненную 20 r сорбента, представляющего бензойную кис-- «" лоту, ковалентно связанную с аЪросилоМ-силохромом С-80 посредством И -сукцинил- 29

-аминопропилтриэтоксисилана и уравновешенную 0,02 М пирофосфатным буферным раствором (pH 8,3), со скоростью ., 15 мп/ч. Далее сорбент отмывают от примесей 200 мл 0;02 М пирофосфатного бу 25 ферного раствора (рН 8,3), содержащего

1 М хлористого натрия, и затем дистиллированной водой. Десорбцию адсорбированного фермента осуществляют пропусканием ; через колонну 30 мл 0,5 М раствора Э 1аленина.

Общая активность гомогенного ферментного препарата 138 Е. Специфическая активность 309 E/ìã. Выход 97%.

Формула изобретения

l. Способ получения оксидазы 3 -аминокислот из животного сырья, включающий гомогенизацию сырья, экстракцию гомогенизата буферным раствором, очистку экстракта бензойной кислотой, разрушение комплекса бензойная кислота -фермент, освобождение от балластных белков и выделение фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощении процесса, используют бензойную кислоту, ковалентно связанную с водонерастворимой матрицей -силохромом

С-80 посредством . М -сукцинил- . -аминопропилтриэтоксисиланом и очистку осуществляют при рН 7,8-8,9.

2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю m и йс я тем, что освобождение от балластных белков проводят раствором хлористого натрия в буферном растворе.

Источники информации,. принятые во вни мание при экспертизе:.й РЕ, Lr mby, КЖазаец "Л-Агино head Crom

Рщ Nidney", Siochemica8 OreparationaN-3, 1.олдос, Sydne, S,Чтец,, 1968, 7. 12.: р. 29-41.