Способ выращивания микроорганизмов

Способ выращивания микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1и1 582272

СПИ

ИЗОБ к автовск

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнитель (22) Заявлено 07. с присоедиие (23) Приоритет (43) Опубликован (45) Дата опубли (51) М. Кл.з С 12В 3/14

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 663.15(088.8) оо делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

А. К. Ялынская, И. Н. Гончарова, Л. Н. Петрулянис, Л. И. Миронова и Л. А. Фелдмане

Ордена Трудового Красного Знамени институт органического синтеза АН Латвийской ССР (71) Заявитель (54) СПОСОВ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к области микробиологии, точнее касается способа выращивания микроорганизмов.

Известен способ выращивания микроорганизмов, предусматривающий их культивирование в условиях аэрации в питательной среде, содержащей источник углерода, азота, необходимые минеральные соли и производные азотистых оснований в качестве стимулятора роста.

Известный способ выращивания микроорганизмов протекает недостаточно интенсивно, а выход продукта, например l-лизина, невысок.

Цель изобретения — повышение интенсификации процесса, Это достигается тем, что в качестве производных азотистых оснований используют 6бензоиламино-9- (1,3-диоксипропил-2) пурин и

6-амино-9 — (1,4 — диацетоксибутил — 2) пурин в концентрации 10 — " — 10 — М.

В качестве тестообъекта для выращивания микроорганизмов с использованием в качестве стимуляторов роста микроорганизмов (биосинтеза l-лизина) 6-бензоиламино-9- (1,3-диоксипропил-2) пурина и б-амино-9-(1,4 - диацетоксибутил-2) пурина брали Brevibacterium Sp.

22 Л, который ауксотрофен по треонину и метионину и является промышленным продуцентом l-лизина.

Максимальное стимулирование биосинтсза лизина 6 - бензоиламино-9- (1,3-диоксипропил2) пурииом в концентрации 10 — 10 — М составляет 35% при максимальном стимулировании синтеза рибонуклеиновой кислоты (РНК), равном 32 /о. Максимальное стимулирование биосинтеза лизина 6-амина-9- (1,4-диацетоксибутил-2) пурином при концентрации 10 — 10 составляет 39% при максимальном стимулировании синтеза РНК, равном 42 /о, Указанные соединения также активно влияют на включение меченого аминокислотного гидролизата, т. е. на синтез белка, культуры

E. co1i 6-бензоиламино - 9- (1,3-диоксипропил-2) пурин максимально стимулирует синтез белка на 60%, а б-амино-9-(1,4-диацетоксибутил-2) пурин — на 62 .

Пример 1. Выращивают Brevibacterium

Sp. 11 Л на синтетической питательной среде

2О следующего состава на 1 л:

Глюкоза, г 10 (NH4) qSO4) г 40

КНзР04 г 1,0

MgSO4 7НзО> г 0,4

25 СаСОз, г 12

Биотин, мкг 300

Тиамин, мкг 200

l-треонин, мг 800

Dl-метионин, мг 200

3о при рН 7,2, температуре 30 С, 582272

Таблица 2

Концентрация, М

% от контроля

Соединение

10 — 4

10-

Г0- б-Бензоилампно-9-(1,3 диоксипропил-2) пурин

153

130

10 — 3

10 — 4

Г0-

6-Амино-9-(1,4-диацетоксибутил-2) пурин

162

133

30

Таблица 1

Концент, рация, М

Лизин, %

РНК, %

Соединение б-Бензоилам ино-9-(1,3диоксипропил-2) пурин

126

126

135

132

120

10 — а

6-Ам и но-9-(1,4-ди ацетоксибутил-2) пурин

118

132

139

130

121

133

142

140

10-

Г0-

Г0-

Составитель К, Селиверстова

Техред Н. Рыбкина

Корректоры: О. Данишева и Е. Moxosa

Редактор Н, Суханова

Подписное

Заказ 2597/8 Изд. _#_o 955 Тираж 563

1-1ПО Государственного комитета Совета Министров по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Ферментацию проводят в качалочных колбах на 750 мл, в 300 мл питательной среды, в условиях аэрации. Через 24 ч после начала инкубации вносят испытуемое вещество в концентрациях 10 †— 10 М. По окончании ферментации в культуральной жидкости анализируют содержание глюкозы, лизина, биомассы и РНК. Содержание глюкозы анализируют ортотолуидиновым методом, лизин-методом электрофореза на бумаге, содержание биомассы определяют турбидиметрически. Содержание

РНК определяют по методу Огура и Розена.

Пример 2. Выращивают культуру Е. coli

Hfr 3. OSO в условиях непрерывной аэрации на среде следующего состава, г/л:

NH4С1 1,0

КНяР04 1,5

КагНР04 3,5

МgS04 0,1

Глюкоза 4,0

В качестве меченого предшественника используют меченый белковый гидролизат с удельной активностью 1,3 мкюри/ммоль.

Через определенные промежутки времени берут пробы исследуемых суспензий Е. coli, обрабатывают 10%-ным ТХУ в течение 20 мин при 4 С, фильтруют через мембранные фильтры 1111ГЯ с диаметром пор 0,4 и,, которые затем дважды промывают 5%-ным ТХУ, высушивают и определяют уровень радиактивного включения на жидкостном сцинтилляциопном счетчике Я вЂ” 30 «Intertechnique».

В табл. 1 показано влияние соединений на биосинтез лизина и РНК культурой Brevibacterium Sp. 11 Л.

В табл. 2 показано влияние соединений на включение 4С вЂ” аминокислотного гидролизата культурой Е, coli Hfr З.OSO.

Предложенный способ выращивания микроорганизмов с внесением в питательную среду производных 6-амино-9 - (с4,го-диоксиалкил-2) пурина с ацильными заместителями по аминои оксигруппа интенсифицирует процессы роста биосинтеза РНК, белка и лизина.

Формула изобретения

Способ выращивания микроорганизмов, предусматривающий их культивирование в ус35 ловпях аэрации в питательной среде, содержащей источник углерода, азота, нсобходимыс минеральные соли и производные азотистых оснований в качестве стимулятора роста, отл и ч а ю шийся тем, что, с целью интенсифи40 кации процесса, в качестве производных азотистых оснований используют 6-бензоиламино9-(1,3-диоксипропил-2) пурин и 6-амино-9-(1,4диацетоксибутил-2) пурин в концентрации

10 — 10 " М.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Англии № 1132681, кл. С 6F, 50 06.11.68.