Штамм 120, несущий плазмиду , контролирующую окисление нафталинадо салициловой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистинесних

Реслублин

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДВТЙЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) ЗаЯвлено 31.12.75(21) 2300351/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 05 09 77Бюллетень № 33 (45) Дата опубликования описания 13.10.77 (5й) М Кл г

С 12 9 13/Pp

Государстввннвй ноинтвт

Воввтв Инннвтров СССР ов долам нзобрвтвннв а открытнй (53) УДК 576.8. .093 (088.8) (Т2} Авторы изобретения

Г. К.- Скрябин, А. М. Боронин, И, И. Старовой

/

/ ,1

l ", : . у

Институт биохимии и физиолог ии микроорганизмов AB Ф:-СР.. (7!) Заявитель (54) ШТАММ Pseudomsnas putida12A, НЕСУЩИЙ

ПЛАЗМИДУ Я@.-1, КОНТРОЛИРУКйЦУЮ

ОКИСЛЕНИЕ НАФТАЛИНА ДО САЛИЦИЛОИОЙ

КИСЛОТЫ

Изобре те ни е отн оси тся к микр оби оп огической промышленности. известен штамм рода Pseudamanas несущий

I ппазмиды, контролирующие способность к утилизации угпеводор одов (1) .

Недостатком известного штамма явпяег ся то, что ппазмида несет генетический материап, детерминирующий окисление нафтапина до катехопа ипи до более попной де- 1В градации этого соединения.

Целью изобретения является получение штамма, несущего ппазмиду, контролирующую окиспение нафтапииа топько до сапипиповой кислоты. l5

Поставленная цепь достигается тем, что используют штаммы Pseudo onas риЫп12 A.

Штамм PseudoInonas puhda 12 А выдепен из почвы с территории Енакиевского коксохимического завода, 26

Штамм PseudoInanas putida 12A крапив KoIIïI.ênèè инс гитуTB биохимии и физиопогии микроор .анизмоп АН C:ÃÑÐ под номером 12 А. И

Культурально-морфологические признаки

Клетки прямые, напочковидные, размеры (2-5) х (0,5 р 7) мк, подвижные перитрихи, грамотрицатепьйые, неспорфносные.

Мясо-пептонный агар. Колонии бесцве рные. гпадкие, в виде тонкого прозрачного папе,а, кра и р о нный.

Мясо-пептонный бульон. Образует муть„ пленку и фпуоресцируюший пигмент.

Картофель. Рост хороший, образует слизь.

На стандартных средах Кинга образует фпуоресцируюший пигмент, но не продупируе r пи оциа ни н.

Физи пого-биохимические признаки.

Аэроб, дает положительную оксидаз ную реакцию и не накапливают в клетках попп- р -оксимаспяную киспоту. Растет при

Ф-37 С не растет при 41 С. ООптимань ная температура дпя роста 28-30 С.

Отношение к сахарам. Использует l1-глюкозу, Д-фруктозу, Д-маннозу, Д-гапактозу, L -арабинозу, сахарозу, пактозу, рафинозу. Не усваивает Д-ксипозу и трегаи озу.

571512

1Ц1ИИПИ 3икяз 3202/17 Тираж 541

Подписи-.>е

Фииияи ППП "Патент", r. Ужгород, уи. Проектная, 4

Отношение к органическим киспотам.

Испопьэует ацетат, пропионат, бутират, сукцинат, фумарат, пируват, бензоат, ноксибензоат, сапиципат.

Отношение к углеводородам. Испопьзуе 5 нафтапин в качестве источника угперода, не использует Н-апканы (Сц - С;и).

Отношение к источникам азота. Ассимипи.

Ъ рует аммонийный и нитратный азот.

Жепатин не разжижает. 10

Крахмал не гидропизует.

Мопоко не пептонизирует..

Мезоинозит не ассимипирует.

Гпицин, бенэипамин и гиппуровую киепоту ассимипирует.

