Способ получения препарата для лечения угрей

Способ получения препарата для лечения угрей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

у ВСКСО} М Ант

О П И ("ЖН И Ъ

Союз Советских

Социалистических

Республик (()) 582744

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 21„0373 (21) 1902256/28-13 (23) Приоритет — (32) 210372 (31) P 2213677. 2-41 (33) ФРГ (51) M. Кл.

А 61 К 39/02

Гаарнратввннын намнтвт

Соввтн Мнннстров СССР на донов нвабрвтвннй н атнрытнй (43) Опубликовано 3 1177. Бюллетень № (53) УБК, 615.45. 616 ° .5-002.525.4 (088. 8} (45) Дата опубликования описания 301277 (72) Автор изобретения

Иностранец Хельмут Штикл (ФРГ) и (71) заявитель (:54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ

УГРЕЙ изобретение касается способа полу чения лекарственного препарата.

Известен способ получения препарата для лечения угрей путем выращивания культурыCozgnebactevium с стте8 в анаэробных условиях при рН16,8-7, Т, инактивации, отделения от культуральной жидкости и высушивания заморажи- ванием выделенных бактерий (1) .

Однако препарат полученный известньм способом., невозможно применять

pet os,а иньекция его вызывает аллергию.

С целью обеспечения воэможности применения препаратарег as по предлагаемому способу используют неток сигенную культуру Coegnebactetium

acne которую смешивают со вспомогательным материалом.

Используют штаммы Бека, Герата и

Фогеля в соответствии (1-3) : (1-3): (0,5-1,5). ° B качестве вспомогателЬно

ro вещества применяют мочевину. культура Qo eebactev ufn асиеВ представляет собой граммположи- . тельные неподвижные палочки, не стойкие к кислоте, вырастающие иногда с односторонними или двусторонними булавооораэными утолщениями, иногда имеются признаки гранулирования.

Ccngaebactet валю acne N типично окрашивается по Нейссеру сине-фиолетфвым раствором (метиленовый синий кристаллический фиолетовый}. Полюсные тельца окрайиваются при этом темнее. типичным для Сот циеЬас1евЫлч

acomia . является объединение в груп пы,.где отдельные палочки, длина которых в 5-7: раз превышает ширину, 10 нередко располагаются под углом V --обч разно.

Все три штамма Corgnebactet Ы и аспее существенно различаются по морфологии. В чистых культурах, наря}8 ду с палочкообразными элементами с полярными тельцами, встречается много кокковидных элементов. Б более старью культурах обнаруживается больше зернистых и коккоподобных скоплений

20 бактерий, чем палочкообразньм.

Куртуральное определение nebce-ter1um acnes выявляется его типичным характером роста и специфической аглютинацией антисывороток.

25 В отличие от основных представителей группы Coo(ne дифтерийных бактерий, бактерии ucneS растут на кислот ной сыворотке агара или в глицеринсодержащем питательном бульоне с рн

З0,6,5. Они растворяют желатин )и не.

582744 растворяют дифтерийные бактерии. Бактерии aeneS образуют каталаэы. В аэробных условиях рост незначителен, оптимальный рост — в аназробных условиях культивирования.

tJ!TaMM Фогель медленно раэмножаетс в строго анаэробных условиях, штамм

Бек размножается быстро, в том числе при менее строгих анаэробных условиях.

Этот штамм растет в кислых средах и при добавке глицерина.

Специфический антисерум штамма

Бек приводит к агглютинации штаммов

Герата и Фогеля, при этом обнаруживается высокий уровень антигенетического родства штаммов Бека и Герата, в то время как антигенетическое родство со штаммом Фогеля выражено слабее.

15

Сыворбточная агглютинация со спе- 20 цифическим антисерумом по отношению к штамму Бек,(,о gnebacterium ocneS составляет 1:256, по отношению к штамму Герат от 1:128 до 1:246, по отношению к штамму Фогель 1:68. 25 . Соотношение отдельных штаммов в

;препарате может колебаться в широких

Фтределах. Предпочтительно применять штаммы Бек, 1"ерат и Фогель в соотно шении (1-3):(1-3):(0,5-1,5), в част- З0

;ности 2:2:1. Доза на один курс лечения 5 х 10 микробных клеток. Очень ,хорошие результаты дают дозы 10-20, предпочтительно 15 млрд. микробных клеток.

