582773 - Способ получения -галактозидазы

Способ получения -галактозидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Всесоюзи .1 ит ьи т н о - i с: к г. ; i к ". ь, биб кот к М

Союз Советских

Социалистических

Республик () )) 582773

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

М ПА1ЕНУУ (6l) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 27,01.75 (21) 2104277/28-13 (23) Приоритет - (32) 28.0174 (31) 4 375 35 (33) США (43) Опубликовано 30,11,77.. Бюллетень № 44 (45) Дата опубликования описания 060178 (51) h(. Кл,2

С 12 П l 3/10

Гооударотаенный коынтет

Соаета Мнннстров СССР но делаы нэооретеннй н открытей (53) УДК 577.15.07 (088. 8) Иностранцы

Масэйюки Ватанабе, Сигееси Нарита, Итиро Кагайя, Минору Миура, Ясунобу Судзуки, Судзи Танака, Масами (гусаки, Coro Миятани и Кеничи Терэйяма (Япония). (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Хоккайдо Шугар КО., ЛТД (Япония) (7l) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ + -ГАЛАКТОЗИДАЭЫ

Изобретение относится к области получения ферментов.

Известен способ получения -галактозидазы, предусматривающий культивирование плесени рода Мîrtie.ret1а ч(паееа на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли flj . Полученный фермент способен гидролизозать раффинозу в сахарозу и галактозу, и его широко используют в сахарном производстве для определения содержания сахарозы, а также в качестве реагента для определения химической структуры соединений, но при этом необходимо, чтобы фермент обладал сильной -галактозидазной активностью и слабой инверта ной активностью.

Однако полученными известным способом фермент не отвечает этим требованиям.

С целью увеличения « -галактозидазной активности при незначитель ном увеличении инвертазной активности фермента, образующего в мицелии указанной плесени, согласно пред- 25 лагаемому способу в питательную среду добавляют 0,2-1,0 вес.е органической кислоты, .выбранной из класса монокарбоновых, дикарбоновых или трикарбоновых кислот. 30

Несмотря на то, что для осуществления предлагаемого способа можно использовать любые плесиевые грибы, продуцирующие -галактозидазу, он наиболее эффективен при использовании плесневых грибов рода Absi4io и рода Circine1ta, В качестве штаммов рода Absidia можно назвать

Absidia tich.th.e.imi. (Lucet et Сапзт.antin) Ledner (5ГО й009) АЬ О (а re) texa чап Т(ар)т,ела (5FO И7ч), Absidia. hqa,tospora (Saito) Lendner (JPQ 8082), t(bsidia rawosa (Vuinttewin) LencLner (5РО 8083), Absidba regnieri (Lucet et Constantin) Lendner (5РО 808й), Absidia griscOta (ЛТСС йО ЭО),AbsiвЂ”

dia qriscîta var. iguchii (ЛТСС 200Э1).

Примерами штаммов рода С("с(пеtta могут быть

С(.сопела muskae (Ьогокьпс) perte

et de То (C W. НеаееСИае)(Зк0 6410), Circinet ta muscae (Sorokine) Ьат йеао et

de Yoni (Сст сстюИа sgdowi Lenctner) (зрО 445т) Circinetta тписогoides

Saito (C(.гс1псИа ahineneis Naganishi

582773

0t хо)(го) (6<0 44 6 3) ????>"ci r>e ееа тм eoroicLas ЬаЫо (,Ê. Ьайо) (IF0 4455), cira(явила тпнвмав (Ьвrtese et de Toni) riova tgpice careanvS (ATCC 20594).

Среду, используемую согласно пред- лагаемому способу, приготовляют путем смешивания источника углерода, источников азота и неорганических солей, обычно применяемых при выращивании плесенных грибов. В нее включают лактозу, галактоэу, рафиноэу и мелибиозу.

В качестне источников углерода, пригодных для этой цели, используют крахмал, глюкозу, глицерин, малътоэу, декстрин, сахарозу и мелласу, а в качестве источников азота вЂ” муку соевую, бобовых, муку земляного оре ха> осадок хлопкового масла, жид кость после вымачивания зерна, мясной экстракт, пептон, дрожжевой экстракт,нитраты и соли аммония.

