Питательная среда для выращивания протеаз с фиоринолитической активностью

Питательная среда для выращивания протеаз с фиоринолитической активностью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистииеских

Республик (l)i 579305

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6i) Дополнительное к авт. саид-ву

2 (5l) М. Кл.

С 12 В 3/00

С 12 К 1/06

С 12 D 13/10 (22) Заявлено 19,12.75 (21) 2301247/

/ 28-13 с присоединением заявки №вЂ”

Государственный комитет

Совета Министров СССР

Ао делам изобретений и открытий (23) Приоритет(43) Опубликовано 05.11.77. Бюллетень №4 (45) Дата опубликования описания 22.11.77 (53) УДК 577.15,663.1 (088.8) Н. С. Егоров, Ю, П..Грачев, М. А. Аль-Нури, Н. А. Баранова и А. Ю. Кривова (72) Авторы изобретения

Московский ордена Ленина и ордера Трудового Красного Знамени государственный университет йм. М. В. Ломоносова (71) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ПРОТЕАЗ

С ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

О днозамешенный фосфат калия

С е р н окислы и магний

Сернокислый цинк

Сернокислое железо

Вода

Изобретение относится к технической микробиологии, а именно к питательным средам для культивирования протеаз с фибринолитической активностью, и может быть использовано в медицине, гематологии, фи- 5 зиологии и биохимии.

Известна питательная среда для вырашивания протеаз с фибринолитической активностью, содержашая источник азота, глюкозу, лимоннокислый трехзамешенный натрий, од- 10 нозамешенный фосфат калия, сернокислый магний, сернокислый цинк, сернокислое железо и воду (1).

Бель изобретения - повышение выхода 15 целевого фермента и увеличение соотношения фибринолитическрй активности с казеинолитической.

Для этого в качестве источника азота используют сернокислый аммоний при следуюшем соотношении компонентов, г/100 мл:

Сернокислый аммоний 0,1-0,2

Глюкоза 6,0-7,5

Лимоннокислый трехза« мешенный натрий 0,4-0,55 25

О, 1-0,3

О, 4-0,6

0,0005-0;0015

0,0015-0,0025

Остальное до

100 мл.

Предлагаемая питательная среда является синтетической и обеспечивает интенсивное образование поотеазы с фибринолнтической активностью (ФА) на 72 ч развития культуи кг т ндоьн на ры в количестве 7000,„„„,.„, к„д „.В- известном техническом ешении эта величина мкг тироа иА гаемая среда обеспечивает .также увеличение,соотношения фибринопитической активности с казеинолитической активностью до

0 515 — ), по сравнению с 0,3 в известФА ном техническом решении.

Продуцентом фибринолитических ферментов является, например актштомнцет Ас1 гоmace s sphe oides, штамм 35. Этот штамм хранится в коллекции культур кафедры Микробиология Московского государственного университе.ы.

579305

1е БО О, 002

Вода дис гиллированная, рН 8,0 Остал ьное, Выращивание штамма проводят в условиях, аналогичных условиям выращивания глубинного посевного материала. Величина рН куль туральной жидкости при этом снижается за

24 ч, до 7,35 и в процессе дальнейшего культивирования остается постоянным, Ip Фибринолитическую (ФА) и казеинолити ческую (КА) активности целевого продукта определяют в освобожденной от мицелия культуральной жидкости известным способом путем определения продуктов гидролиза фиб1в рина и 1%-ного раствора казеина в трис— — НСс буфере, рН 9,0, 100 мкг препарата фермента, находящимися в 80 мкл кульо туральной жидкости, при - 37 С. Определяя

ФА, получают после 72 ч. кулнгивирова20 ния максимальное накопление активности, МК ТИРОВ ииеа равное 7000 „„„,„„„и возрастание соотношения фибринолитической активности к казеийолитической до 0,515, 25 В таблице представлены данные по накоплению культурой Actino ces spherbides штамм 35 препарата фибринолитических и казеинолйтических ферментов при выращивании культуры на предложенной и известЗО ной средах.

KA мкг тн

ФА, м/г тирозина

У дель ная

KA,мкг тирозина мг белка

У дел ьная Фа, мкг тирозина

Продуктивность ез,ФА

Количество белка, мкг альбу мина мл, культ. жи д.

Питател ьная .среда

ФА рН ность инкубации, мг биЬмасс культ, жид, ч. мг белка культ. жид,ч (ч) Известная

48 7,8 j 340 2500 1,86

Предлагаемая 72 7 35 1900 7150 3 76

50 я таблицы видно увеличение на предлагаемой среде фибринолитической активности до 7150 возрастаниее соотношения ФА/КА до 0>515 при сохранении на прежнем уровне казеинолитической активности, Формула изобретения

Питательная среда для выращивания протеаз с фибринзлитичесхой активностью, со» держащая источник азота, глюкозу, лимон- 6О нокислый трехзамешенный натрий, однозамешенный фосфат калия, сернокислый магний, сернокислый цинк, сернокислое железо и воду, о т л и ч а. ю ш а я с я тем, что, с целью повышения выхода целевого фермента и увеличения соотношения фибринолитической активности к казеинолитической, в качестве источника азота используют cBp(io» кислый ал1моний, лри следуюшел| соотношении компонентов, г/1 00 мл:

Пример . Культивирование актииомицета Actinom ces spberaides штамм 35 проводят в два этапа.

На первой ступени культивирования выращивают глубинный посевной материал для застава предлагаемой синтетической сре ды. для этого продуцент выращивают на известной скошенной агаризованной среде в течение 7-14 дней. Затем культуру актиномицета с одной пробирки вносят вместе с агаром в 200 мл..- известной питательной среды для культивирования глубинного посевного материала, Посевной матсриал вырашньщот на качалках (180-200 об/м) в колбах емкостью

750 мл со 100 мл среды в каждой в течение 72 ч, при -26, 28 С, На второй ступени культивирования глубинным посевным материалом в количестве 5% по объему засевают предлагаемую питательную среду.

Предлагаемая синтетическая среда имеет следующий "îñòàâ в г/100 мл среды:

Глюкоза 7,1

С Н О., Иа 0,48

КН VO 0,2 (ЦН ) $0 0,125

Mg 50 0,575

In 50 0,001

12650 0,095 0,29 410

13916 0,073 0,515 510

579305

0,1 0,2

6,0-7,5

Сернокислый аммоний

Глюкоза

Лимоннокислый трехзамешенный натрий

0,4-0,55

О, 1-0,3

0,4-0,6

0,0005,0015 10

Составител)ь Т. Серебренникова

Редактор И. Марховская Техред А. Богдан Корректор С, Шекмар

Заказ 4337/28 Тираж 541 Подписное

Ш1ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r, Ужгород, ул. Проектная, 4

О днозамешенный фосфат калия

Сернокислый магний

Сернокислый цинк

Сернокислое железо 0,0015-0,0025 .

Вода Осталыюе до 100мл, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Ушакова В. И., Егоров П. С, и

Солодовникова Н, И, Образование фибринолитического и казеинолитического фермента

Actina ces epicures штамм 1. Микробиология", 1068, т. 37, вып. 4, с, 729,