При готовляют штаммы СогцттеЬос1ежсни сюалеМ известными способами путем выращиванияCovyne riurn есмеS на питательной среде, например, на жидком мясо-пептонном бульоне в нейтраль-40 яых условиях (рН 7+0,2) беэ доступа

Воздуха. Инактивируют путем нагреваяия, реакции с фенолом (0,2%) или формалином (0,2-0,4Ъ), ацетоном на холоду с вйпадением осадка с последу- 4» ющей разбивкой скоплений микробов с помощью ультразвуковой обработки.

Полученные инактивированные бактерии высушивают (после центрифугирования) вымораживанием и вводят в них не-р» обходимую для повышения персорбции стенками желудка и кишок гидрофильную добавку, например, мочевнну - для твердых препаратов или сахар и слизистые вещества — для жидких препаратов 6® (эмульсий или сиропов).

В качестве вспомогательного материала для высушивания замораживанием можно применять пептон. Предварительно

Обработанный пептон содерт.ит поверхно.-. стно-активные амины,а также десенсиби лизнрующее начало. Наличие поверхностно-активных аминов обеспечивает хорошее распределение антигенов лимфатическими органами кишок. При приеме внутрь они .нетокснчны.

Чтобы предотвратить аллергию при приеме лекарства внутрь, в качестве десенсиб лизирующего компонента используют продукты обмена co nebaeteriuxn аспЕ8 обеспечивающие десенснбилиэацию беэ нарушения иммуниэирующего антигенного эффекта. Такой компонент получают из питательной сре ды культур аспеС, предпочтительно используют антигенсодержащую фракцию этой среды.

Введение корпускулярных антигенов, т.е. самих бактерий, обеспечивает иммунитет клеточной ткани и предотвращает аллергию при.приеме лекарства внутрь.

В качестве добавки предлагаемый препарат содержит мочевину и поверхностно-активные биогенные амины, используемые в качестве питательной среды пептона. При использовании для предварительной обработки пептона штамма Герата Congnebactea i.um асде побочных не образуется.

Пример 1. Получение культуры

Alcoves .

Питательный раствор, содержащий

2000 мл мясо-пептонного бульона (рН 7,1) и 600 мл буферного раствора Соренсена (рН 7,1) стерилиэуют в автоклаве при температуре 120 С. Затем добавляют 60 мл глицерина абсолютной чистоты. Смесь заливают в кол бы Эрленмейера обьемом .300 мл до узкого горлышка, добавляют жидкий парафин абсолютной чистоты, и колбы выдерживают 60 мин.в паровом сосуде при 100oС. Перед охлаждением питательной среды . закупоривают колбы воздухонепроницаемыми пробками, пропитанными горячим пчелиным воском или твердым парафином. Охлажденная до а

35 С питательная среда практически свободна от адсорбированного кислорода.

Прививку Co nebocter(um acneâ осуществляют через жидкий слой парафина при помощи пипетки Пастера.

Прививку производят с запасных пластинок (питательный агар в плоскиМ чашках Фортнера с высотой краев 10 мм и добавкой 2% глицерина, анаэробно инкубированный по Фортнеру) и суспендируют в мясо-пептонном бульоне.

Инкубация продолжается 10 суток при о

30-32 С. Затем иэ колб берут пробы на проверку чистоты и добавляют 5В-ный. раствор фенола в соотношении фенол:

:среда 1!10.

После суточной реакции с фенолом препарат нагревают 2 ч при 60 С, охлаждают и для разбивки скоплений мик робов в течение 30 с обрабатывают ультразвуком .с начальной мощностью

500 Вт. Для дальнейшего таблетирова=.

582744

Формула изобретения.

ЦНИИПИ Заказ 3645/713

Тираж 677 Подписное

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ния подсчитывают количество микробов в счетной камере.

