Способ получения индикатора для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Способ получения индикатора для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 579903 (61) Дополнительный к патенту (51) M. Кл.

С 12 К 1/00 (22) Заявлено31.10.75 (21) 2122501/

/2191052/28-13 (23) Приоритет14.04.7532) 16.04,74

Государственный комитет

Соаота Министров СССР по делам изобретений и открытий (31) 461465 (33) США (43) Опубликовано 05. 11. 77. Бюллетень № 41 (45) Дата опубликования описания 06.10.77 (53) УДК 615.779.0 (088.8) Иностранцы

Ральф Роберт Пфайффер и Гари Ловелл Энджел (72) Авторы изобретения (США) Иностранная фирма

"Эли Лилли энд Компани (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДИКАТОРА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Ч УВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГА НИЗМОВ

К АНТИБИОТИКАМ

Изобретение относится к микробиологии.

Известен способ получения индикатора для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем нанесения антибиотика в виде суспензии на поверхность абсорбента с последующим выделением абсорбента(1).

Однако такой способ не обеспечивает высокой стабильности индикатора.

С целью повышения стабильности ин- 10 дикатора по предлагаемому способу кристаллический антибиотик типа p -naKraMa перед нанесением На абсорбент соединяют с носителем.

Способ получения индикатора заключает- 15 ся в KDHTBKTHpDBBHHH абсорбента с дисперсией кристаллического антибиотика типа

/3 — лактама в летучем нерастворяющемся носителе, абсорбции этим абсорбентом указанной дисперсии, испарении носителя с вещест-20 ва при сохранении равномерного плотного осадка антибиотика в кристаллическом состоянии на единицу поверхности вещества. Для проверки чувствительности изготавливают из этого вещества отдельные диски. 25

Предпочтительным абсорбенгом является абсорбирующая бумага весом 26-34мг/см. способная абсорбировать приблизительно 2-3кратное количество (относительно веса бумаги дистиллированной воды). Толщина бумаги не должна сильно изменяться и должна быть приблизительно 1,5 мм. Бумага должна быть чистой и белой и не содержать веществ, подавляющих или усиливающих активность находящегося на ней антибиотика типа /о -лактама, а также не влиять на рН и не оказывать буферного действия.

Этим требованиям удовлетворяет в основном чистая альфацеллюлозная бумага. Бумагу можно применять и IH в виде листов или в рулонах.

Кристаллический антибиотик типа/ -лакгама, наносимый на бумагу, на которой вырезают проверочные диски, должен иметь такой размер частиц, чтобы все частицы проходили через сито 100 меш (диаметр отверстия 0,149 мм).

Антибиотик типа р- лактама диспергируют в летучем нерасгворяющемся носителе. Носитель применяют для нанесения огмеренно579903 го количества антибиотика типа P — пактама на единицу поверхности бумаги. Состав носителя не имеет значения, необходимо, чтобы OH бып летучим, инертным и чтобы антибиотик гипар- пактама не растворялся в нем. Носитель должен иметь темпераа туру кипения 100 С ипи ниже при давлении

700 мм pr сг., чтобы он легка испарился с бумаги после нанесения на нее. Нераствоь ряющийся носитель должен быть с темпера- 10 о гурой точки кипения 100 С ипи ниже пры давлении 780 мм рт. ст.

Дисперсию антибиотика в летучем нерастворяюшемся носителе можно приготовить образованием суспензии кристаппичес- 15

IIoI o ан! иби этика типа (-,так тама в нэсытеTIQ. KoHIIBHtpaIINII антибиотика типа /g —. Г1акraIiIB в дисперсии зависит or абсорбцыонной способности бумаги, требуемой степени насьУщения Fg)."pIBI ы но и i епем! и i p! б Гемэй 20 концентрации антибиотика типа 3 — пактама на единицу- поверхности бумаги. t 1aïpèìåp, ес *II абсэрбпиэнная способность применяемой бумаги к нерастворяющемуся нэситепю равна 2 l относительно веса бум!аги) и спе- 25 дуег насытить бумагу íà 75io ее абсэроционнэй способности, то дпя бумаги весом

30 мг/см требуется 45 мг такого носителя на каждый квадратный "антимегр бумаги, находящейся в контакте с носителем. 30

Суспендируюшые агенты, которые не вызывают изменения рН бумаги и не влияют на активнэсть антибиотика типа (3-пактами, ! можно добавлять к дисперс11и дпя обеспечения гомогенности суспензии ангибиэгика в носителе. В качестве таких агентов используют мегилцеппюгозу и пэливиниппиррэпидон, последний !IpeIIIIB IrIIr II IIo няют в концентрации 1% or нэсыгепя.

Применение этих агентов способствует также адгезии частиц антибиотика типа рIBKTBMB к бумаге после испарения с нее носителя.

При применении суспендирующего агента необходима тесная связь этого агента с носителем, т. е. агент должен растворяться в носителе ипи эбразовывагь гель. Иначе добавление такого агента ничего не дает.

