Способ получения антибиотика, обладающего -лактамазной ингибирующей активностью

Способ получения антибиотика, обладающего -лактамазной ингибирующей активностью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

А е АНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

О п

Союз Советских

Социалистичвских

Республик (11) 576965 (61) Дополнительный к патенту— (Я2) Заявлено 27.03.75 {21) 2125033/13 (23) Приоритет — (32) 28.03.74 (31) 13855/74 (ЗЗ) Великобритания (51) М. Кл. С12 О 9/00

Гааударатаеиимй комитет

6ааата Ииииотраа СССР па делам изааретеиий и открытий (43) Опубликовано 15.10.77. Бтоллетень № 38 (53) УДК 615.779.931 (45) Дата опубликования описания,18.11.77 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Мартин Коул, Джон Дик Худ и Деннис Баттерворт (Великобритания) Иностранная фирма Бичам Груп Лимитед" (Великобритания) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА, ОБЛАДАЮЩЕГО |3 — ЛАКТАМАЗНОЙ

ИНГИБИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к области микробиологии и касается получения антибиотиков.

Предложенный антибиотик является новым н способ его получения в патентной и научно технической литературе не описан. и

Целью изобретения является получение антибиотика, обладакицего Р-лактамазной ингибирующей активностью.

По предлагаемому способу штамм Streptomyces ойчесеоэ АТСС 31126 культивируют в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота, серы и минеральные соли, из культуральной жидкости выделяют антибиотический комплекс, затем разделяют его хроматографическим путем и выделяют целевой продукт.

Для получения антибиотика, обладающего

Р-лактамаэной ингибирующей активностью,использутот штамм Strepternyces ol iveceus АТСС 31126.

Этот штамм культивируют в.аэробных условиях в присутствии ассимилируемых истОчникОВ 20 углерода, азота, серы и минеральных солей. Рост мо- жет происходить в твердой, полутвердой или жидкой питательной среде, в которой растворены питательные вещества. Культивирование может происходить на аэробной поверхности или в погруженном состоя- @

2 нии. Питательная среда может быть ив славных ннтательных веществ или же составлена химическим путем.

Предпочтительной является среда, с<щержащая сложные питательные вещества, такие как экстракт дрожжей, муку из соевых бобов. Присутствие ионов кобальта, ионов сульфата и карбоиата кальция оказывает благоприятное влияние. Культивирование осуществляют при температуре от 28 до -2 С и заканчивается через 2-3 сут.

Способы выделения и очистки, применяемыв при получении антибиотика протекают цри низких температурах, например при температурах виже 20 С, оптимальная температура ие выпм 12 С.

Целевой продукт получают иэ фильтрата культуры. Первой стадией во время процесса выделения является удаление твердого материала нэ сбраэчаваемой среды, например путем фильтрования.

Штамм Streptomyces oliveceus АТСС31126 ет открытые спирали, проникающие сквозь гибкие цепи спор, цепи зрелых спор обычно бывают длитгными и цепь часто содержит свыше 50 спор.

Усваивает О-глюкозу,.IL-арабинозу, D-ксилоэу озо-иноэит, D-маннит,"0-фруктозу н рамноэу. На сахарозе и раффинозе отмечаются лишь следы рос33

576965 или же рост не происходит вообще. Усваивает инозит.

Крахмальный агар-агар после роста в течение

14 сут. образует воздушный мицелий серо-корич. невого цвета, субстратный мицелий оливково-ко. ричневого цвета, растворимый пигмент не образует, мелаиин не образует.

Экстракт дрожжей arap-агар на экстракте соаода, воздушный мицелий серо-коричневого цвета, субстратный мицелий оливково- коричневого цвета, растворимого пигмента не образует.

Глицерин аспарагиновый агар-arap: воздушный мицелий серого цвета, субстратный мицелий коричневого цвета, растворимого пигмента не образует.

Агар-агар на овсяной муке: воздушный мицелий серого цвета, субстратный мицелий оливковокоричневого цвета, растворимый пигмент не образует.

