Антибиотик коралломицин и способ его получения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Сввз Советских

ri» 569360

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Социалистических Республик (51) М. Кл.г тМ-Г) Г4 л 27. с,, г Р (61) Дополнительное к авт- свид-ву— (22) Заявлено 26.05.75 (21) 2139239/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 30,10.79. Бюллетень № 40 (45) Дата опубликования описания 30.10.79

Государственный комитет

СССР ао делам изобретений н открытий (53) УДК 615.779.931 (088.8) Ф (72) Авторы изобретения

В. И. Фролова, А. Д. Кузовков, С. М. Рудая и

Н. K. Соловьева

Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков (71) Заявители (54) АНТИБИОТИК КОРАЛЛОМИЦИН

И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового антибиотика, который может найти применение в медицине.

Цель изобретения — расширение числа п рименяемых в медицинской практике антибиотиков, обладающих антибактериальной активностью.

Предлагаемый антибиотик коралломицин и способ его получения в патентной литературе не описаны.

Коралломицин представляет собой порошок оранжевого цвета, состав которого отвечает формуле С34НгзОр, мол. вес 580 (определен при помощи масс-спектрометра lS высокого разрешения).

Антибиотик легко растворим в эфире, хлороформе, этилацетате, диметилформа,миде, диметилсульфоксиде, спирте, метаноле, в воде при рН)9,0. Не растворяется в 20 воде при рН 7,0 и водных растворах кислот.

Разбавленные растворы коралломицина (1 у/мл) окрашены в желтый цвет, с ,увеличением, концентрации появляется 25 оранжевый оттенок, 10 -ный раствор темнокрасный. При изменении рН окраска раствора не изменяется. В УФ-свете не флуоресци рует.

В УФ-спектре антибиотика (в спирто- зо

ВоМ растворе) наблюдаются максимумы поглощения при 228, 268 и 420 нм. В ИКспектре имеются полосы поглощения 3400 (ОН-группы), 2980, 2935, 2865 (СНз-, СНг-группы), 1710 (С = О-группа), 1625 см- (сопряженная двойная связь).

В спектре ЯМР Н коралломицина (CDCl3, бтмс = О) в области 6,2 — 7,5 м. д. находятся сигналы семи протонов, из них три могут относиться к ароматическим протонам, расположенным рядом. Имеются сигналы четырех метильных групп (2,01, 1,68, 1,4 и 1,23 м. д.): одна (2,01 м. д.) при двойной связи, две другие (1,4 и 1,23 м. д.) в группировках

СНз — С вЂ” 0 —. Сигналы 10,01 и 10, 11 м. д. обусловлены протонами двух гидроксильных групп в виде хелатов. Метоксильные и ацетильные группы отсутствуют.

Коралломицин содержит гидроксильные группы, ацетилируемые уксусным ангид,ридом в пиридине. При этом получены два ацетильных производных: диацетат

СззНзг011 и тетраацетат С42Н36013.

По характеру УФ-спектра коралломицин имеет сходство с антибиотиками группы юлимицина-юлихрома и другими производными антрахинона.

569160

МинимвльiHaS1 подавляющая концентрвция, мкГ/Mл

Тест-культура

0,3 — 0,5

О,! 5 — 0,12

0,15 — 0,3

0,3-0,5

0,15 — 0,25

0,6 — 1,25

1,5 — 1,25

l,5 — 1,25

0,6 — 1,5

1,5 — 1,25

2,5 — 3,0

0,75 — 1,25

1,5 — 2,5

1,5 — 2,5

2,5

2,5 — 3,0

1,5 — 2,5

1,5 — 2,5

1,5 — 2,5

1,5 — 2,5

1,5 — 2,5

1,5 — 2,5

1 — 1,25

3

1(оралломицин активен по отношению к грам-положительным и кислотоустойчивым бактериям, включая штаммы, резистентные к антибиотикам, широко применяемым в медицинской практике.

Данные об активности коралломицина по отношению к различным бактериям приведены в таблице. вйусо!. phlei

То же, устойчивая к стрептомицину

» квнамицину

>> виомицину

» циклосерину

Staph. aureus 209P

То же, устойчивый к пенициллину

» » тетрвциклину

>> » стрептомици ну

» » канамицину

» » колимицину (неомицин)

>> » виомицину

» » олеандомицину

>> » эритромицину

» » актиномицину

» » 696-стрептомицину

>> » новобиоцину

>> » левомицетину

» » тайтомицину

» » виоларину 452/7

>> » фузидину

» » рифамицину

Strepf, pyogenes

Strepf. faecalis

Вас. subtilis 6633

E. cofi 675

Proteus vulgaris

Pseudomonas aeruginosa

Clebsiella pneumoniae

Антибиотик коралломицин синтезируется культурой актиномицета Act.

longispororuber, которая выделена из почвы Средней Азии, штамм 6795 — 38 — 12, на среде, содержащей основные источники углерода, азота и минеральные соли. Антибиотик экстрагируют из мицелия органическим растворителем, экстракт упаривают, из полученного при этом водного остатка антибиотики извлекают органическим растворителем, после отгонки которого получают неочищенный коралломицин в смеси с малоактивными индикаторными антибиотиками. Разделение осуществляют, используя различную растворимость антибиотиков в воде при рН)8 и в органических растворителях. Затем коралломицин очищают хроматографированием на водной кремневой кислоте и переосаждением из органических растворителей.

