"штамм (пигментообразующая разновидность "11-р") используемый для изготовления диагностических биопрепаратов

"штамм (пигментообразующая разновидность "11-р") используемый для изготовления диагностических биопрепаратов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О Л И С А Н И Е п1 57064l

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Оввз Оееетскик

Ссциалистичвскик

Реслублик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 15.12.75 (21) 2300328/15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51) М. Кл. С 12К 1/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 30.08.77. Бюллетень № 32 (53) УДК 616-002.525 (088.8) Дата опубликования описания 19.09.77 (72) Авторы изобретения Х. Х. Абдуллин, М, М. Нуралиев, А. К. Копеечкина и М. М. Нуралиева (71) Заявители Казанский ордена Ленина ветеринарный институт им. Н. Э. Баумана и Западно- Казахстанский сел ьскохозя йственный институт (54) ШТАММ MUCOBACTERIUM PARATUBERKULESIS OVIS (ПИГМЕНТООБРАЗУЮЩАЯ РАЗНОВИДНОСТЬ «11-Р»), ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСГИЧЕСКИХ

БИОПРЕПАРАТОВ

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой новую разновидность возбудителя паратуберкулеза овец, выделенную из патологического материала больной овцы и используемую в качестве антигена для приготовления паратуберкулина и диагностикумов для постановки реакции связывания комплемента (РСК).

Известно, что для аллергической диагностики крупного рогатого скота и овец применяется туберкулин для птиц или же паратуберкулин, приготовленный из возбудителя паратуберкулеза крупного рогатого скота (1).

Основным недостатком указанных диагностических препаратов является слабая специфичность, а следовательно, и эффективность для диагностики паратуберкулеза овец.

Из литературы также известно выделение и описание культур возбудителя паратуберкулеза овец, обладающих пигментообразованием (2), Однако в процессе пересевов такие культуры теряют свойство пигментообразования, и в связи с этим свои вирулентные и антигенные свойства, и потому сведений в литературе о возможности изготовления из этих культур микроорганизмов эффективных диагностических препаратов для овец нет, Целью изобретения является шамм Mucobacterium paratuberkulesis ovis (разновидность

«11-Р»), обладающий признаком высокой вирулентности — пигментообразованием, устойчивыми культурно-морфологическими и специфическими признаками, стойкими антигенны5 ми свойствами при использовании его в качестве аллергена для диагностики паратуберкулеза овец.

Штамм выделен из патматериала больных овец из неблагополучного по паратуберкулезу

10 хозяйства в 1967 году.

Выделенный штамм Mucobacterium paratuberkulesis ovis имеет следующие биологические характеристики.

Морфологические признаки. Маленькая кис15 лото-спирто-антиформиноустойчивая палочка, длиной 0,5 — 1,2 и шириной 0,2 — 0,5 мк, растет в аэробных условиях, неподвижна, спор, капсул не образует, полиморфна. В мазках из пораженной ткани палочки отличаются ха20 рактерным расположением в виде кучек, гнезд, реже попарно. Бактерии паратуберкулеза не окрашиваются водными растворами анилиповых красок, хорошо окрашиваются по способу Циль — Нильсена. При окраске по

25 Грам — Муху в клетках бактерий отмечается зернистость.

Культурально- физиологические свойства.

Пигментная культура на твердой, иногда на жидкой среде продуцирует оранжевый пиг570641

3 мент. Факультативный аэроб. На плотной кровяной среде рост появляется через 30—

40 дней. На поверхности кровяной среды с добавлением 5% микобактерий флей и 2% птичьего туберкулина появляется нежная наподобие слизи колония с желтоватым оттенком и ровной поверхностью. На жидких питательных средах Данкина, Мазур — Боева рост получен на 30 — 40 день в виде нежных мелких бело-серых островков. Рост 3 — 4 и последующих генераций отмечен на 17 — 23 день. На жидкой питательной реде рост представляется в виде нежных мелких бело-серых островков, которые заметны невооруженным глазом. Затем островки сливаются между собой и образуют на поверхности среды темно-серую пленку, которая при малейшем встряхивании разрывается и падает на дно колбы. По мере роста пленка утолщается, поверхность ее становится неровной, бугристой, цвет несколько изменяется и через 2 месяца принимает оранжевую окраску.