Пример 1, Штамм Streptomyces ol i vaceus

АТСС 31126 выращивают в течение 7 сут. при температуре 28 С на слое твердого агар-arapa в колбе Ру.

Агар-агаровая среда имеет следующий состав, г/л:

Экстракт дрожжей 10,0

Моногидрат гдокозы 10,0

Агар-агар 15,0

Водопроводная вода До 1л

Величину рН среды устанавливают 6,8 до стерилизации, 50 мл стерильной деионизированной воды, содержащей 0,02% "твина 80" (монаолеат полиэтиленсорбитана) прибавляют к культуре, находящейся в колбе Ру, и споры суспендируют путем встряхивания. Эту суспензию спор прибавляют после этого в качестве инокулирующего вещества к

75 л стерилизованной среды для вызревания в бродильном чане из нер>ювеющей стали емкостью 100 л.

Состав среды для вызревания следующий, г/л:

Мука из соевых бобов 10,0

Моногидрат глюкозы 20,0

Водопроводная вода До1л

Дпя того, чтобы контролировать вспеннвание, прибавляют 50 мл 10 ного (об.) нлуроника 1 81 в масле из соевых бобов, и эту добавку вводят в ферментационную среду до стерилизации.

Среду стерилизуют при помощи водяного пара в бродильном, чане в течение 20 мин при температуре 120 C. Культуру для вызревания перемешивают со скоростью 340 об/мии при помощи дисковой крыльчатой мешалки с диаметром 21,59 см и через ба1>ботер с опсрьпым концом вводят 150 л/мин воздуха.

Чаи для культивирования снабжен отбойными перегородками. Температуру поддерживают 28 С и после инкубирования, проведенного в этих усло виях, в течение 45 ч..

7,5 л этой культуры вводят в качестве инокулирующего вещества в 150 л стерильной сбраживаемой среды в бродильном чане иа

35 нержавеющей стали емкостью 300 л. Среда для проведения ферментации имеет состав, г/л:

Мука из соевых бобов 10,0

Моногидрат глюкозы 20,0

Мел (осажденный карбонат кальция)

Хлористым кобальт (гексагидрат хлорида двухвалентного кобальта) 0,01

Водопроводная вода До1л

Для предотвращения вспенивания прибавляют

300 мл 10% - ного плуроника L 81 в масле из соевых бобов. Полученный продукт собирают по прошествии 48 ч и осветляют путем центрифугирования. Осветленный раствор дает 50%-ное ингибиров ание при пробе с энзимом при разбавлении 1:100000. 100 л осветленного раствора перемв. шивают с 12 кг (влажный вес) ионообменной целлюлозы Ватман ДЕЗ2 в ацетатной форме; этот

I материал представляет собой микрокристаллическую целлюлозу, замещенную диэтиламиноэтильными группами.

Шлам фильтруют и ММ 4550 (комплекс) элюируют с целлюлозой 12л 0,5 М раствора сульфата калия. Экстракт концентрируют до 6 л в выпарном пленочном аппарате в вакууме при температуре ниже 30 С. Значительное количество сульфата ка0,2 лия переходит в осадок при прибавлении 12 л ацетона. Раствор фильтруют и концентрируют до 200 мл путем выпаривания в вакууме при температуре ниже 30 С. Концентрат загружают в колонку (76 мм х 2 м), заполненную смолой амберлит ХАД-4. Материал представляет собой неионную полистирольную смолу и элюируют деионизированной водой, собирая элюат фракциями по 140 мл.