В среду добавляют неорганические соли - поваренную, хлористый калий, сульфат магния, сульфат марганца, сульфат железа, сульфаты и карбонаты кальция. При необходимости добавляют витамины.

Согласно предлагаемому способу к основной среде, состоящей из вышеукаэанных жизненно важных компонентов, добавляют органические кислоты от 0,2 до 1,0% в расчете на основную среду.

Иэ органических кислот используют 35 лимонную, молочную, гликолевую, фумароную, глутароную, яблочную, галактуроповую, винную, янтарную, малононую,--малеиновую и пировиноградную; наиболее приемлемы вЂ” лимонная, молоч- 40 ная> и гликолевая кислоты.

На приготовленную среду пересаживают плесненый гриб, который может быть выращен н аэробных условиях обычным способом и сноей немодифицированной форме, и культивируют жидкую культуру 40-72 ч при 30 С н

>> рН от 5 до 8. Полученную жидкую культуру разделяют известным способом на жидкую часть и грибконую массу. Пос- 50 леднюю промывают водой и смешивают со свекольной мелассой, чтобы фермент, содержащийся в этой массе, мог гидролизонать раффинозу, содержащуюся в мелассе. Промытую грибковую мас- 66 су обрабатывают одним из известных способов и используют по назначению.

Предлагаемый способ способствует получению <-галактозидаэы, проявляк>щей усиленную с4 -галактоэидазную активность беэ существенного увеличения иннертаэной активности. К преимуществам способа следует отнести также то, что количество получаемого фермента, нужного для обработки> можно уменьшить. 66

Пример 1. Готовят основную среду, содержащую. вес.Вг лактоэы

1,0, глюкозы 1,0, жир кодти после нымачивания зерна 1,0,;®Н>,) SO„ 0,6, фее РО 0,3, >Ng;$04,70 0 0,2 и МС

0,2, вода вЂ” остальное.

Основную среду делят на девять порций, и одну иэ -органических кислот (0,7 вес.В), растворяют в каждой порции. Затем рН среды каждой порции доводят до 5,0 и вносят

0>3 вес.В j CClQOs.

В приготовленные таким образом порции по 200 мл засевают Absidia

Ьуабоsрога (Ьа,ОЬо) Ьеи4пег (1РО

8082) н виде споровой суспензии в таком количестне, чтобы получить

1@104 спор на 1 см» среды, и выращйнают 48 ч при 304С в условиях встряхивания и при непрерывном перемешивании, осуществляемом со скоростью 136 об/мин. для сравнения выращивают культуру аналогичным способом, но в среду не добавляют органические кислоты. Результаты приведены в табл.1.

Значения -галактозидазной активности определяют, добавляя 1 мл испытуемой грибковой суспензии к сме си иэ 0,5 мл 0,06М целибиозы и 0,5 мл

0,1М фосфатного буферного раствора (рН 5,2), после чего 2 ч поддержинают температуру 40 С, а затем 5 мин нагревают реакционную смесь в бане иэ кипящей воды, при этом фермент инактивируется. Затем в раствор добавляют 1 мл 1,8Ъ-ного Sa (OH)e 8HeO и 1 мл 2%-ного Яп, S04 7К,0. Полученную смесь центрифугируют, и в слое, находящемся. сверху и свободном от протеина, определяют содержание глюкозы. Далее суспенэию раз>=являют .

Количество свободной глюкозы умножают на число разведений. -галактозидаэную активность, которая освобождает 1 мг глюкозы, принимают эа единицу.

Значения иннертаэной активности определяют, добавляя 1 мл грибковой суспензии к смеси 0,5 мл 0,06 М сахарозы и 0,5 мл 0,1 М раствора фосфатного буфера (рН 5,0) и обеспечивая те же условия реакции, что и при определении оС -галактозидазной активности. Центрифугируют полученный реакционный раствор, .чтобы удалить из него протеин, и подвергают свободный от протеина поверхностный слой анализу на содержание иннертного сахара по способу SomoggiHE(ЭОв .. Иннертаэную активность, ко торая продуцирует 1 мг иннертного сахара н вышеуказанных условиях, принимают эа единицу.

