Способ приготовления антигена из инфекционного ринотрахеита пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота для реакции преципитации в геле

Способ приготовления антигена из инфекционного ринотрахеита пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота для реакции преципитации в геле

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Соввтскма

СоцИалистимвскик

Республик ()ц 573500

К АВТОРСКОМУ СВИДИТИЛЬСТВУ (6l) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлеыо30.12.75 (21) 2307713/15 с присоединением заявки И (23) Приоритет (43) Опубликовано25.09.77,Бюллетень М 35 (45) Дата опубликования описания 24.10.77 (51) М. Кл.

С 12 К 1/00

А 61 К 39/12

Государстовнный номнтат

Соаота Мнннстроа СССР ао долам нзобрвтонно н открытнй (53) УДК 576.8.097.2 (088.8) (72) Авторы изобретении

Е. B. Андреев, Г. А. Красников и А. А. Кучерявенко

Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ИЗ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО

РИHOTPAXEHTA-ПУСТУЛЕЗНОГО ВУЛЬВОИАГИНИТА КРУПНОГО

РОГАТОГО СКОТА ДЛЯ РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ В ГЕЛЕ

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к получению биологических препаратов, например ангигенов, для диагностики вирусных болезней животных, и может быть использовано в биологической промышленности и в работе ветеринарных диагностических лабораторий.

Известен способ получения ангигена для реакции препипигации в геле из вируса инфекционного ринограхеига-пусгулезного Ту вупьвовагинига крупного poramro скота путем размножения его в культуре ткани и последующего выделения антигена(1) .

Недостатком этого способа является 15 низкий уровень содержания преципитирующего ангигена в используемом для реакции купьтурапьном вирусе и потеря его внутри инифкцированных клеток.

Известен также способ получения антиге-Ю на для реакции преинпитации в геле из культурвпьного вируса инфекционного ринограхеига-пусгулезного вупьвовагинита, согласно которому янтиген выделяют из кульгурального вирусе, подвергнутого очистке и кон- 25 центрации с помощью карбовакса и генегрона 226(2).

Недостатком такого способа является сравнительная сложность, недополучение преципитирующего антигена, находящегося вунгри клеток, необходимость применения вешеств, приводящих к частичной его потере при очистке и концентрации.

Целью изобретения является упрощение способа получения нреципитирующего аигигена из культурального вируса инфекционного ринотрахеина-пустулезного вульвовагинита и повышение его активности.

Это достигается тем, что размножение вируса проводят в течение 8-9 час при. дозе заряжения монослоя вирусом из расчета 10 инфекционных единиц на клетку, после чего выделяют антиген пизированием гипогонией зараженных клеток и высушивают его при пониженном давлении.

Способ приготовления антигена осуществляют следующим образом.

Монослой клеток перевиваемой почки геленка выращивают во вращающихся бутылях в устройстве дпя получения роллерных

573500

Составитель Н. Тардиева

Редактор А. Бер Техред 3. Фгнтг Корректор А. Лакида

Заказ 3713/21 Тираж 541 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-3 ">, Раушская наб„д, 4/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужго1од, ул. Проектная, 4 культур. Для ьырашивания клеток используется среда 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота, На полученный монослой нацосит адапти.рованный к культуре вирус инфекционного ринотрахйиаа-пустулезного вульвовагинита, например штамм "Оксфорд, в дозе 10 инфекционных единиц на клетку, что обеспечивает синхронное заражение клеток монаслоя.

1О

Через 8-9 час, т. е. в период максимального HaKGItlteHHQ LIpeIlHIBtrHÐóêìöeão ангигена в клетках, культуральную жидкость сливают, а зараженные клети лизируюг днстиллиреванной водой.

Полученную суспензию, соде ржашую продукты разрушения клеток и освободившийся .антиген высушивают при пониженном давлении в реторном испарителе или в пиофильной установке для дополнительного кон- центрирования и обеспечения длительного хранения антигена.

Активность и специфичность препарата изучалась параллельным исспед ованием, испытуемых сывороток в реакции Гепьпре- 25 ципитлцни и в реакции нейтрализации, которая яв,пяется основным тестом для диагностики инфекционного ринотрахеита-пустулеэного вульвовагинита и идентификации вируса. лО

Для проверки преципитирующего аитигена оЖк ременно исследовались специфические гяцериммунныесыворотки,,сыворотки or экспериментально зараженных животных и полевые сыворотки от переболевших животных. З5

Получено полное совпадение результатов исследований в реакции гельпреципитации с изготовленным антнгеном и реакции нейтрализации.

Сыворотки, дающие положительные ре- 4О зультаты в реакции гельпрепипитации, нейтрализовали питопатическое действие вируса. Сыворотки, дающие отрицгтельные ре.зультаты в реакции гельпреципитации, не . оказывали нейтрализуюшего действия на 45 вирус.

Полученный антиген дает специфическую реакцию IIpegHHHrBQHH в геле только с гомо» логичной сывороткой против инфекционного ринотрахеита-пустулезного вупьвовагинитр.

При испытании его со специфическими сыворотками против других вирусов (вирус диареи крупного рогатого скота, парагриппа-3, яшура, энтеровирус крупного рогатого скота) реакции была отрицательной.

Проведенные производственные испытания свидетельствуют о высокой активности и специфичности антигена, полученного с помошью предлагаемого способа.

Формула изобретения

Способ приготовления антигена иэ вируса инфекционного рииотрахеита-пус тулезного вупьвовагннита крупного ро1-.атого mora для реакции преципитации в геле, включаюший размножение вируса в монослое клеток и последуюшее выделение антигена, о т— л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения активности антигена и упрощения процесса его приготовления, размножение вирусов проводят в течение 8-9 час при дозе заражения!монослоя вирусом иэ расчета

10 инфекционных единиц на клетку, после чего выделяют антиген лиэнрованием гипотонией зараженных клеток и высушивают его при пониженном давлении.

Источники информапии, принятые во внимание при экспертизе .

1. Иванова Г. А., Фомин 10. В., Сафрон ская И. В., Выделение этиологического фактора в культуре ПЭК от крупного рогатого скота с подозрением на инфекцион иый ринотрахеит и постановка реакции диффузионной преципитации в агаровом геле, Материалы межвузовской конференции по ветвирусологии, М., 1972, с. 2.

2.Eatefa (.А. Application of the agargef

tech igne n the diagnosis of ietections

II

bovine vhinot rachitis — „Am. У, vet.Res., 1967,чоЧ128, Мо 127, р.,1903.