Хорошее отложение кристаллов антибиотика типа p— - пактама на бумаге можно получить методом непрерывного полива дисперсии антибиотика типар-пактама через порог, причем ширина потока должна быть равна ширине пропитываемого листа бумаги, а скорость потока должна соответствовать скорости движения порога над бумагой ипи скорости движения бумаги под порогом. 11елесообразно применять неподвижный порог и пере» мешать под ним бумагу с постоянной скоросгью. Порог можно применять в сочетании с ящичным распределителем ипи этдепьно. ЕсHPI с бумагой контактирует равномерный спой дисперсии антибиотика типа

g - пакгама, нерасгворяющийся носитель быстро абсорбируется бумагой, оставляя на ней отпэжения кристаллов. Важным является тэ, чтобы общее количество ввэдимого на бумагу носителя было менее 100% абсорбциэнной способности бумаги дпя обеспечения достаточной равномерности эгпэжения на ней кристаппэв антибиотика типа

/ д — пакт.ама.

Контакт бумаги, содержащей подложку антибиотика типа ф — пактама с дисперсиями этих антибиотиков, может осуществляться также набрызгом дисперсии на бумагу.

Зто мэжнэ эсушествпть перемещением бумаги с равнэмерной регулируемой скоростью мимо разбрызгиьающего сопла, предпочтительны coIIHB лопастного типа, в которое дисперсия пагне-Bares под давлением. Объем подаваемого B соппо потока должен сэогвсгсгвовать скорости движения бумаги мимо сопла, Необхэдимэ, чтэбы бумага находилась пэд соппом и чтоаы размеры сопла могли обеспечить ширичу струи, соответствующую ширине движущейся пэд соплом бумаги.

При зтэм бумага может быть закреплена непэдвижно, а разбрызгивающее соппэ движется с установленной постояннэй скоростью над бумагой. Но этот вариант высэкэзффективен в тех спучаях, когда дпя пэпучения дисков дпя прэверкы чувствительности к антибиотикам типа ф-пактама применяют отдельные листы бумаги.

После контакта бумаги с дисперсией кристаллического антибиотика типа р -пактама и абсорбции бумагой нерасгворяюшегося носителя, бумагу высушивают дпя удаления c Hee нэситепя. Это осуществляют известными способами. Например, если бумаг поступает в виде непрерывного рулона, го влажную бумагу- можно медленно перемешать через туннельную сушилку, в которой носитель испаряегся и отсасываегся в систему рекуперации растворителя ипи удаляет ся с отходами. Отдельные листы влажной бумаги можно подвешивать на бесконечном конвейере, проходящем через туннельную сушилку, ипи же эти листы можно пс мещать в камерную сушилку, к которой подводят тепло и в которэй имеется устройство дпя удаления паров носителя и транспортирования этих паров в соответствующую систему их удаления.

Дпя ускорения процесса испарения можно использовать вакуум. Температура сушки должна соответствовать температуре ImIIe579903

Составитель С. Малютина

Редактор П. Волкова Техред А. Демьянова Корректоо М. Демчик

Заказ 35 95/48 Тираж 541 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, уп. Проектная, 4 ния носителя при roM давлении, при котором ведется сушка, и должна бить не более, чем на несколько градусов выше температуры кипения, но не выше 100 С. Кроме того, высушиваемая бумага должна находить 5 ся при температуре сушки не дольше, чем требуется дпя полного удаления носителя, чтобы не происходило разложения антибиотиков.

Отдельные проверочные диски могут )p быть изготовлены из высушенной бумаги, на которую бып осажден антибиотик типа р-лактама. Дпя этого вырезают отдельные диски специальным штампом. Размер и форма дисков должна удовлетворять пра- д вилам, относящимся к применению этих дисков. При применении проверочных дисков зоны подавления будут различными дпя различных антиби этиков.

Пример. Диски для прверки чувстви- 20 тепьности к цефапотину приготавливают следующим образом.

Кристалл цефапотина натрия измельчают в мопотковой мельнице до размера частиц, проходящих полностью через сито 100 меш 25 (по классификации США).

Приготовленные таким образом кристаллы цефапотина натрия суспендируют в изопропаноле с концентрацией 2 мг/мл (0,2%).

Обрабатывают листы альфацелпюлозной бума- 30 ги этой дисперсией в количестве приблизительно 60 мкп/см (0,06 мп/см

2 2

Полученную влажную бумагу сушат на проволочной сетке из нержавеющей стали в рециркуляционнэй воздушной сушилке при 35

60 С и давлении 760 мм рт. ст. в течение 4 мин, Отдельные проверочные диски проверяют на равномерность содержания цефалэтина методом спектрофотометрическэго анализа, десять дисков показали отклоне- 40 ния от среднего значения менее Ь%.

Проверочные диски, приготовленные предлагаемым способом, испытывают на эффективность путем проверки чувствитепьности к антибиотикам у микроорганизмов ре »е

Рс» Рие чп»оп»а.

Диски кладутся на агар как стороной, бывшей в контакте с антибиотиком, так и противоположной стороной. Наблюдают одинаковые зоны подавления независимо от того, какой стороной диск бып положен на агар.

Другие диски хранят при 37оС без осушителей. Технические диски, приготовленные известным способом, хранят точно в таких же условиях.

Результаты испытаний показывают, что проверочные диски с цефапотином натрия, приготовленные предлагаемым способом, отличаются большей стабильностью при нагреве и хранении, чем технические проверочные диски, приготовленные известным способом.

Форм па изобретения

Способ получения индикатора для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем нанесения антибиотика в виде суспензии на поверхность абсорбента с последующим высушиванием абсорбента, о r и и ч а ю шийся тем, чтэ, с целью повышения стабильности индикатора, кристаллический антибиотик типа р-пактама перед нанесением HB абсорбент соединяют с носителем.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1 А w e I- j c и, J. C H e m» s k i-у Р а t h, 45, 1 966, р. 493.