Биохимические свойства. Молоко не свертывает, желатину не размывает, кровяную сыворотку не изменят, практически не ферментирует углеводы.

Вирулентные свойства. Вирулентность штамма определена следующими показателями: при подкожном заражении в дозе 1,5 — 2,0 мл одно миллиардной взвесью морские свинки, кролики и овцы в течение 5 — 6 — 11 — 16 месяцев не имели ни местных, ни общих признаков заболевания.

У экспериментально зараженных овец установлено явление местной аллергической реакции на 30 — 45 день после заражения в ответ на внутрикожное введение аллергена из исходной культуры в обойме 0,2 — 0,3 мл.

Реакция выражалась появлением тестообразной припухлости, увеличением складки в несколько раз по сравнению с нормальной, повышением местной температуры.

Это свойство исчезает через 3 — 4 пассажа с интервалом 1 — 1,5 месяца, на искусственных средах.

Антигенные свойства. Из пигментной культуры изготовлен антиген для постановки реакции связывания комплемента с положительной паратуберкулезной сывороткой, установлен титр 1: 100 при разведении положительной сыворотки 1: 5, 1: 10, 1: 20. Были поставлены контроли с нормальной и положительной сыворотками с антигеном и без антиген а, а также контроль гемсистемы.

Показания всех контролей правильны.

Формула изобретения

Штамм Mucobacterium paratuberkulesis ovis (пигментообразующая разновидность «11-Р»), используемый для изготовления диагностических биопрепаратов. Хранится на кафедре физиологии и биохимии животных Западно-Ка5

50 захстанского сельскохозяйственного института

Казахской ССР.

Морфологические признаки. Тонкие короткие палочки, колебание длины в пределах

0,5 — 1,2, ширины — 0,2 — 0,5 мк, грамотрицательные, неподвижные, спор и капсул не образуют. В мазках из культур тонкие палочки располагаются кучками в виде отдельных гнезд.

Культурально-физиологические признаки.

Растет на специальных плотных яичных средах с добавлением фактора роста, например экстракта микобак|ерий флей и других при температуре 36 — 38". Из жидких питательных сред оптимальными для данного штамма являются среды Данкина и Мазур — Боева.

Факультативный аэроб, рост на плотных питательных средах появляется на 30 — 40 сутки, колонии в виде слизистого налета, желтооранжевого оттенка, с ровной поверхностью, не очерченными краями. На жидких питательных средах растет на поверхности в виде темно-серых островков, которые через 8 — 10 суток сливаются, образуя впоследствии сплошную пленку с морщинистой поверхностью с характерным оранжево-бурым оттенком. На картофельной среде растет в виде слизистого налета с оранжевым оттенком.

Биохимические свойства. Молоко не сверты вает, желатину не разжижает, свернутук бычью сыворотку не изменяет. В среде Данкина с добавлением углеводов и многоатомных спиртов практически не проявляет ферментативные свойства, за исключением глицерина.

Вирулентные свойства. В условиях экспериментального заражения не установлены клинические признаки у лабораторных животных.

Антигенные свойства. Экстракты 2-х месячных культур Mucobacterium paratuberkulesis ovis, используемые в качестве антигена для постановки РСК, выявляют у экспериментально зараженных и клинически больных паратуберкулезом животных в 90 — 95% случаях в разведении сыворотки 1: 5 — 1: 10.

Аллерген, изготовленный из данного штамма по внутрикожной пробе у инфицированных лабораторных животных и клинически больных овец дает четкую положительную реакцию.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ветеринарное законодательство. М., «Колос», 1972, т. 1, с. 227, 640.

2. Нуралиев M. М. и др. Методы выделения культуры паратуберкулеза на различных питательных средах. — Диагностика, профилактика и лечение заболеваний сельскохозяйственных животных. Научные труды Саратовского сельскохозяйственного института, 1974, т. 15, с. 111 — 114,