Штамп плесневого гриба -т-продуцент целлолитических ферментов

Штамп плесневого гриба -т-продуцент целлолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

III) 57

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 18.03.76 (21) 2335483/13 (51) М Кч е С 12К 1/00

С 12D 13/10 с присоединением заявки №

Государственный комитет

Совета Министров СССР (23) Приоритет

Опубликовано 30.09.77. Бюллетень № 36 (53) УДК 576.15.08 (088.8) по делате изобретений и открытий

Дата опубликования описания 29.09.77 (72) Авторы изобретения

А. А. Шилова, Л. С. Лосякова, А, М. Сазонова, Ю. А. Колесников и E. И. Ярцев

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (71) Заявитель (54) ШТАММ ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА TRICHODERMA SPEClES

Т вЂ” ПРОДУЦЕНТ ЦЕЛЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к микробиологии, в частности к новым штаммам плесневого гриба, используемого для гидролиза целлюлозосодержащих растительных субстратов при силосовании грубых кормов в производстве спирта, а также для получения сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности.

Известны различные штаммы плесневых грибов, применяемых для гидролиза целлюлозосодержащих растительных субстратов, например, штамм Trichoderma veride Ген-К-910 — продуцент целлолитических ферментов (1).

1-1аиболес близок к изобретению известный штамм плесневого гриба Trichoderma ligIIorum 6с-24, используемый для биосинтеза целлолитических ферментов (21.

Известные штаммы обладают невыгодной активностью целлолитических ферментов и обильным конидиеобразованием, что приводит к загрязнению окружающей среды и ухудшает условия работы.

Цель изобретения — получение штамма с повышенной активностью целлолитпческих ферментов и слабым конпдпеобразованнем, обеспечивающим, следовательно, увеличение выхода конечных продуктов гидролиза.

Штамм плесневого гриба Trichoderma species T — продуцснт целлолитических ферментов выделен из почвы и хранится в коллекции культур Всесоюзного научно-исследователского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером

5 ЦМПМР-83.

Активность целлолитическпх ферментов штамма стабилизирована при длительном культивировании на агарнзованной среде с таурином (2-аминоэтансульфоновая кислота)

10 с концентРацией 0,001 с о.

Штамм Trichoderma species T — продуцент целлолитических ферментов культивируется в поверхностных условиях на стерильной, твердой, увлажненной до 64 — 65со питательной

15 среде.

Активность целлюлозы CI-фермента в готовой культуре составляет 400 — 500 ед/г сухой культуры.

Активность целлюлозы CI определяют по

20 гидролнзу фильтровальной бумаги llo известной методике.

В готовой культуре за 48 — 60 ч роста конидни почти отсутствуют.

Морфологические признаки. Мнцслий бес25 цветный, распростертый. Растет дерновпнкой илп паутинообразно. Дерновинкн подушковидные, выпуклые, сначала белые, потом желтозеленые и темно-зеленые. Конидиеносцы в IIIIде боковых ответвлений гиф воздушного мп30 целия, большей частью вильчато- илн тройча574471 торазвствленные, бесцвстныс. Стеригмы бутылевидные или конусовидные, слегка изогнутые, расположенные мутовками по 2 — 3 или одиночные размером 6,5 — 13,5X3,5 — 4 мкм.

Конидии овально-шаровидные в диаметре

3,5 — 5,0 (5,5) мкм, собранные в головки, в массе белые, желто-зеленые нли темно-зеленые.

Культуральные признаки Синтетическая среда Чапека с сахарозой. Посевы уколом.

Через 7 суток роста при температуре 28—

30 С колонии распростертые, рост неоднородный, иногда дерновинкой. Диаметр колоний

9 — 10 см. Вначале развивается бесцветный стелящийся мицелий. Воздушный мицелпй тонкий, слегка приподнятый, бесцветный. Конндни в виде зеленых и белых подушечек, расположенных в цснтре. Среда окрашивается в ярко-желтый цвет, образует желтый пигмент, который диффундирует в среду.

Сусло-агар (4,8 баллинга + 1 измельченной фильтровальной бумаги). Колонии распростертые, через 4 — 5 суток роста при температуре 28 — 30 С до 70 мм, Воздушный мицелий прижатый, иногда паутинистый, рост неоднородный, иногда дерновинкой. На 5 — 6-с сутки роста по краям появляются конидии, доходящие до центра колонии, вначале светлые, затем с зеленоватым оттенком. Обратная сторона агара окрашена в ярко-желтый цвет. Образует желтый пигмент, который диффундирует в среду.

Среда состава, о/,: измельченная фильтровальная бумага — 1; (NH4) >SO4 — 0,15;

NaNOg — 0,15; КН2РО4 — 0,15; MgSO4 7Н О—

0,05; 10О/о -ный экстракт пшеничных отрубей

300 мл; водопроводная вода до 1 л плюс 2

arapa. Посев уколом. Колонии распростертые, мицелий иногда паутинистый, иногда дерновинкой. Конидии появляются на 4 — 5-е сутки по краям, затем разрастаются по всей колонии. Обратная сторона окрашена в слабожелтый цвет.