Активные фракции, обнаруживаемые испытанием по диффузии в агар-arape, собирают вместе (2,2 л) и концентрируют до 275 мл путем ультрафильтрова шш с использованием мембраны ами;-он UM-0,5

40 (диаметром 150 мм) . Концентрат подвергают сушке вымораживанием для получения 72 г коричневого поропп<а. 1 r порошка растворяют в 1 л 0,2 М раствора сульфата натрия и смешивают с 1 л 2 о-ного (вес/объем) раствора кислого сульфата тетра4 - н - бутиламмония в лихлорметане. Дихлорметановую фазу отделяют по весу, охлаждают до-70 С, фильтруют для удаления льда и концентрируют путем выпаривания до 20 мл. К концентрату прибавляют 400 мл петролейного эфира с т.кип. 4060 С и осадок отфильтровывают, затем его повторно растворяют в 10 мл дихлорэтана и экстрагируют

10 мл воды, содержащей 80 мг иодистого бария и

70мг карбоната бария. Фазы разделяют, водную фазу фильтруют и устанавлювают рН 6,5. Раствор подвергают сушке вымораживанием для получения желтого порошка. Твердый продукт промывают ацетоном для растворения избыточного иодистого бария и путем центрифугирования выделяют светло-желтьй продукт, который сушат в вакууме.

@» Выход 23 мг (1500,0004 мкг/мл) 576965

Фильтрат культуры (1100 л) после ферментации Streptomyces olivaceus АТСС 31126 с величиной рН 65 и температурой 5 С подвергают перколяции со скоростью 3,2 л/мин через колонку (0,3 м х х 1 м), заполненную гранулированным углем "Царко". (Уголь регенируют перед употреблением промыванием его следующими реагентами: 0,5 н. раствором гидрата окиси натрия; смесью 0,2 н. раствора гидрата окиси натрия и ацетона3:2; водой;

1 н.соляной кислотой; водой; фосфатным буферным раствором с рН6; водой).

Колонку промывают 60 л воды для вытеснения филътрата культуры и элюируют объемной смесью ацетон: вода =2:8 при 30 С со скоростью 1,1 л/мин.

С бирают 60 л, а после них 5 фракций по 10 л. Те фракции, которые содержат антибиотический комплекс, как это было установлено методом бактерицидной диффузии, с использованием Klebsiella

aегоgenes объединяют (40 л) и концентрируют в вакууме при температуре ниже 30 С до объема

32 л. Степень рекупирации антибиотического комплекса на этой стадии была 15 %-ной.

Концентрат охлаждают до 5 С, прибавляют 16 л

0,2 o-ного раствора хлорида цетилдиметилбензиламмония в дихлорметане при 5 С и обе фазы перемешивают в течение 5 мин.

Дихлорметановую фазу отделяют и прибавляют к 3,75 л раствор 0,4 o-ного иодистого натрия при

5 С. Обе фазы перемешивают в течение 5 мин, водную фазу отделяют и подвергают сушке вымораживанием. Высушенный твердый продукт экстрагируют безводным ацетоном для растворения избытка иодистого натрия и остаточное твердое вещество сушат в вакууме для получения порошка, окрашенного в рыжевата-корйчневый цвет (2,87 г). Общая степень вьщелення антибиотического комплекса на этой стадии составляет 6%.

Степень очистки, вычисленная из расчета на общее количество растворенных твердых веществ в фильтрате культуры, бьша равна 160-кратной.

Колонку диаметром 63 мм набивают порошкообразной целлюлозой в объемной смеси изапранол: вода = 7:3 до высоты слоя 300 мм; 2,0 г порошка рыжевато-коричневого цвета растворяют в 5 мл объемной смеси изопропанол: вода = 7:3, н хроматографируют с той же системой растворителей со скоростью 3 мл/мин.

Фракции, содержащие антибиотический комплекс, что устанавливалось испытанием против

Klebsiella aегоgenes, объединяют, концентрируют путем выпаривания в вакууме при температуре ниже

30 С, подвергают сушке вымораживанием и получают 270 мг коричневого твердого вещества. Рекуперация комплекса на этой стадии была 51%-ной, а степень очистки пятикратной.

