Штамм вас к4-75

Штамм вас к4-75

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И C А Н И Е,1 ) 5802)6

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сан1з Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свпд-ву (22) Заявлено 21.11.75 (21) 2319249/15 с присоединением заявки 1е (51) М. Кл. - С 12К 3/00 (23) Г1 р и ор итет (43) Опубликовано 15.11.77. Бюллетень Ы 42 (53) УДК 632.937(088.8) (45) Дата опубликования описания 30.11.77

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий (72) Авторы изобретения

А. И. Козлов, Г. С. Смолина и А. А. Чупин (71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов (54) ШТАММ ВАС. THURINGIENSIS

Ъ А К G А 11 E К1А E К4-75

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству энтобактерина, применяемого для уничтожения насекомых-вредителей сельскохозяйственных культур.

Производство энтобактерина основано на штаммах Вас. thuringiensis, синтезирующих равные количества спор и кристаллов. Эти свойства микроорганизмов, обеспечивающие высокую эффективность препарата, нестабильны и часто меняются в процессе производства энтобактерина (1).

В настоящее время в микробиологической промышленности для производства энтобактерина-3 используют штамм Бас. thuringiensis var galleriae 69/6. Штамм 69/6 выделен из гусениц большой пчелиной огневки и хранится в коллекции ВНИИзагциты растений (2).

Однако штамм 69/6 является чувствительным к вирулентным фагам и, кроме того, в процессе глубинного культивирования на жидких питательных средах быстро теряет вирулентность и сохранность.

Целью изобретения является получение такого штамма Вас. thuringiensis, который отвечает всем требованиям промышленного способа производства энтомопатогенного бактериального препарата энтобактерина-3, штамма, обладающего фазоустойчивостью, хорошей сохранностью и высокой вирулентностью, без утраты этик признаков в условиях глубинного культивирования на жидких питательных средах.

Штамм Вас. thuringiensis К4-75, отвечающий указанным требованиям, выделен авторами из исходного дикого лизогенного штамма 69/6 методом направленной селекции с включением таких этапов, как глубинное культивирование в присутствии экзогениых

10 впрулентных фагов / F1B, 4/F1A, QF2A, /ГЗА, /Р4Л, 1 Р5А, /Г5В, пассажи на обогащенном аминокислотами и микроэлементами агаре и пропуск через насекомых-вредителей, являющихся тест-объектамн и данному серотипу.

Штамм К4-75 обладает следующими свойствами.

Клетки прямые, палочковидные, размером

2,0+5,0 мкм. Малоподвижны, встречаются в

20 виде коротки.; и длинных цепей. Перитрпхи грамположительны, В период спорообразованпя образуют овальные споры, слабо прокрашивающиеся фуксином, и крупные в виде тетраэдров, энтомоцпдные белковые кристаллы, 25 хорошо прокрашива1ощиеся 1%-ных1 раствором амидо черным и кумаси в 7%-ной уксусно и кислоте.

Органическая среда для размножения в условиях поверхностного роста, СПА 5, для

30 глубинного культивирования дрожжеполиса580216

Составитель М. Мирзаев

Техрсд Н. Рыбкина Корректоры: Л. Котова и

И. П оз ня ко вся а я

Редактор Е. Яковчик

Подписное

Заказ 3197/11 Изд. № 945 Тираж 563

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раугнская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 харидная или кукурузно-гликозная жидкая питательная среда.

На сухом питательном агаре образует беловато-кремовые колонии с ризоидными краями в R-форме. Пигменты не образует. Относится к факультативным аэробам. Оптимальный рН среды 6,7 — 8,7. Температура роста

20 — 30 С, время культивирования 35 — 48 ч. Келатину разжижает умеренно, молоко слабо пептонизируст с образованием сгустка.

Крахмал гидролизует. Усваивает глюкозу, мальтозу, глицерин и низкомолекулярные фракции целлюлозы.

Зависит от наличия в среде оспарагиновой и глютаминовой кислот, лимоннокислого натрия,микро- и макроэлементов.

