Способ получения протеолитических ферментов
Патент 576336
Авторы
Способ получения протеолитических ферментов
Иллюстрации
Реферат
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
1ц1 576336
Союз Советских
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВМДЕТЕЛЬСТВУ (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 16.02.76 (21) 2323257/13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет
Опубликовано 15,10.77. Бюллетень № 38
Дата опубликования описания Об.10.77 (51) М. Кл С 12D 13/10
С 12В 3/14
Гасударственный камнтет
Саввта Минн,"трав СССР аа делам изааретеннй и аткрытий (53) УДК 577.15.663.1 (088.8) (72) Авторы изобретения P. С. Балтрушис, Д. И. Гашкайте, А. Ю. Лугаускене и Г. А. Махтеева (71) Заявители Каунасский политехнический институт им. Антанаса Снечкуса и Институт биохимии AH Литовской ССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ
Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способу выращивания продуцентов протеолитических ферментов и увеличения активности продуцируемых ферментов.
Известен способ получения протеолитических ферментов, например при выращивании продуцента Bacillus mesentericus lib-8ш на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и стимулятор роста (1).
Недостатком известного способа является высокая стоимость некоторых наиболее эффективных iU-замещенных р-аланинов, а также то, что при длительном хранении это соединение темнеет и частично разлагается, С целью удешевления целевого продукта «о предлагаемому способу в качестве стимулятора роста используют натриевые соли N-замещенных р-уреидокислот общей формулы:
R — N — СХ вЂ” NH, !
СН,— СН,— COONa, где R — СвНв, СвНв — СН2—
Х вЂ” О или S.
При этом N-замещенные р-уреидокислоты вводят в количестве преимущественно 0,001—
0,15% к объему питательной среды.
Пример 1. Заводской штамм Bacillus
mesentericus ПБ-8ш выращивают в колбах
250 мл в 50 мл полусинтетической питательной среды следующего состава, г/л:
Крахмал нерастворимый 100,0
5 Глюкоза 10,0
Цитрат аммония (гидрат) 30,0
Однозамещенныи фосфорнокислый калий 2,0
Двузамещенный фосфорнокислый натрий 3,0
Сернокислый магний 1,5
Сернокислый кальций (гидрат) 1,5
Железо сернокислое, закисное (гидр ат) 0,02
15 Марганец сернокислый 0,00125
Медь сернокислая 0,0075 и-Аминобензойная кислота 0,01
Крахмал подвергают гидролизу с помощью амнлазы до появления с йодом коричневой ок20 раски.
В качестве стимулятора берут натриевую соль N-фенил-iN-карбамидо+аланина в количестве 0,001 вЂ,15% от объема питательной среды. Выращивание проводят на качалках
25 при 37" С в >е >сиис 42 — 44 ч прп начальном рН 7,2. После выращивания рН определяют рН-метром ЛПУ-01.
Далее известным методом определяют вес сухой биомассы при 105 С, протеолитическую 0 активность по методу Ансона, модифициро676336
Протеолитическая активность
1 елок
Вес сухой биомассы
Количество натриевой соли
М- рени л- Ч- к арб амило-3-аланина, о о, Специфическая активность, -,/м г
РН среды в конце опыта в 100 мл культу ральной жидкости, мг
-1/мл культуральной жидкости я к я к /ил контролю контролю контролю
2,47
4, 2!
3,405
3,11
3,79
2,75 ванному Куницом, специфическую активность на 1 г сухой биомассы и содержание белка по методу Лаури.
На каждую концентрацию стимулятора проводят 6 опытов, результаты которых представлены в таблице.
Используемые в способе стимуляторы роста хорошо растворимы в питательной среде, легко синтезируются. Сырье для их синтеза, а именно анилин и бензиламин, дешево и доступно. тем, что, с. целью удешевления целевого продукта, в качестве стимулятора роста используют натриевые соли N-замещенных р-уреидокислот общей формулы:
R — N — СХ вЂ” NH, !
СН,— СН,— COONa, где R — СаНв, СаНз — СНя—
10 Х вЂ” О или S.
2. Способ поп. 1, отличающийся тем, что N-замещенные р-уреидокислоты вводят в количестве преимущественно 0,001 — 0,15 /о к объему питательной среды.
15 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Авторское свидетельство М. 495911, кл.
С 12В 3/14, 1972.
Формула изобретения
1. Способ получения протеолитических ферментов путем выращивания продуцента Вас11lus mesentericus ПБ-8ш на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и стимулятор роста, отличающийся
Составитель Т. Серебренникова
Техред И. Карандашова Корректор Т. Добровольская
Редактор В. Блохина
Заказ 2279/18 Изд. Ма 837 Тираж 563
НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
Типография, пр. Сапунова, 2
Контроль
0,001
0,0025
0,005
0,0075
0,01
7,61
7,7
7,66
7,65
7,6
7,6
0,607
0,643
0,676
0,653
0,660
0,601
103
106
111
108
109
3150
131,6
103,4
120,3
159,4
118,4
1187,5
863,75
850,0
1046,25
1151,20
1250,0
72,7
71,6
88,1
96,9
105,3