Пример 1. Исходный штамм Pseudo

rrianus putida 12А выращивают в течение 20 ч на косяках с мясо-пептонным

arapoM (МПА) и 10 мп суспензий выросшей купьтуры инокупируют в жидкую сре- 20 ду обьемом 100 мп, разпитую в медицинские копбы на 750 мп.

Состав среды, г/п:

К НР0„ 10,0

Кй,Р0, 1,0

4,5

Ng S 0„1H 0 0Ä05

Fe 8 Он 7Н О 0,01

СЬарн 0 0,01

0,002 З0

Нафталин 10,0

Вода дистиппированная Остапьное.

Культуру выращивают в копбах на круговой качалке . (180 об/мин) при 30 С. В процессе роста купьтуры на нафтапине в

35 купьтурапьной жидкости накаппивается сапициповая киспота, дпя определения содержания которой иэ купьтурапьной жидкости регупярно отбирают пробы в объеме 1 мп.

Сялициповую киспоту опредепяют фотоэпект.

40 рокалориметрическим методом с испопьзовянием реагента Fe(NO> )», дающего фиолетовое окрашивание с сапициповой киспотой. Концентрацию сяпициповой киспоты

45 опредепяют по кяпибровочной кривой.

Максимяпьное содержание саш|циповой киспоты в купьтурапьной жидкости, равное

0,2 г/100 мп среды (ипи 2 г/л, т. е. выход 20%), наблюдается спустя 40 и ферментяции.

П р н м ". р 2. В опытах исиопьзуют эксконъюгяитный штамм Pseudcmonas putida

12А-12К, сконструированный в резупьтяте перенося ипязмиды NRl. -1 из штямма Рк. о1 с1а 12А-61 вдРУгой безппазмид иый штамм, Рф..put(ga, 12А-12.

Подготовка. и ход опытов как в примере 1, за исключением одного момента: в этом случае в среду добавпяют урацип

5 мг/100 мп. Выход сапициповой киспоты, также как и в примере 1, состявняет

0,2 г/100 мн среды (ипи 2 г/ц, т. е.

20%) поспе 40 ч ферментяции.

Формупа изобретения

Штамм Pseudomonos рцЫц12А, несущий ппаэмиду МВ l, контропирукяцую окисление нафталина до сапициповой кислоты,хранится в коппекции института биохимии и физиопогии микроорганизмов(, АН СССР под номером 12 А.

Купьтурапьно-морфопогические признаки.

Клетки прямые, папочковидные, размеры (2-5)х(0,5-0,7) мк, подвижные перитрихи, грамотрицатепьные, неси ор оносные.

Мясо-пептонный агар. Копонии бесцве| ные, гпадкие, в виде тонкого налета, край ровный.

Мясе-пептонный бульон. Образует муть, цленчу и фпуоресцирующий пигмент.

Картофепь. Рост хороший, образует спиэь.

На стандартных средах Кинга образует фпуоресцирующий пигмент, пиоцианин не продуцирует.

Фиэиопого-биохимические признаки.

Аэроб, дает попожитепьную оксидаэную реакцию и не накаппивает в кпеткях поли-ф-оксимаспяную киспоту. Растет при 4-37 С; не растет при 41 С. Оптимяпьная температура роста 28-30 С.

Отношение к сахарам. Испоиьзует Ll-гпюкоэу, Д-фруктозу, Д-маннозу, Д-гяпяктозу, -арабиноэу, сахароэу, пактоэу, рафино-зу, не усваивает Д-ксипоэу и трегялозу.

Отношение к угпеводородям. Испопьзует нафтапин в качестве источника угиеродя, не испопьзует Н-апканы (C - С), Q °

Отношение к источникам азота. Ассими пирует аммонийный и нитрятиый азот. Жепатин не разжижает.

Крахмяп не гидропизует.

Мопоко не пеп.ониэирует.

Мезоиноэит не яссимипируег.

Источники информации, ирииягые во вни мание при экспертизе .

1. Патент США № 3813316, кп. 195-28. Р, оиуби. 1972.