Синтетическая среда Чапека с крахмалом (среда Гаузе — 1) . Посев уколом. Через 10—

12 суток роста при 28 — 30 С диаметр колоний

4 — 5 мм, в месте укола на 12 — 15-е сутки и6. разуются конидии в виде редких белых или бледно-зеленых с желтоватым оттенком подушечек. Среда окрашивается в интенсивно-хкелтый цвет.

Ломтики картофеля. Посев штрихом. Через

14 — 15 суток роста при 28 — 30 С колония закрывает всю поверхность ломтика — сплошная кочковатая дерновинка, окрашенная в светло-зеленый цвет с отдельными участками темно-зеленого или светло-желтого цвета, конидиеобразование обильное, субстрат с обратной стороны интенсивно окрашен в ярко-желтый цвет.

Физиологические признаки. Отношение к источникам углерода. Ассимилирует глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, сахарозу, глицерин, Клетчатку гидролизует до глюкозы, крахмал гидролизует очень слабо.

Отношение к источнику азота. Нитраты восстанавливает к 30-ти суткам инкубирования, 5Келатину не разжижает за 30 ч инкубации.

Молоко пептонизирует очень слабо при рН

7 — 8.

Формула изобретения

Штамм плесневого гриба Trichoderma species T — продуцент целлолитических ферментов, хранится в коллекции культур Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМЕ-83.

Морфологические признаки. Мицелий бесцветный, распростертый. Растет дерновинкой или паутинообразно. Дерновинки подушковидные, выпуклые, сначала белые, потом желтозеленые и темно-зеленые.

Конидиеносцы в виде боковых ответвлений гиф воздушного мицелия большей частью вильчато- или тройчаторазветвленные, бесцветные. Стеригмы бутылевидные или конусовидные, слегка изогнутые, расположенные мутовками по 2 — 3 или одиночные размером

6,5 — 13,5X3,5 — 4,0 мкм. Конидии овально-шаровидные, в диаметре 3,5 — 5,0 (5,5) мкм, собранные в головки, в массе белые, желто-зеленые или темно-зеленые.

Культуральные признаки. Синтетическая среда Чапека с сахарозой. Посевы уколом, через 7 суток роста при температуре 28 — 30 С колонии распростертые, рост неоднородный, иногда дерновинкой. Диаметр колоний 9—

10 см. Вначале развивается бесцветный стелящийся мицелий. Воздушный мицелий тонкий, слегка приподнятый, бесцветный. Конидии в

40 виде зеленых и белых подушечек, расположенных в центре. Среда окрашивается в яркожелтый цвет, образует желтый пигмент, который диффундирует в среду.

Сусло — агар (4,8 баллинга + 1О/о измельчен45 ной фильтровальной бумаги) . Колонии распростертые, через 4 — 5 суток роста при температуре 28 — 30 С до 70 мм. Воздушный мицелий прижатый, иногда паутинистый, рост неоднородный, иногда дерновинкой. На 5 — 6-е

50 сутки роста по краям появляются колонии, доходящие до центра колонии, вначале светлые, затем с зеленоватым оттенком. Обратная сторона агара окрашена в ярко-желтый цвет.

Образует желтый пигмент, который диффун55 дирует в среду.

Среда состава, % . измельченная фильтровальная бумага 1; (NH4) 2804 0,15; NaNO3

0,15; КН2РО4 0,1; MgSO4 7Н О 0,05; 10 /О-ный экстракт из пшеничных отрубей 300 мл, водо00 проводная вода до 1 л плюс 2 /о агара. Посев уколом. Колонии распростертые, мицелий иногда паутинистый, иногда дерновинкой. Колонии появляются на 4 — 5-е сутки по краям, затем разрастаются по всей колонии. Обратная

05 сторона окрашена в слабо-желтый цвет.

574471

Составитель А. Бражникова

Редактор Н. Хубларова Техред Л. Гладкова

Корректор Л. Котова

Заказ 2136/4 Изд. ¹ 802 Тираж 563

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

1!3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2

Синтетическая среда Чапека с крахмалом (среда Гаузе-1). Через 10 — 12 суток роста при температуре 28 — 30 С диаметр колоний

4 — 5 мм, в месте укола на 12 — 15-е сутки образуются конидии в виде редких белых или бледно-зеленых с желтоватым оттенком подушечек. Среда окрашивается в интенсивно-желтый цвет.

Ломтики картофеля. Посев штрихом. Через

14 — 15 суток роста при температуре 28 — 30 С колония закрывает всю поверхность ломтика — сплошная кочковатая дерновинка, окрашенная в светло-зеленый цвет с отдельными участами темно-зеленого или светло-желтого цвета, коннднеобразование обильное, субстрат с обратной стороны интенсивно окрашен в ярко-жслтый свет.

Фггзггоггогггчссгггге ггразнака. Отношение к источникам углерода. Ассимилирует глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, сахарозу, глицерин.

5 Клетчатку гидролизует до глюкозы. Крахмал гидролизует очень слабо.

Отношение к источнику азота. Нитраты восстанавливают к 30-ти суткам инкубирования.

5Келатину не разжижает за 30 ч инкубации.

10 Молоко пептонизирует очень слабо при рН

7 — 8.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1б 1. Авторское свидетельство СССР № 399522, кл. С 12D 13/10, 1971.

2. Авторское свидетельство СССР М 482494, кл. С 12ГЗ 13/10, 1975.