Способ получения антибиотиков

Способ получения антибиотиков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

П ИСАН

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 57990 2

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

IlATEHlV (о1) Допопнитепьный к патенту (22) Заявлено 04.03.76 (21) 2322359/28-13 (23) Приоритет (32) 05.03.75 (31) 9057/75 (33) Вепикобритания (43) Опубликовано05 11 77 Бюллетень ¹41 (45) Дата опубликования описания 06.10.77 (51) М. Кл.е

С 12139/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР

ll9 делам изобретений и открытий (53) УДК615.779. .931 (088.8) Ин ос тр анцы

Каропина Кэронеппи, Грация Беретта, Мария Роза Бардоне, Франческо Паренти (Итапия) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Группэ Лепетит С. П. А." (Итапия) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ

Изобретение относится к микрэбиопогической промышленности и касается получения антиби этиков.

Предпагаемые антибиотики новые и способ их пэпучения в патентной и научно-тех- б нической питературе не описан.

11епь изобретения — получение антибиотиков тейхэмицинэв.

Эта дель достигается тем, чтэ штамм

Ас1 ттор Га иеа kei cho wy cek» cus АТСС 10

31121 вырашивают в аэробных условиях на питательной среде, содержашей источники углерода и азота и минеральные соли с последуюшим выделением комплекса целевого продукта и разделением его на отдель н ые комп он ент ы.

Дпя попучения смеси антибиотиков испопьзуют штамм Ас » иорГаиеЕ ветс)томусЕ4тcus АТСС 31121.

ШтаММ АСОИОрГаттЕб тЕ<СЬО ИуСЕ1тоць О имеет номер А/8327 и хранится в коллекции АТСС под номером 31121.

Штамм пэпучен из почвенной пробы из деревни тоdi Ч 0Pcxge-3rrdor Индия.

Штамм хорошо развивается на разпичных агар овых питатепьных средах. Колонии диаметром 5-6 мм показывают Hà агаре с овсяН0Н мукой равномерные контуры с куполообразной выпукпостью в середине. В некоторых средах набпюдают значитепьное копичество стельного вэздушнэгэ мицепия.

Спэрангии в большинстве сред образуются в бэпьшом .копичестве и находятся главным образом на купопе копонии. Они от пичаются формой от шарообразной до овапьной, равномерными контурами и диаметром

15-25 ммк.

Спэрангиофоры прямые по форме, длиной около 15 ммк и диаметром 2 ммк. Споры подвижные, имеют форму от шарообразной дэ овапьнэй и диаметр 1,5-2,0 ммк.

Морфологические свойства, Гпюкозатор Чапека. Рост хороший, гладкая поверхность светло-оранжевого цвета, образуется бепо-розовый воздушный мицепий — нескопько отдепьных спорангиев.

Сахарозо-аспарагиновый агар. Средний рост, поверхность гпадкая, воздушный мицепий оранжевого цвета.

Картофепьный агар. Рост хороший, гпад579902

40 кая и тонкая поверхность. светло- орехового цвета. Воздушный мицепий светпо-розового цвета, растворимый пигмент светпо-ореховый.

Яично-апьбуминовый агар. Рост хороший, гпадкая поверхность копонии светпо-оранжевого цвета с розовым напетом, с хорошо развитым воздушным мицепием.

Пептоно-гпюкозный агар. Хорошо развитые копонии со скпацчатой поверхностью темно- 1О оранжевого цвета, образует пигмент светпо-янтарного цвета.

Ломтики картофеля. Рост умеренный, копонии со складчатой поверхностью светпо-оранжевого цвета.

Солодовый агар с дрожжевым экстрактом, Рост хороший, колонии со слегка складчатой поверхностью светло-оранжевого цвета с розовым оттенком, воздушный мицелий развит хорошо,светпо-коричневого цвета, растворимый пигмент янтарного цвета.

Агар с овсяной мукой. Рост хороший, гпадкая поверхность от бпедно-оранжевого до светло-оранжево-коричневого, с возрастом много спорангиев, светло-розового цвета, растворимый пигмент светпо-орехово с цвета.

Усваивает фруктозу, маннит, ксипоэу, арабинозу, сахароэу, маннозу, гпюкозу.

Ппохо усваивает сапицин, лактозу, не усваи- ЗО вает инозит, рамнозу, рафинозу, цеплюпозу.

Гидролиэует крахмап, казеин, сероводород образует, не гидролизует тирозин, кальциевые соли яблочной кислоты, лакмусовое молоко не коагулирует, слабо пептонизирует лакмусовое молоко, нитраты восстанавливает, жепатину разжижает, цеппюпозу разпагает.

Дпя попучения антибиотиков штамм

1сйиорГа иез keichomycek cus иоч.зр.

АТСС 31121 предварительно культивируют в питательной среде в аэробных условиях до получения значительного количества мицелиев, при рН 6-8.

Культура, полученная в качапочной коп- 45 бе, имеет спедующий состав г/и:

Мясной экстракт

Триптон 5,0

Дрожжевой экстракт 5,0

Глюкоза 1,0 50

Крахмап растворимый 24,0

Капьциевая сопь ябпочной кислоты 4,0

Вода дистиппированная до 1000,0 мп.

Колбы встряхивают 24 ч при 28-30 С,55 поспе чего культуру (1п) пересевают в ферментеры, содержащие каждый по 10 и питательной среды с педующег о с остава, в г:

Мясной экстракт 40

Пептон 40

Экстракт дрожжевой 10

Натрий хпористый 25

Мука соевая 100

Гпюкоза 500

Карбонат капьция 50

Вода водопроводная до 10п

Питатепьную среду с пересеянной предваритепьной купьтурой аэробно культивируют с перемешиванием при 28-30 С. Через одинаковые интервапы микр оби опогическим путем определяют образование антибиотиков

Максимального образования достигают через 72-96 ч.