Антагонистические свойства проявляет по отношению к Вас. thuringiensis первого, трстьего, четвертого и десятого серотипов.

Штамм К4-75 обладает рядом отличительных признаков, дающих ему преимущества перед штаммом 69/6.

У штамма К4-75 значительно крупнее клетки, больше число генераций, за счет чего он в процессе глубинного культивирования дает больший, чем исходный шта мм 69/6, титр жизнеспособных спор в 1 мл культуральной жидкости. Кроме того, К4-75 имеет почти в два раза крупнее, по сравнению с исходным вариантом, инсектицидные кристаллы, форма которых не в виде луковиц, а в виде ромба. Величина кристаллов обусловила предлагаемому штамму более высокую вирулентность по отношению к тест-объекту.

Штамм К4-75 имеет более развитую ферментную систему, за счет чего он хорошо культивируется как на кукурузной среде, так и на дрожжеполисахаридной, тогда как исходный штамм 69/6 может культивироваться только на кукурузно-глюкозной.

Формула изобретения

Штамм Вас. thuringiensis var galleriae

К4-75. Хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов. Морфологические признаки. Клетки прямые, палочковидные, размером 2,0;к,5,0 мкм. Малоподвижные, встречаются в виде коротких и длинных цепей.

Перитрихи грамположительны. В период спорообразования образуют овальные споры, слабо прокрашивающиеся фуксином, и крупные четырехгранные в виде ромба. Энтомоцидные белковые кристаллы хорошо прокрашивающиеся 1%-ным раствором амидо черным и кумаси в 7%-ной уксусной кислоте.

На сухом питательном агаре (СПА) образует круглые колонии с ризоидными краями в R-форме. Цвет беловато-кремовый. Поверхность колоний сухая, матовая, выпуклая. Диаметр колоний суточной культуры 0,3 — 0,5 см.

Пигменты не образует. Физиологические признаки. Органическая среда для поверхностного культивирования, сухой питательный агар. Рост и деление клеток на СПА продолжается в течение 2--3 сут. На четвертые сутки наступает полное спорообразование и рассыпание клеток на споры и параспоральные включения (эндотоксин).

Дрожжеполисахаридная среда (ДПС) для глубинного культивирования в условиях производства. Рост интенсивный. Экспоненциальная фаза роста с 5 по 18 ч. В процессе роста и деления клетки крупные, выход биомассы

30 — 35 кг на 1 т. культуральной жидкости.

20 Титр жизнеспособны.; спор 2,5 — 3 млд/мг культуральной жидкости. Экзотоксин не продуцирует.

Кукурузно-глюкозная жидкая питательная среда. Рост умеренный. Экспоненциальная

25 фаза роста с 5 по 16 ч. Выход биомассы 25—

30 кг на тонну культуральной жидкости. Титр жизнеспособных спор 2,5 — 3 млд/мг культуральной жидкости.

Отношение к углеводам. Глюкозу, рибозу, 30 трегалозу, целлобиозу, мальтозу усваивает с образованием уксусной кислоты, без выделения газа. Крахмал гидролизует.

Усваивает глицерин, салицин.

5Келатину разжижает умеренно.

35 Молоко слабо пептонизирует с образованием сгустка.

Относится к факультативным аэробам. Оптимальные условия культивирования рН 6,7—

8,7; темепратура 20 — 30 С. Зависим от нали40 чия в среде аспарагиновой и глютаминовой кислот, лимоннокислого натрия, макро- и микроэлементов. Антагонистические свойства.

Проявляет по отношению к Вас. thuringiensis первого, третьего, четвертого и десятого серо45 типов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Скворцова М, М., Елизарова Н. А. Зависимость биологической активности энтобакте50 рина от содержания в нем спор и кристаллов

Вас. thuringiensis var galleriae. Микробиологическая промышленность, 1972, № 12, с. 22—

25.

2. Исакова Н. П,, Строева И. А. Опытный отбор и сохранение штаммов Вас. thuringiensis var galleriae для производства энтобактерина — 3. Труды ВИЗР. Вып. 31, 1968, с. 371.