Колонку диаметром 16 мм набивают парашкообразной целлюлозой в объемной смеси н-пропанол: вода = 4:1 до высоты слоя 300 мм. 198мг коричневого твердого вещества растворяют в объемной смеси вода: н-пропанол = 1: l и хроматографируют с объемной смесью н-пропанол: вода

4:1, со скоростью течения 0,5мл/мин. Собирают фракции по 6 мл, производят биоиспытание против

Kl ebs iel la aегоgenes и снимают спектр поглощения каждой фракции в УФ-спектре. Фракции и У 23-28, показавшие максимум поглощения при длине волны около 305нм, содержат двунатриевув соль антибиотика ММ 13902. Эти фракции объединяют, концентрируют в вакууме и подвергают сушке вымораживанием для получения 30 мг твердого продукта. Этот препарат дает лишь одну зону бактерицидной активности при величине Rf 0,77, измеренной методом танк ослойной хроматографии на пластинках с целлюлозой, при применении объемной системы растворителей н-пропанол: вода 4:1.

Зону эту обнаруживают биоиспытанием против

Bacil lus subt ilia (фракции N И 29-40, показавшие максимум поглощения в УФ - области при длине волны около 285 нм, содержат ММ 4550) . Эти фракции объединяют, концентрируют в вакууме н сушат вымораживанием для получения 53 мг твердого продукта, который содержит соль ММ 4550, загрязненную небольшим количеством соли антир5 биотика MM 13902.

Пример 2, Предпочнтаемый способ выделения.

Пробу спор, S. olivaceus АТСС 31126 выдерживают в условиях хранения проб сухой почвы в закрытом контейнере с агентом осушения при

30 20 С. Небольшое количество пробы почвы (примерно 20мг) переносят асептическнм способом в колбу Эрленмейера емкостью 500 мл, содержащую следующую среду, г/л:

Моногидрат глюкозы 20,0

35 Мука из соевых бобов 10,0

Деионизированиая вода До1л

Перед стерилизацией устанавливают рН 6,5. Мука нз соевых бобов представляет собой продукт

"аркасой 50".

40 Колбу с содержимым подвергают инкубации во вращающейся качалке (240 об/мин) в течение приблизительно 30 ч при 28 С. 2 мл полученного в результате роста продукта используют для инокулирования твердого агар-агара в склянке Ру.

45 Агар-агаровая среда имеет следующий состав:

Овощной сак У-8, мл 20,0

Агар-агар, r 20,0

Леионизираванная вода, л До 1

До стерилизации устанавливают рН 6,0.

50 Инокулирующее вещество распределяют по по. верхности агар-агара путем вращения склянки, которую после этого подвергают инкубации при 30 С.

По прошествии двух дней инкубации, избыточную жидкость из колбы удаляют и инкубацию ведут еще

55 4 сут.

В

50 мл деионизираванной воды, содержащей

0,02% твина80 вносят в культуру, в колбу РУ и споры суспеццпруют путем встряхивания, Эту суспензию спор прибавляют в качестве инокулирующь l

60 го вещества к 75л среды, служащей для стадии

0,2

7 выращиваши зародышей, в бродильном чане из нержавеющей стали емкостью 100 л. Состав среды, применяемой на стадии выраппшакм, г/л:

Мука из соевых бобов ("аркасой Я") I0,О

Мо югидрат глюкозы 20,0

Водопроводная вода До I л.

Для контролирования пенообразования к среде для ферментации прибавляют 50 мл 10%-ного (объем/объем) плурош ка Z 81 в масле из соевых 10 бобов до стерилизации среды.

Среду подвергают стери жзжщи водяным паром в бродильном чане в течение 20мин при 120 С.

Культуру на этой стадии перемепивают со скоростью 140 об/мин при помоши дисковой крыльча- 15 той мешалки с диаметром 19,05 см и в нее, через барботер с открытым концом подают стерильный воздух со скоростью 75 л/мии.