Сухой грибконый вес находят путем нысушинания при 105 С мицелия, выросшего в 100 мл питательной среды, с

582773 последующим взвешиванием высушенной массы мицелия.

По данным табл.1 видно, что при выращивании культуры в присутствии гликолевой, лимонной или молочной кислоты -галактозидазная активно ть возрастает в 3 раза, а инвертазная активность "ущественно не меняется (в сравнении с выращиванием культуры в среде беэ органических кислот). 10

Пример 2. Готовят основную среду, содержащую, вес.%: лактозы

1,0,глюкозы 1 у О((ЧНц)50цО у 3 дрожжевого экстракта О, 5, пентона

0,5, KgHPO 0,2, М $0ц ° 7Hq00,05, M@SO(15

Ч б К О 0,002 Fe q тн1О F001, вода вЂ” остальное.

Основную среду разделяют на десять порций и одну из органических кислот (0 7 вес.%) растворяют в каждой пор- 20 ции. Затем рН каждой доводят до 5,8 и добавляют по 0,3 вес.% СаСО>. В каждую 200 мп порцию среды:засевают

Circine(. fa muswae (Вег1еье et ае Toni)

nova Сцрьса саге а пus 25 (АТСС 20394) в виде споровой суспензии в таком количестве, чтобы получить 1 10 спор на 1 см% среды, после чего выращивают культуру 48 ч при

30 С в условиях встряхивания и при

s перемешивании со скоростью 136 об/мин.

Для сравнения выращивают указанные культуры на аналогичной среде и в тех же условиях, но без добавления органических кислот. Результаты даны в табл.2.

Пример 3. Среду готовят аналогично примеру 1, но количество каждой из вносимых органических кислот гликолевой, лимонной и молочной составляет 0,3, 0,5, 0,7 и 1,0 вес.%.

В среду засевают ЛЬь(dia hga(. oвЂ” ьрога tSaito) 1 елdner ("JP0

80 82 ) и культивируют .

Для сравнения выращивают культуру на среде без органических кислот. Результаты приведены в табл. 3.

Согласно данным табл. 3. наивысшая м -галактозидазная активность наблюдается при добавлении 0,7 вес.% органической кислоты и уменьшается при ® увеличении или уменьшении этого количества.

Пример 4. Среду приготовляют аналогично примеру 2, но количество каждой иэ вносимых органических кислот вЂ” лимонной, молочной и гликолевой составляет 0,2, 0,4, 0,6, О,B и

1, 0 вес.%. 8 среду засевают CircinelЫ musca (ВагГеье et de Toni )

nova 1ур(са coreanvs (АТСС

20394) и осуществляют культивирование.

Дпя сравнения выращивают культуру на среде без добавления органических кислот. Результаты представлены в табл.4 ° 65

Пример 5. Среду готовят аналогично примеру 2, но из органических кислот используют лишь лимонную (0,7 вес.%), затем вносят различные штаммы рода Circinet(a и рода Absidia и культивируют. Для сравнения вырашивают культуры в средах беэ лимонной кислоты. Результаты представлены в табл.5.

Согласно данным табл.5 «(.-галактозидаэная активность возрастает, по меньшей мере, в 2 раза при культивировании культур в присутствии

0,7 вес.% лимонной кислоты.

Пример 6. Готовят основную среду состава, вес.%: лактоэы 1,5, глюкозы О, 5, (NHq)POLIO 6, жидкости после вымачивания зерен 1, О, КН РОц

О 4, Ин$0ц 7Нт О 0,2, NuCE 0,2, вода остальное.