Для хроматографии как в тонком слое, так и в колонках используют кремневую кислоту, освобожденную от ионов метало

20 5 о

4 лов путем последовательной промывки

l%- ной соляной кислотой, водой, 0,5%- ным водным, раствором трилона Б, водой, метанолом и ацетоном. . Индивидуальность коралломицина vcтановлена методом тонкослойной хроматографии на водной кремневой кислоте в трех системах растворителей: хлороформ— метанол (9:1), R 0,55; петролейный эфир — эфир (3:7), R, 0,6; хлороформ— эфир (35:15), R, 0,5, при нанесении на пластинки 25 т вещества, проявлении при дневном свете по желтой окраске антибиотика или парами йода. На контрольных хроматограммах проявляется 1 у вещества.

Методика осуществления предлагаемого способа показана на следующих приме рахх.

Пример 1. Процесс глубинного биосинтеза осуществляют путем кульгивирования штамма 6795 — 38 — 12 Act. lortgispororUber на среде следующего состава, %: соевая мука 3,0; глюкоза 2,5; мел 0,5;

NaNO> 1,0; кукурузный экстракт 0,25; рН

7,0 — 7,1, Примерно через 96 ч ферментации от

16 л глубинной культуры отделяют мицелий (1,9 кг), Антибиотики извлекают из мицелия экстракцией 5,7 л ацетона. Экстракт упаривают в вакууме до объема около 1 л. 11олученный водный остаток подкисляют 10%.ным раствором соляной кислоты до рН 1 — 3 и антибиотик экстрагируют этилацетатом (3+300 мл).

К объединенным экстрактам добавляют фосфатный буфер с рН 8 и 10%-ный раствор едкого патра до рН 9,0 — 10.0. При этом в водную щелочную фазу переходит коралломицин, а в органическом слое остаются индикаторные антибиотики, обладающие слабой антибактериальной активностью.

Водную фазу отделяют (0,5 л), подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН 1 — 3 и антибиотик извлекают этилацетатом, после отгонки которого получают

l,5 г темно-красного маслообразного продукта. Его растворяют в эфире, наносят на 4 r водный кремневой кислоты, высушивают на воздухе, вносят в колонку (d = 3 см, 1 = 18 см) в смесь петролейный эфир — этилацетат (3:2) и элюируют той же системой растворителей.

Первые две фракции (бесцветную и светло-фиолетовую) отбрасывают, третью— оранжево-красного цвета — собирают, проверяют хроматографическую однородность в тонком слое и растворители упаривают досуха, Получают 0,42 r продукта, который растворяют в минимальном объеме эфира и выливают в 10-кратный объем гексана.

Выпавший аморфный осадок отделяют и второй раз переосаждают из смеси эфир— гексан. Получают коралломицин в виде

569160

6 ривают досуха, остаток растворяют в эфире, наносят на пластинки с водной кремневой кислотой, проявляют в системе петролейный эфир — этилацетат (3:2)Оранжевый слой с Кг 0,6 собирают, обрабатывают метанолом, полученный после отгонки растворителя продукт переосаждают из смеси эфир — гексан аналогично примеру l. Получают 8 мг коралломицина.

1. Антибиотик коралломицин, обладающий антибактериальной активностью.

15 Брутто-формула С34Н 30з, Мол. вес. 580, Максимум поглощения в УФ-спектре (в спиртовом растворе), нм: 228, 268 и 420.

Максимальные частоты поглощения в

20 I I K,— ñïåêòðñ (в КВг-диске), см : 3400, 2980, 2935, 2865, 1710, 1625.

Порошок оранжевого цвета, легко растворим в эфире, хлороформе, этилацетате, диметилформамиде, диметилсульфоксиде, 25 спирте, метаноле, в воде при pH)9,0, нерастворим в воде при рН 7,0 и в водных растворах кислот.

В УФ-свете не флуоресцирует.

2. Способ получения антибиотика ко30 ралломицина по п. 1, отличающийся тем, что штамм Actinomyces lougispororuЪег № 6795-38-12 выращивают на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отделяют мицелий, обрабатывают его органическими растворителями II из экстракта выделяют целевой продукт.

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Письман Техред Н. Строганова

Корректор А. Степанова

Изд. № 633 Тираж 549

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

П3035, Москва, К-35, Раушская наб, д 4/5

Заказ 7030

Подписное

Загорская типография Упрполиграфиздата Мособлисполкома

5 порошка оранжевого цвета (оттенки могут варьировать от оранжево-красного до оранжево-желтого), который высушивают в вакууме при 60 С. Выход 110 мг. Состав коралломицина отвечает формуле С34Н 30, мол. вес 580 (масс-спектрометр высокого разрешения), Лцетилирование коралломицина (60,9 мг) уксусным ангидридом в пи ридине при комнатной температуре приводит к получению смеси двух ацетильных производных, которые извлекают из разбавленной водой реакционной массы эфиром и разделяют на пластинах с водной кремневой кислотой в системе гексан — этилацетат (3:2), После двукратного проявления ацетильные производные № 1 (R г0,49) и № 2 (R < 0,2) элюируют эфиром, растворитель удаляют и остатки высушивают в вакууме при комнатной температуре.

Ацетильное производное М 1 п редставляет собой темно-желтый порошок состава C33H3zOII.

Ацетильное производное № 2 получают в виде светло-желтого порошка состава

С42Н36013 °

Пример 2. Антибиотики экстраги руют из 0,4 кг мицелия, полученного как в примере 1, экстракт упаривают до водного остатка, из которого смесь антибиотиков извлекают этилацетатом. После удаления растворителя получают малиново-красный препарат. Обработкой эфиром при комнатной температуре из него удаляют антибиотики-индикаторы. Остаток (20 мг) переносят в воду с рН 2 и антибиотик извлекают этилацетатом. Растворитель упаформула изобретения