Температуру поддерживают 28 C и после инкубации в этих условиях в течение 48 ч содержимое о чана прибавляют в качестве инокулирующего вещества к 1500 л стерильной ферментационной среды в бродильном чане иэ нержавеющей стали емкостью 2000 л е отбойными перегородками. Ферме нтационная среда имеет состав,г/л: 25

Мука из соевых бобов ("аркасой 50"1 IО,Q

Моногидрат глюкозы 20,0

Мел (осажденный карбонат кальции)

Хлористый кобальт (гексагидрат хлорида двухвалентного кобальта) 0,001

Сульфат натрия (беэводный) I,0

Водопроводная вода До 1500 л

До стеригизации устанавливают рН 6,0 при помощи гидрата окиси натрия. До стерилизации прибавляют 3 л 10%-ного плуроника 1 81 в масле из соевых бооов для предотвращения пенообразования. После стерилизашщ устанавгшвают рН 7,0 при помощи стерильного раствора гидрата окиси нат- 40 рия. Ферментациояаую сроду перемешивают со скоростью 106 об/ьжн при 30 С, а воздух пропускают со скоростью 1200 л/мжь Продукт ферментанни собирают по прошествии 60ч н осветляют путем центрифугирования. 45

Полученный материал имеет активность в

340ед./мл, изделение фракций осуществляют следующим образом.

Фильтрат культуры (1050 л, 340 ед/мл) с температурой 10 С и рН 8 экстрагируют 310 л дихлор 60 метана при 10 С; экстрагент содержит 1200 r хло рида цетилдиметиламмонил; обе жидкости подави насосами с установлешюй скоростью н пропускают через вмонгированньй в трубопровод смеипель.

Фазы разделяют в центрифуге Шарплеса непрерыв- 56 ного действия, перемешивание ь которой продолжают примерно " мин. Дихлорметановую фазу (ЗОО л) подвергают обратной экстракции водным раствором иодистого натрия. Обратную экстракцию проводят четырехкратно, используя всего 7 л воды, 60

8 содержащей 210г иодистого натрия. Фазы разделяют по весу. Величину рН водной фазы устанавливают 7,7 - 7,0 при помощи соляной кислоты и фильтруют.

Экстракт, содержащий 7 л иодистого натрия, имеет активность 21900 ед/мл.

Колонку ионообменной смолы готовят из сефадекса Q АЕ в 0,05М фосфатном буферном растворе, содержащем 0,3 моля хлористого натрия; при опытах пользуются стеклянной трубкой диаметром

10 см; высота слоя 40 см. Экстракт (7 л), содержащий иодистый натрий при 5 С,перколируют через сефадекс Q АЕ со скоростью 50 мл/мин. Колонку элюируют О,/ М раствором хлористого натрия в

0,05 М фосфатном буферном растворе с рН 7 также при 5 С, при скорости элюирования 25 мл/мин; 2 л элюата отбрасывают и собирают 90 фракций по

100 мл, Фракции сканируют в УФ-спектрофотометре и те же фракции, которые показывают максимум поглощения при длине волны около 305 мм, объедшяют и устанавливают рН 7 (фракции

N N 50-62), объединенньй объем 1440 мл, активность 71000 ед/мл.

K объединенным фракциям прибавляют хлористый натрий (5 г/100 мл) и эту жидкость перколируют при 5 С через колонку диаметром 6,3 см, заполненную смолой амберлита ХАД4, уложенной слоем высотой 30 см, при скорости пролускания

20 мл/мин. Антибиотики адсорбируются в этих условиях на смоле, в то время как неорганические примеси не адсорбируются. Антибиотики элюнруют при комнатной температуре 200 мл дистиллированной воды, после чего проводят элюирование водным 50%-ным метанолом. Злюат (1 л) выпаривают до 70 мл при температуре ниже 30 С и пониженном давлении, устанавливают рН 7 и сушат вымораживанием. Получают (2,18 г) коричневого твердого продукта, представляющего собой частично очищенную соль антибиотика MM 4550 с активностью 3100 ед/мг.

