Способ получения вакцины

Способ получения вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистииеских

Республик

ОП И

ИЗОБ

11) 579309

К AITOPCKO (61) Дополнительно (22) Заявлено 16.1 с присоединением з (23) Приоритет (43) Опубликовано (45) Дата опублик

2 (51) М. Кл.

С 12 К S/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР но делам изооретений н открмтий (53) УДК 576,8.093 (088.8) С, Е. Бреслер, Н. В. Железнова, H. В, Катушкина, В. М. Коликов, Л, М. Молодкина, В. N. Молодкин, Б. В, Мчедлишвили, Т. В. Перадзе и Э. А. Фридман (72) Авторы изобретения

Ленинградский ордена Ленина полятехнический институт им. М. И, Калинина (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКБИНЫ

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к получению вакцине

Известен способ приготовления вакцин путем зонального центрифугирования вируссо- 5 держашей суспеизии.

Однако препарат, полученный атим способом, обладает как недостаточно высокой иммуногенностью, так и определенной аллергенностью. 10

Цель изобретения - повышение иммуногенности и снижение реактогенности препарата, Для этого суспензию в любой последовательности подвергают гельхроматографии 5 на натрий-борь-силикатном стекле или геле кремневой кислоты и I или однократно или повторно подвергают aдсорбции-элюции на том же материале, Способ получения вакцин осуществляют 20 следуюшим образом, Пример 1. Аллантоисную культуру вируса гриппа (штамм А Гонконг) в количестве 840 мл и титром 320 един. РГА пропускают через колонку с диаметром

3,0 см и высотой 32 см, заполненную на- „ трийборосиликатным стеклом (ращлер гранул

0,1-0,3 мм, диаметр nop 500 А) со скоростью 0,3-0,6 см/мин. Удаление примесей и элюцию вируса проводят поэтапно трис-буферами, приготовленнымн на апирогенной воде (0,005-0,05 М, рН-"8,2 -8,$, с концентрацией е1аСт, от 0 до 0,5 Й, причем

50-100% элюированного натрийборосилика1 ного материала содержится в 30 мл с титром

10000 ед. РГА, Выделение вакцины проводят на колонке с диаметром 3 см и высотой 50 см, заполненной крупнопористым гелем кремниевой кислоты (размер канул 0.16-0,25 мм, диаметр пор 450 А, пористость 1,3 см /г), Вирусный материал элюируют фосфатным буфером 0,02 М. pH= 7,4-7,5 с концентрацией NaCt и0,85% со ск-ростью 0,5 см/мин, Сравнительные характеристики исходного и очишенного вирусного материала:

Исходный Очишеи ный

2560

Титр (ед. PIA) 320 нейтраминидазная актив. ° Фею ° ° i t

i °,,уют 4,. ур

579309

Титр (ед.РГА)

Белок по Лоури (/Më) 7 05 07

Титр (.ед. РГА)

Белок по Лоури (мгlмл) 2,5

0,1

Составитель С. Малютина

Редакто И Ма ховская ТехРед А. Богдан Ко ек С. ШекмаР

Заказ 4337/28 Тираж 541 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгорол, ул. Проектная, 4 ность в ед. опт. плотности при 1»549 ммк 0,17 0,68

Инфекционная активность 8i5 9,3 .Беяок по Лоури мг/мл 5,5 0,04

В результате получают около 100 мл б вакцины с характеристиками, приведенными выше, содержащей не менее 50% исходного вирусного материала.

Инактивирование вируса в вакцине произаодится с помощью ультрафиолетового об- !О лучения. Толщина слоя . вируссодержашей жидкости от 0,1 до 0,5 см, мошность380М00 эрг/мм с. в течение 5 мин, Иммуногенность для мышей была изучена путем однократного введения 0,3 мл уби- !б той вакцины внуърибрюшинно. . Средний титр антнгемагглютининов равен 1-223. Иммуногенность для людей оценивалась после введения 20 волонтерам подкожно по0,5мл вакцины безыгопьным:инъектором. Кратность 2О прироста антител в среднем составила 17,2 при отсутствии выраженной реактогенности, П р и и е р 2. Аллантоисную культуру вируса гриппа (штамм А2 Виктория 36/72) с титром 640 ед. РГА гель-фильтруют на колонке диаметром 3 см и высотой 50 см, заполненной натрийборосиликатным стеклом (разму гранул 0,1-0,3 мм, диаметр пор-

1800А, пористость - 1,,6 см /г). Вирусный материал элюируют трисовым буфером рН 7,5 концентрацией ВаС1 =0,85 % со скоростью 0,5 см/мин.

Дальнейшие операции проводят также как и в- яр мере l..

Сравнительные характеристики исходного и очищенного вирусного материала

Исходный Очищенный

Титр (ед,РГА) 320, 1280

Нейтраминидазная активность 0,03 0,4

Белок (мг/мл) 2,4 0,03.

В результате получают около 200 мл вакцины, содержащей около 50 % исходного вирусного. материала.

Инактивирование также, как в примере l.

В опытах на мышах среднйй титр антигемаггелютининов = 1:275, Пример 3. Аллантоисную культуру вируса гриппа (штамм А2 Виктория 36/72) с титром 1;512 ед, РГА очищают с помощью адсорбции-элюции на формализированных эритр и тах (5-10%) Затем концентрируют колонке (диаметр-1 см, высота = 23 см), заполненной гелем кремниевой кислоты (диаметр пор 2000-3000Д, размер гранул 0,10,3 мм и пористость 1,2 см /r). Удаление

3 примесей и элюцию проводят как и в примере 1, Сравнительные характеристики исходного и- очищенного вирусного материала и элюага:

Исход- Очищен» Элюат ный ный

512 2048 4196

После инактивирования иммуногенность в опытах на мышах средний титр антигемагглютининов = 1-300, Пример 4. Культуральную суспензию вируса клещевого энцефалита (штаммСофьин), выращенную на первичной культуре ткани;куриных; эмбрионов в присутствии

19,9 среды с 2% НБС с титром 1024 ед.

РГА гельб-филыруют на колонке, заполненной натрийборсиликатным стеклом, диамет ром 3 см и высотой 50 см (размер гранул 0,1-0,3 радиусу пор 1000А, пористость 1,1 см- /г).

Дальнейшие операции проводят как и в примере 4.

Сравнительные характеристики исходного и очищенного вирусного материала.

Исходный Очищенный

1024 2048

Формула изобретения

Способ получения вакцины путем очистки и концентрирования вируссодержащей суспензии, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенности и снижения реактогенности, суспензию в любой последовательности подвергают гель-хроматографии на натрий-борсиликатном стекле или геле кремниевой кислоты и/или однократно или повторно подвергают адсорбции - элюции на том же материале,