Разделяют ее на 12 порций и в каждую порцию добавляют по 0,6 вес.% одной иэ 12-ти различных органических кислот, укаэанных в табл.6 и 7. Затем рП кажлой порции доводят до 5,0 при помоши )(Нц()Н и добавляют по

0,2 вес.% C aÑ()%. Каждую 200 мл порцию среды разлйвают в колбы Сакагуши (5akaguchi ) объемом 1 л и стерилиэуют 30 мин под давлением 1,2 кг/см, i

Далее в каждую колбу вносят суспенэию спор Abs(d(a griseo5a (АТСС

20430) и Absidia griscoLa ча -.

iqucA ii (ATCC 20431) в таком количестве, чтобы получить 1я10«спор на

1 см%. среды. Культивирование ведут

60 ч при 30 С на обратной качалке, работающей с амплитудой 7 см и со скоростью 136 об/мин.

Для сравнения выращивают указанные культуры в тех же условиях, но беэ добавления органических кислот.

Данные о «(-галактозидазной активности, полученные с первым нэ вышеуказанных плесневых грибов, ггриведены в табл.6, со вторым - в табл.7.

Пример 7. К порциям основной среды, приготовленной аналогично примеру 6, добавляют лимонную, молочную и гликолевую кислоты в укаэанных в табл. 8 и 9 количествах. Засевают порции сред штаммами АЬsi.dia, ЬСО а. (ATCC 20430) И Ab Sigia ггг(,вЂ”

sco(.a «а -. iguckii (ATCC 20431) .

Для сравнения выращивают те же культуры, на основной среде без добавления органических кислот.

Данные, полученные при выращивании первого из указанных грибов, приведены в габл. 8, при выращивании второго вЂ” в табл. 9.

Эти данные наглядно показывают, что наиболее приемлемое количество любой из органических кислот, добавленной в качестве агента, способствующего образованию 4--галактози582773 даэы, находится в пределах от 0,2 до 1,0 вес.Ъ, поскольку количество образующейся k -галактоэидаэы постепенно уменьшается по иере того, как количество органической кислоты превьиаает верхний предел - 1,0 вес.Ф.

Таблица 1 вность кая, ro я

1 36 5 к104

12 35 «10

1257«104

835к104

758 к10"

688«104

6 34 «10»

62 3 к104

602 к104

471 «104

185 600

172 900

168 600

103 800

92 900

86 900

82 300

80 100

64 500

Таблица 2

0,03

4695

404 300

389 300

385 600

325 700

321 600

306 000

295 400

275 600

256 500

231 100

175 000

4702

4811

4600

4850

4905

4920

1207к10»

0,03

1,45

4502

Гликолевая

Лимонная

Молочная

Янтарная

Малеиновая

Фумаровая

Галактуроновая

Яблочная

Винная

Контроль

Лимонная

Молочная

Глнколевая

Фумаровая

Глут аровая

Яблочная

Галактуроновая

Винная

Янтарная

Пировнноградная

Контроль

0 05

0,05

0,09

0,18

0,03

0,06

0,07

0,02

0,07

0,03

1,36

1,40

1,34

1, 30

1,37

1,35

1,37

1,32

1,33

1,37

1 36

1,44

1,50

1,24

1,51

1,25

1,33

1,42

1,28

1, 48

2973л10»

2703к10"

2571«19

2627к10"