Содержащиеся в ферментационной среде и мицепиапьном жмыхе антибиотики экстрагируют обычным способом органическими растворитепями. рН ферментационного раствора доводят до 3,5 добавпением хпористого водорода (8%), поспе чего дважды экстрагируют бутанопом (30%). Органические экстракты о концентрируют в вакууме при 45 С до 1 /10 первоначального объема, промывают небольшим копичеством воды при рН 3,5 и снова концентрируют до небопьшого объема. Концентрированный раствор выдерживают при невысокой температуре 10-15 ч до образования осадка, который отфипьтровывают. Фильтрованный раствор выливают в большое копичество петропейного эфира, сырой осадок отфипьтровывают.

Мицепиапьный жмых промывают водой при рН 3,5, высушивают в вакууме и экстрагируют смесью вода-ацетон (2:8). Ацетоновый экстракт концентрируют в вакууме при 4О-45 С. Водный остаток доводят до рН 3,5 и трижды экстрагируют бутанолом. Собранные бутаноповые экстракты промывают небопьшим количеством воды пои рН

3,5 и концентрируют в вакууме до 1/20 первоначального объема. Концентрированный раствор выдерживают при 40оС 10-12 ч.

Получают сырой осадок, который отфипьтровывают, Фильтрованный раствор выпивают в бопьшое копичество петропейного эфира, образуется небопьшое копичество осадка.

Результаты, полученные согласно проведенной хроматографии, показывают, что продукты, попученные охпаждением концентрированных бутаноповых экстрактов в основном содержат тейхомоцин A А > и А причем А> составляет наибольшую долю, а продукты, полученные осаждением в инертном непопярном растворитепе (петропейном эфире), содержат антибиотик 8327 факторы В и С.

Антибиотики 8327 факторы В и С разделяют противоточными способами и выдепяют в виде отдепьных соединений антибиоти579902

Фракции, содержащие один отдепьный антибиотик, концентрируют до очень незначитепьного объема, разбавпяют метанопом и выливают в бопьшое количество ацетона, в котором все три антибиотика выпадают в виде беповатого аморфного порошка.

Новые антибиотики применяют, например, дпя печения заразных забопеваний у животных, дпя дезинфекции предметов и инструментов, в качестве агентов роста у животных и во многих других обпастях борьбы с патогенными бактериями.

Острая токсичность у мышей тейхомицина А 500 мг/кг (внутривенно), тейхомицина

А 1000 мг/кг (внутрибрюшно).

В табп. даны результаты действия на организм тейхомицинов А4 и А при экспериментальных инфекциях.

Полученный тейхомицин А представпяет собой аморфный порошок, который поспе допопнитепьной очистки смопой, супьфинированной попистиропом, обпадает в водном растворе до рН 4. спедующими физико-химическими свойствами. Точка ппавпения

260 С (с разложением). Элементарный акапиз,%: С 54,20; Н 5,70;й6,80;

С 0 3, 30 О 26, 70.

Соединение растворяется в водном растворе при рН 7,0, в водном бикарбонате натрия, разбавленных водных растворах гидроокисей щелочных метаппов, смесях метамоп-вода, частично растворяется в ме45 танопе и этанопе, не растворяется в разбав ленных минеральных киспотах и неполярных органических растворителях.

Тейхомицин А представпяет собой аморфный порошок со следующими физико-химиче50 скими свойствами. о

Точка ппавпения 220 С (с разпожением). Эпементарный анализ%: С 52,9 °

Н 7,6;М 5,26, 0 32,5; эола 3,26.

Соединение растворяется в водном раст55 воре при рН 7,0, водном бикарбонате натПодписное

ЦНИИПИ Заказ 3595/48 Тираж 541

Фипиап ППП "Патент", r. Ужгород, уп. Проектная, 4

5 ков. В качестве растворитепя дпя раздепения пригодна смесь из фосфатного буфера (1/15 М,рН 7,0)-н-бутаноп-гексан (1:1:0,05)

Тейхомицины А,А и А раздепяют путем ° хроматографии на копонке с применением сефадекса LH-20, а в качестве элюента смеси из н-пропаноп-этипацетата N H OH

0,2 н. (10:7:7).

Эпюированные фракции анапизируют с

10 применением тонкоспойной хроматографии на сипикагепе (система растворитепей:н-пропаноп-этипацетат -концентрированная гидроокись аммония, 2:1:2, а также микробиопогического развития наЯ.auveus в качестве

15 системы контропя. Тейхомицин А отпичается показатепем Ы = 0,48, тейхомицин А> R =0, 10, а тейхомицин А R =0,0. рия, разбавленных водных pacI aopax гидроокисей щепочных метаппов, диметипформамиде, диметипсупьфоксиде, частично растворяется в метанопе и этанопе, не растворяется в разбавпенных минерапьных киспотах и непопярных органических растворитепях.

Определение молекулярного веса хроматографией с применением Sephadex 5 -75 дает следующие результаты: 20,000 в фосфатном буфере, рН 7,38 и 30,000 в утратном буфере, рН 4,4.

ФopMуча изобретения

Способ получения антибиотиков, о тличаюши йся тем, что штамм

Actiиор3аиеа ke cho ycekicus АТСС

3 1 1 2 1 вырап.бивак т в аз,oGHblx условиях на тятательной среде, содержащей источники углерода и азота и минеральные соли с последующим выделением комплекса целевого продукта и разделением его на отдельные компоненты.