Способ получения препарата антигенов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕ Н ИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистимеских

Республик (11) 568378!

» (61) Дополнительный к патенту(22) 3 »»B e Ho 14.03.73 (21) 1900044/15 (23) Приоритет (32) 08 06.72 (31) 7220646 (33) Франция (43) Опубликовано 05.08.77. Бюллетень ¹29 (45) Дата опубликования описания 07.07.77 (51) М. Кл . С12К1/04

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР по делам иэооретений и открытий (53) УДК 616.078 (088.8) (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Ив Моро, Кристиан Стельман и Жан Тер (Франция) Иностранная фирма

"Энститю Мерье" (Франция) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА АНТИГЕНОВ

Изобретение относится к способам приготовления антигенов микроорганизмов, предназначенных для реакций пассивной гемагглютинации.

Известны способы получения препарата антигенов для пассивной гемагглютинации, включающие инактивацию микроорганизмов и связывание их с эритроцитами.

Недостатком известного способа является получение препаратов с невысокой устойчивостью во времени.

С целью повышения устойчивости препарата антигенов, например, вирусных или бактериальных, предлагается связывание микроорганизмов с эритроцитами осуществлять с помощью диальдегида, например глутарового альдегида, с последующей лиофилизацией полученного препарата.

Для инактивации обычно используют Р-пропиолактон или твиновый эфир.

Пример 1. Приготовление препарата антигенов бычьего аденовируса 11I.

Получают известным способом культуру бычьего аденовируса 111 на клетках из телячьей почки.

После сбора получают раствор с титром по вирусу

90 †1 мг/мл, инактивируют его Р-пропиолактоном, связываютантигеныс эритроцитами барана с

2 помощью глутарового альдегида (конечная концентрация альдегида 0,7%), промывают в буферном фосфатном растворе (рН 7,6) ипроводятлиофилизацию в присутствии субстрата из смеси лактозапептон — фосфатный буферный раствор. Полученньп» препарат обладает высокой стабильностью.

Пример 2. Приготовление антигенов ньюкаслской болезни.

От собранного вируса, выращенного на аллан1р тоисной жидкости яиц известным способом, отдео ляют оболочку, вводя твиновый эфир при 4 С, центрифугируют для удаления плавающего сверху продукта, который содержит оболочки, осадок с вирионами (титр по вирусу 80 мг/мл) промывают, вводят глутаровый альдегид (конечная концентрация 0,5%), промывают в буферном растворе, проводят лиофплизацию и получают стабильные антигены.

Пример 3, Приготовление антигенов бе20 шенства.

Получают культуру вирусов бешенства на клетках, собирают вирусы, отделяют оболочки после введения твинового эфира и центрифугирования, в полученный раствор (титр по вирусу 150 мг/мл)

25 добавляют глутаровый альдегид (конечная кон568378

Составитель Е. Арская

Техред А. Демьянова

Редактор Т. Шврганова

Корректор И. Гоксич

Заказ 1803/52

Тираж 541 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий

113035. Москва, Ж-35, Рвушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород. ул, Проектная, 4 центрация 0,8%), промывают в фосфатном буферном растворе, проводят лиофилизацию и получают стабильные антигены, Аналогичным образом получают бычьи антигены Herpes virus, связанные с эритроцитами барана.

Пример 4. Приготовление язвенных антигенов.

Готовят язвенные антигены штамма Herpes

virus из какой-нибудь культуры, например типа

Френкеля, концентрируют их, очищают путем ультрацентрифугирования в градиенте сахарозы. Перед концентрированием проводят инактивацию с помощью /1-пропиолактона. Затем связывают антиген с эритроцитами с помощью глутарового альдегида (концентрация 0,2 — 1%) при комнатной темпера- 15 туре в течение 1 час, центрифугируют, промывают осадок два раза в фосфатном буферном р.створе при рН 7,6, суспендируют в буферном растворе и проводят лиофилизацию в присутствии субстрата, образованного из смеси растворов лактозы (200г), 20 .,дигона (40 г) и воды (до 1 л) и антисептика.

Из приготовленных и лиофилизованных таким образом антигенов, усзойчивых в течение длительного периода времени, и после шести месяцев получают суспензию в дистиллированной воде с тем 25 же самым титром по вирусу, что и перед лиофилизацией.

Исследуемую сыворотку инактивируют путем на ревания до 56 С, обрабатывают эритроцитами лля устранения естественной агглютинации, ломе- 30 шают в чашечки, содержащие вначале один и тот же ооъем буферного раствора, и вводят одинаковые количества испытуемых препаратов язвенных антигенов. связанных с эритроцитами.

В контроле в чашечки помещают эквивалентное 35 количество эритроцитов без антигенов. После перемешивания выдерживают чашечки l час при комнатной температуре и определяют реакцию при различных разведениях сыворотки.

При очень позитивной реакции констатируют 40 образование таблеток с краями, сложенными в виде фестона. При позитивной реакции получают более обширные микроскопические агглютинаты или по меньшей мере достаточно гомогенную пленку эрит4 роцитов. При негативной реакции эритроциты собираются в центре донышка чашечки в виде небольшого правильного кольца.

Аналогичные результаты получают для язвенных антигенов, приготовленных предлагаемым способом из штаммов А. Al lier 60 и О. Zansanne 65.

Пример 5. Приготовление препарата антигенов инфекционного бронхита.

Приготовляют корона-вирус инфекционного бронхита на яйцах с девятидневным зародышем.

Суспензию вирусов, представляющую собой аллантоисную жидкость, собирают через 24 час после инокуляции, концентрируют ее в 25 раз путем ультрафильтрации с последующей очисткой ультрацентрифугированием в градиенте сахарозы в течение 3 час при скорости 25000 об/мин, Отобранную очищенную часть, соответствующую пику оптической регистрапии, обрабатывают твиновым эфиром, титруют в белках вируса способом Фолина, связывают вирус с эритроцитами с помощью глутарового альдегида и проводят лиофилизацию в присутствии субстрата из смеси растворов лактозы, пептона, воды и антисептика. Полученный препарат в течение длительного времени стабилен и приблизительно в

100 раз более чувствителен, чем препарат, приготовленный осаждением в агаровой среде.

Формула изобретения

1. Способ получения препарата антигенов, например, вирусных или бактериальных, для реакции пассивной гемагглютинации, включающий инактивацию микроорганизмов и связывание их с эритроцитами, отлича ющий ся тем, что, с целью повышения устойчивости препарата, связывание микроорганизмов с эритроцитами осуществляют с помощью диальдегида с последующей лиофилизацией полученного препарата.

2. Способ по и. 1, от лича ющийс я тем, что в качестве диальдегида берут глутаровый альдегид.

3. Способ поп. 1, отличающийся тем, что инактивацию проводят с помощью P - пропиолактона или твинового эфира.