Способ получения маннана

Способ получения маннана

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

!

1Ц 580214

0пНСАННЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сок!а Советских

Социалистических

Республик (h1) ДОПОЛ11итсл!Иlос к авт. свпд Вгу (22) Заявлено 12.04.76 (21) 2345297!28-13 (51) М. Кл. - С 12D 13/04 с I рисосдинснием заявки ¹

Государствеииый комитет

Совета Мииистров СССР (23) I!риор11.1ст (43) Опубликовано 15.11.77. В1оллстснь ¹ 42 (4О) Д!11 Я (111 K i )1 I I lloi5 a I I I IH ои ll II I I II II 0 1. 1 . I i (53) УДК 577.15(088.8) по делам иасоретений и открытий (72) Авторы из об рстс II I I II

H. П. Елинов, Г. Л. Витовская, В. У. Заборонок, А. И. Валаханович, Л. А. Витковская, Р. В. 3арецкая, H. В. Логинов и В. В. Папкович (71) Заявитель

Ленинградский химико-фармацевтический институт (54) СНОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ МАННЛНЛ

Изобретение относится к области микробиологической промышленности.

Известен способ получения маннана с помощью дрожжей рода Rhodotorula путем ферментации, супсрцснтрифугирования культуральнОЙ жидкости, Осяихдения мянняна-cl ipLIa из нативного раствора этанолом, очистки с помощью реактива Фелинга с разрушением медно-маннанового комплекса 1 í. 1Сl и осаждения четырьмя объемами метанола (1).

1О

Недостатком способа является невысокая активность маннана.

С целью повышения активности препарата по предлагаемому способу дрожжи рода Rhodotorula подвергают ферментации с использованием известной питательной среды, после чсго культуральную жидкость отделяют QT клеток супсрцснтрифугированием. Супернант подщслачивают для изменения рН с 1,9 — 2,0 до б,5 — 7,0 и подвергают вакуум-выпариванию, сокращая ORoì его в 8 — 10 раз. Упаренный раствор полисахарида подкисляют до рН 4,8—

5,0 и осаждают равным объемом этанола. Г1олучеш1ый осадок маннана-сырца подвсрга1от химической очистке, заключа1о1цсйся В растворении последнего, получении .:сдно-ман Iifoвого комплекса с помощью рсак1ивя Фелинга, деиопиза1ции медно-: !яннянОВОГО кОъ!и lc l4ña кятиопитами КУ-2-20 или КУ-2-8, последук1щсй 30 корректировке рН и осаждении чистого маннана этанолом.

Пример. В качестве продуцента полисахарида используют дрожжи Rhodotorula штамм ВКМУ 341.

В качестве посевной п ферментационной сред используют среду следующего состава, г: (!UH4) S04 2,5

КН2Р04 1,0

MgS04. (Н20 0,5

Д!ЯС1 0,5

СЯС1>. 2НеО 0,1

Витамины, мг: в 0,4

В 0,2

Вв 0,4

Глюкоза, г 50 на 1 л водопроводной воды с pll 5,3 — 5,4.

Среду разливают в колбы Эрлснмейера емкостью 750 мл по 300 мл и стерилизуют в автоклавс при 0,5 атм в течение 30 мин. Раствор витаминов, стерилизованный ультрафиолетовыми лучами, вносят непосредственно перед засевом культуры.

Для выращивания посевного материала производят зассв среды двуx-трехсуточной культ1 рОй дрожжей, Выращен н01! ня с1 сло-arape при 25=С, в виде 2 млрд. взвеси по бактсриальному стандарту по 7,5 ;Ië в колбу.

580214

Формула изобретения

Составитель Н. Бондаренко

Техред Н. Рыбкина

Корректоры: О. Данишевв и 3. Тарасова

Редактор В. Блохина

Подписное

Заказ 2597/4 Изд. Мю 955 Тираж 563

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

1 lолученный ннокулум вноси п (1)ерментационные колбы в количестве 10 мл и выращиВа)от прп тех же температуре )1 1)ежи ме персмешивания.

Г!олучен)1ую в результате фсрмептации культуральную жидкость отделяют от клеток суперцентрифугированием при 28 — 29 тыс. об/мин, Нативный раствор, имеющий рН 1,95, подщелачивают до рН 6,7 добавлением 6 н. раствора ХаОН (около 5 мл 6 н. раствора

NaOH на 1 л нативного раствора) и концентрируют в 8 — 10 раз по объему выпариванием под вакуумом при 38 — 40 С. Упаренный раствор подкисляют соляной кислотой до рН 4,8—

5,0 и добавляют 1 л этилового спирта к 1 л раствора полисахарида. Получают осадок маннана-сырца, который отделяют от водноспиртового маточника, промывают этиловым спиртом и используют для получения чистого маннана.

Маннан-сырец содержит не менее 70% углеводного компонента, в котором не менее 60 приходится на маннан и примерно 10 /о на углеводные примеси (глюкоза и галактоза).

Очищенный маннан из маннана-сырца получают следующим образом. 2 r маннана-сырца растворяют в 100 мл дистиллированной воды, раствор центрифугируют при 6000—

7000 об/мин. К центрифугату добавляют

12,5 мл реактива Фелинга. Выпавший осадок медно-маннанового комплекса отделяют от маточника на воронке Бюхнера, промывают 2 /оным водным раствором КОН, а затем этанолом. Промытый осадок переносят в стакан, добавляют 80 мл дистиллированной воды, 6,25 г катионита КУ-2-8 (Н+) и перемешивают в течение 30 мин. Деионизированный раствор маннана отфильтровывают от катионита КУ-2-8 (Сц++) на воронке Бюхнера.

Последний промывают 80 мл дистиллированной воды, промывные воды присоединяют к основному раствору, производят корректировку р11, доводя его значение до I,S о,О раствором

KaOI- и оса)кдают двумя объемами этилового спирта, Осадок чистого маннана промывают этиловым спиртом и сушат в вакууме. Выход

5 очищенного маппана составляет около 55о/о по огпошепшо к манпапу-сырцу.

Выход маннана составляет 1,1 г/л. чистого препарата: содержание маннозы не менее 98 /о, зольность не более 0,4о/о, удельное вращение (а)+" = — 83 (0,25 /о

11гО) температура разложения 260 С содержание меди не более 0,003о/о

15 рН водных растворов 6,5 — 7,0.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получить активный препарат со стабильными параметрами, пригодный для использования в качестве биологически активного вещества.

Способ получения маннана путем культиви25 рования дрожжей рода Rhodotorula, отделения культуральной жидкости от биомассы, осаждения маннана-сырца из нативного раствора с последующим выделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, 30 что, с целью повышения активности препарата, нативный раствор подщелачивают до рН

6,5 — 7,0, упаривают в вакууме в 8 — 10 раз, затем осаждают маннан-сырец равным объемом этанола при рН 4,8 — 5,0 и осадок обрабатыва35 ют реактивом Фелинга, полученный осадокдеионизируют катионитом и осаждают этанолом при рН 4,8 — 5,0.

Источники информации, 40 принятые во внимание при экспертизе

1. Canadian Journal Chemistry, 1965, 43, 950 †9.