Частично очищенную двунатриевую соль антибиотика ММ 4550 (0,55 r) подвергают хроматографической ожстке на колонке целлюлозы (4,5 см х 29 см, целлюлоза Ватман СС 31) и элюируют объемной смесью н-пропанол: вода - 4:1 при скорости потока 2,5 мл/мин. Первые 135мл элюата отбрасывают н затем собирают фракции по 15 мл.

Фракции, содержащие двунатриевую соль ММ 4550, что устанавливается методом поглощения в УФ-области, собирают (90 мл), выпаривают при температуре ниже 30 С прн пониженном давлении для удаления н-пропанола и сушат вымораживанием для получения желтоватого порошка (87 мг), активность которого соответствует 6600 ед/мг.

Антибиотик обладает максимумом поглощения в УФ-области при длине волны около 285 нм, при показателе экстишсцни Е,„,,равном примерно 240.

f%

Этот антибиотик дает спектры поглощения в K-области и ядерного магнитного резонанса. Результаты элемецтарного анализа этого материала

576965 показывают, что он содержит азот, серу и натрий в соотношении: азот:сера:натрий = 2:2:2. Позитивные и негативные максимумы кривых циркулярного цихроизма двунатриевой соли антибиотика

ММ 4550 определяют на регистрирующем спектрополяриметре Кэри-61 при концентрациях

0,37 мг/мл при длине пути 1 ем; прн этом были получены. следующие результаты:

Л, нм ЬЕ/m

185 +2,4х 10

207 -1,22х )О

259 -2,20х 10

290 1 89 х 10-з

Предлагаемый способ обеспечивает получение достаточно чйстого антибиотика и его солей.

Антибиотик представляет собой твердую карбо. новую кислоту, находящуюся в форме чистой натриевой соли и имеющей следующие характеристики.

Она хорошо растворима в воде, метаноле и нерастворима в хлороформе, диэтиловом эфире и углеводородах.

8 водном растворе она показывает характерный спектр поглощения в УФ-области, с максимумами поглощения, адин из которых находится при длине волны около 238 и 287 нм.

При введении ее в количестве 0,4 вес.% в свежеприготовленную таблетку бромистого калия она показывает характерный спектр поглощения в

Hk-области, который имеет максимумы поглощения,в том числе при длине волны около 3450, 2950, 1765, 1695, 1510, 1390 и 1260 ем . При снятии спектра примерно через неделю после приготовления таблетки бромистого калия спектр показывает значительные изменения, например большой пик, Ыответствующий максимуму при 1765 смм, значительио уменьШается в размере или исчезает.

Она дает характерный спектр ЯМР, будучи растворенной в дейтерированной воде (ДзО), с1тектр которой показывает в том числе (а) пару имеющих низкое поле дублетов с центром около

2,45т и 3,65т с константами связи около 15 Гц; (в) дублет с центром примерно при 8,55т и (с) острый синглет примерно при 7,95.

Антибиотик обладает бактерицидной активностью против различных видов, включая в том числе штаммы. Staphylococcus aureus, Baci llus

subtilis, Escherichia со li, Klebs iella aегоgenes, Proteus:mirabi Иа, Acinetobacter anitratus, Serratia

marcescens Snigella Sonnei.

Будучи смешанной с ампициллином он создает синергетическую активность против различных ор.ганизмов, включая штаммы Escherichia col i, Klebsiella aегоgenes, Proteus mirabilis, Proteus

morgani iu Staphylococcus aureus Русселя.

Он взаимодействует с реактивом Эрлиха (300 мг 4-диметиламинобенэальдепща в растворе

54 мл н- бутанола, 9 мл эта пола и 9 мл концентрированной соляной кислоты) с развитием синей окраски.

Он не представляет собой общего яца для энзимов и не ингибирует следующие энзимы при концентрациях, превосходящих те, которые требуются для ингибирования бета-дактамаэы

Escherichia cali моноаминооксицазы, ангидразы угольной кислоты, декарбоксилазы Дона, трипсина, химотрипсина или уреазы.