2130к 10

2448« 10

222 1к 104

1941к10л

2004к10

1561к104

6 796 6886 б 825 б 327

6509

6555

6430

6445

6427

582773 в а « сч

iO ф Ч а iD л м чъ

iO iO iO iD О

C3 СЧ f М

Oi Л Р а сО io lo

\О Ю iD Ю ю а

Ц\ ЧЪ 4 л с0

Ю \О \О

cf O М Ф Л СЧ

СРЪ <РЪ СеЪ Р СУ У СУЪ Ф СУ О СЪЪ Ф

О О О

° 3 ф1

О О

О О а Ф

О О О

О Л

О О О О О

О\ CO iO СЧ lV со Ф а ф W iO р «ч ф м а л иъ ф ф

М 4 4 «4 а о а л о е р r а з

1 «1 Л ю а ч> ч> м с ъ м м м Г ъ с с a ° с

4 «4 1 4 Ч о м а .ф Ф м м м м м с ъ с с с с с

< л ч «ю

О е е с с

«с 4

M СЧ + М М Е Ъ N N СЧ СЧ М О СЧ

О О О О О О О О О О О О О с с с с с с с с с с с с с

О О О О О О О О О О О О О а л О с с с с

О О О Л м а с О с с с с

О О О м а f cl с с с, с

О О О.Ф Ф Ф

О О О к к к

Ю 4 кС в е

СЧ СЧ

4 еМ

Ф Ф

О О к ll ц:> м

° Г Ъ

«4 4

Х о

X е е

О О к мъ м3

° ф

ГЧ О

«4 «- е

О О к к

Oi а

СЧ М л к е3 о е а

О О

° 4 ««I к к а м

CO сЧ м

«4

t ф с3

Х о

582773

С0 eV Ь Н lO eu Э П 0Ъ КЪ ee V О Э С0

<сЪ Ю Ul Ol Эс Эс ill Г lO M ЭЭЪ (Ъ О О 0 Ю

Э Э Л Ч а Э а «Э а Э В Э О С0 Э Ф Ф М сЭ М сУ сЭ сФ сФ сФ М ИЪ 3Л сй сФ

lO lO W Э 0 С0 r Э С0 СЧ М С Ъ О И

ЦЭ lO lO l0 l0 lO 0 ЧЭ 0 ЧЭ Г» Г r» r lO

О О О О О О о о о о о о

1 0Ъ Л СЧ сЭ СО о о о о о о о о о о о о о о о о о о о о

М ill O ГЧ lO ЭЧ С0 Ч

КЪ Ъ O о хъ о

РЪ сЭ РЪ

С0 С0 Э Ю

В СЧ О СО сЭ Э

fV < Ъ Ф O < Ъ N

Ф «1 сЭ сЭ

СЧ < Ъ

lO СЭЪ ЧР

Ol Ю «4 Г Ъ ЕЪ <Ъ «е а Э О Ъ е ЭЧ О Н С Ъ l0 ЭЭЪ ЧЭ Э Л Ф ээ Ф %I сэ cl c3 lA ill Ф M Ф Ф Ф ct Ф с с с с с с с с с с с с с с с с

Ч ° Э Л Ч Л Э Н Ч Л Э Н Ю Э Ч сЭ H A Ф Г Ъ РЪ РЪ & РЪ РЪ N N Ch Р Ъ ф РЪ о.о о о о о о о о о о о о о о о с с с с с с с с с с с с с с с с о о о о о о о о о о о о о о о о

° Э В С0 О СЧ Э а С0 О СЧ Э а С0 О с с ° с с с с с с с с с с с

О О О О «Э О О О О «4 О О О О 4 кэ м о з о о о о и н ч к х к х

Сб 0 «Е Э

e) э о с0 (ч с0 0

° «Э СЧ Al СЧ.Ф о о ч ч х к (с Щ lO Ch

° Э 0 (Ч «1 с М о о о ч ч н х м х

Эс сЭ lO IA ч е <ч

<Ч СЧ N х с0 9

С 1

° 4

ЭЧ

Ф м .Ф о о о ч ч х х 1с

o5 co

<Ъ Э О

С Ъ Э Ul

СЧ СЧ N Э «ф о о

° 4 «1 х х л о (Ч хЪ

ЭЧ сЧ

СЧ («Ъ M с(щ

И> оЪ (о о л

О (ЪЪ

Ю B о (ф (О

ЮЮ

<"Ъ (у1

Ю (О

CO (ЪЪ л Оъ г= о

ul (((Ъ Ю (4 л

t (О

Р ) (ЪЪ

Ф ( ((Ъ (d

lO о ( ол (Ч ((Ъ л л (О O о (ч

4 «4 (О (» о (ч

«4 Л

«4 О

N U1 л о о ((Ъ

4 о х

Ю .ч (Ч

1 х

3 (: о

A н х х ф\ « 4 (О (О (О с( л л х (О о lO л о о ((l ф\ о л оо оо ((Ъ (О

Ю л оо оо (Ъ (Ч оо оо (О О оо оо

Ю I о о (О (Ч (Ч о

СЪ о (Ч

M (Ч о о ((Ъ

Ю о о л4 CO оо (-4 N

M \О (ъ о

»«(Ч

N LA ((Ъ M

«4 (A («

M (Ч с

Л °

tO ("Ъ с

«4

l (сЪ л о

М с л

CO (ч с л ( (Ъ с

« °

О4

ol с

В 4

+4 ь ю

1 с

%Э

° 4Э э

Р4!