Чтобы убедиться в умервщлении всех микробов, используют контрольные культуры. Если последние сохраняют стерильность в течение 10 суток, то всю массу микробов центрифугируют

20,мин при 3500 об/мин. Состоящий из

Го уме ьлс еж» urn acme осадок разбавляют в зависимости от числа микробов от 1/20 до 1/10.к объему среды культивирования. среду культивирования вместе а сохранившимся пептоном используют в качестве вспомогательной среды для сушки вымораживанием, она содержит поверхностно-активные низкомолекулярные диалиэируемые амины, Не менее 30 мл вышеописанной среды иэ каждой колбы иньецируют вну.рибрюшинно трем морским свинкам (для исключения возможности загрязнения аназробными бутулиновыми бацилла ми и ботулиновыми токсинами), такое же количество среды вводят морским свинкам в желудок зондом. Срок наблюдения — 18 суток.

Верхними слой культивируемой сре- ды Со узеbaeteeium штаммов

Герата или Века подают на стерильные. диалиэные мембраны.и помещают в свежеразмороженный холодильник. За неделю, в результате.вызываемого охлаждением испарения,,количество среды сокращается до 1/4 первоначального объема— происходит сушка вымораживанием. Об- разуется беловатый рыхлый гигроскопический порошок, который добавляют в высушенные вымораживанием штаммы

Бека, Герата и Фогеля Со цпеЬо сМ Чum оаж и смешивают таким образом, чтобы общая концентрация-первых двух штаммов (измеренная в сухом состоянииj не менее чем в 2 раза превышала концентрацию последнего (например -1 (Б), 1 (Г), 1 (Ф) или обычно 2 {Б), 2 (Г), 1. (ф) .

П р и и-е р. 2. Приготовление таблеток.

В сухую массу таблЕток вводят Cot9nebactaeiue1 . с спев незначитель-, ные количесТва- культивируемой среды всех трех штаммов, дополнительно диализованную культивируемую среду штамма Герат и в качестве..иммунной добавки — мочевину. После прессования таблетки упаковЫвают по 25 штук во флаконы. Из последних отгоняют воздух и заполняют их используемым в качестве инертной среды аргоном.

Пример 3. Для испытания лечебных свойств противоугревого препарата лечению подвергли 27"летнюю женя(ину на лице(f. -ая стадия), безуспешно лечившуюся в течение 9 лет мазями, ингибиторами овуляции (гормоны) и антибиотиками. В течение 5-ти суток она принимала по 5 таблеток 5 раэ в день.

Первый прием утром эа 30 мин до еды.

Каждый прием таблеток происходил без осложнений и каких-либо симптомов.

Йа 5-ый день и при более поздния ,проверках: трансминазы SGOM (0 5GPhll и моча 0 3. На 8-ой, а еще более отчетливо на 10-ый день после первого приема отмечается уменьшение покраснения и инфильтрации угревой сыпи. На 21-е сутки установлено отчетливое улучшение с общим отсутстви"ем и реэорпцией сыпи. Проверки через

4 и ).5 месяцев установили излечение от угрей.

В отличие от инъекции вакцин., применение препарата позволяет одновременно использовать большие дозы трех различных штаммов mebactewum аспез при наилучшей переносимости.

BÐ HÎÀ аллергии не возникает. Иихф каких вспышек массы угрей нет, отсутствует оплавление массы угрей. Жара и опухания лимфатических узлов не обнаруживается. Препарат переносится без реакции.

30 Предлагаемый способ обеспечивает получение препарата для лечения угрей, который является более эффективным по сравнению с известными.

Способ получения препарата для лечения угрей путем выращивания куль 40 туры Сомк яеЬс сМхнли осиез в аназробных условиях при рН 6,8-7,2, инактивации, отделения от культуральной жидкости и высушивания замораживанием выделенных бактерий, о т л и ч а ф ю шийся тем, что, с целью обеспе чения возможности применения препарата pe& .os, используют нетоксигенную культуру Cargneboetewurn осмаев. которую смешивают со вспомогательным ц» материалом.

2. Способ по п.1, отличающийся теи, что используют штаммы

Бека, Герата и Фогеля в соотношении

® (1-3),(1-3)з(0,5-1,5).

3. способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве Вспомогательного вещества используют мочевнну.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

Флеминг A. â€,ЬикеЕ, 1909, с. 10351038.