При проведении опытов методом тожсослойной хроматографии на-адсорбенте целлюлозе чистая двунатриевая соль антибиотика показывает следующие приблизительные величины R f: н-бутанол:изопронанол:вода = 7:7:6 (об/об) 0,7 изопропанол:вода = 7:3 (об/об) 0,6 н-бутанол:этанол:вода = 7:7:6 (об/об) 0,7 н-пропанол:вода = 4:1 (об/об) 0,6

При проведении опыта методом тонкослойной хроматографии на силикагеле динатриевая соль антибиотика показывает следующие приблизительные величины для Rf: н-проланол: 0,1 М фосфатный буфер, рН 7-7,3 щ= >,6 н-бутанол:метанол:вода = 4:1:2 R F=0,34

В практически чистом виде динатриевая соль антибиотика имеет значения Lz е мечее

0,0001 мг/мл, против Р-лактамазы Escherichia col i

25 11.

Кроме того, антибиотик может быть охарактеризован как серусодержащий ингибитор Р-лактамаэы, производимый Streptomyces ol ivaceus

АТСС 31126 и в форме водного раствора динатриевой соли имеет максимум поглощения при длине волны около 238 нм и 287 нм.

Антибиотик и его соли имеют 90-100%-ную степень чистоты.

Фармацевтические препараты, содержащие антибиотик или его соли, содержат в основном натриевую или калиевую соль антибиотика.

Такие препараты могут иметь форму, пригодную для орального, местного или парэнтерального применения. Можно использовать таблетки, капсуq.i лы,кремы, сиропы, перегруппированные порошки и стерильные препараты, пригодные для применения при инъекциях и в форме инфузий, Такие препараты могут содержать также разбавители, связующие, красящие вещества, вкусовые и

45 ароматные, консервирующие вещества, агенты AMзентегрирования.

Антибиотик может присутствовать в препаратах в качестве ед шственного терапевтического агента или они могут одновременно содержать антибиотик

50: группы р-лактама. К числу таких антибиотиков группы P-лактама относятся и те, которые являются чувствительнымн к Р-лактамазам и обладают устойчивостью по огношению к р.лактамазам. Такие антибиотики группы Pj лактама включают ампи55 циллин, амоксициллин, бензилпенициллин, феноксиметилпенициллин, пропицнллин, цефалоридин, цефокситин, цефалотин, цефалексин, карбенициллин, iтикарциллин, и пщролизующиеся in vivo сложные эфиры этих соединений, такие как фени60 ловый, толиловый или инданиловый сложные эфи-, 576965

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

ТеЧ д Н. Андрейчук

Корректор А. Лакнда

Редактор Л. Емельвиове

Заказ 2960/704 Тираж 541 Подписное

ЙНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рвушскаа нвб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ры карбенициллина или тикарциллина или ацетоксиметнловый, пивалилоксиметиловый или фталиловый сложные эфиры ампициллива, бензилпенициллина, амоксициллина,; цефалоридина, цефлоплицина.

Соотношение между антибиотиком или его солью и Р-лактамовым антибиотиком находится в интервале 10:1 — 1:10, например в интервале 3:1—

1:3. Общее количество бактерицидных агентов, присутствующих в каждой единичной дозирующей форме, находится в интервале 50-1500 мг и предпоч тигельйо между 100-1000 мг.

Рекомендуемые дозы можно вводить один раз в день или несколько раз в день, например, or 2 до 4 раз в день при лечении таких заболеваний,:как эаболезавил мочевых и дыхательных путей, кожных болезней. Препараты можно применять при лечении бронхитов, гонорреи, отитов среднего уха, маститов.

Способ получения антибиотика, обладающего

Р-лактамазной ингибирующей активностью, о т л ич а ю шийся тем, что штамм Streptornyces olivaceus АТСС 31126 культивируют в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота, серы и минеральные соли, из культуральной жидкости выделяют антибиотический комплекс, затем разделяют его хроматографическим путем и выделяют целе1б вой продукт.