Р ь

С .o

С а

Ф/

Ф о ь с ь

> ь

Е о о л л х х

CO (О (ч л о о о о (ч о (Ъ сФ

° Е ОЪ л (О CO («Ъ (сЪ с с

° -4 Л м а» ((Ъ ь е о

4Д ВЬ

»«

Г е

С» Ф о

° Ф е

„"3

Ф т.»

Фг ьо

Ы Н4

«д .э

О Д 4(l

« «

Ф4

44 ,„о

g ь с

«сы с Б «Ф д

О Э

О О

»Ф аЭ ь ".

Я ь

Ъ ы

Е е ь о

ыэ ь

ВВ д ((»

«г .«Э

Д s

%о о л х х ф\ (ч

v ь «4 ь ф

Ю ь

Г4 э О

В(» ь ч

\Э Ф 4» с

С б е

582773 о о ь щ юЭ (О

Ю с 4» О в

ОЪ (» л л

=г о ъ. о х х л (ч ((Ъ 4(> (4\ о о о о ю а (Ч (ч з и с

4 Л ь

Ъ(4(С ° э ьМЪ

" С» а к . Ъ » оо

«4 4 х х

Ch Ю л CO ((Ъ л л

Ф(v .

3 w

-3

«Ф Щ

-«ю (O ь

° .ю

С Сс фЪР tl

«Ф ь

С лу« о о ((Ъ"ОЪ

СЧ 1О (Ф о (ч

° Ф Ф с с

° Л

«» д Ю

Ф р

"о.Е» м с.й

С ь

° «4 с

- ь

Э а м

Д т оо о сй Ф с с

Л 4 с 4(4

4»

Э О(-» о c»

- о

4»Ъ

- ° 4.4 С

С» сЪ и с а ь м с.а - м

-д 5

° 34 р оо

° 4 ( хх

O N

Ol (сЪ

MO л (Ч л ("ъ (ч с л (E

»Э

«4, 46, 4О

С» ь о

О Ва

Е 4 ь

В.

S. ь 0( с ь -ц

44( р С9 к л

3 н

Rj ((Ъ °

0 3 н

3О х

М A х

td C х о (С(Х ох и3 (O Ц

582773

16 а 6

0,08

1, 196

1,209

1,276 .1,175

1Ъ иколевая

Лимонная

Молочная

Яблочная

Фумаровая

Винная

Янтарная

Глутаровая

1,208

1, 394

1, 300

1, 370

1,273

Малоновая

Иалеиновая

1,194

1, 325

1, 350

1, 290

Пир ови ногр адн ая

Галактуроновая

0i03 контроль

П р и и е ч а н и е . Общая инвертазная активность во всех ойытах равна нулю.

Та блица 7

359 300

349 500

343 300

329 400

0 05

0,04

293 100

267 300

227 700

231 000

215 900

197 100

226 200

273 600

1,260

1,223

1,280

177 200

П р и м е ч а н и е. Инвертаэная активность (общая и специфическая) во всех опытах равна нулю.

Гликолевая

Лимонная

Молочная

Яблочная

Фумаровая

Винная

Янтарная

Глутаровая

Малоновая

Малеиновая

Пировиноградная

Галактуроновая

Контроль

0,06

0i07

0,04

0,06

0,08

0,04

0,06

0,07

0,02

0,06

0,07

0,03

0,07

0,06

0,04

0,08

0,07

0,05

0,06

0,02

1,,202

1,208

,204

1, 190

1,203

1,246

1,237

1,294

1,228

1,260

504 000

466 700

475 900

421 500

380 500

365 100

310 400

314 100

291 900

240 500

307 665

371 200

230 900

4314х10

3860х 10"

3730х,10"

3587х 10»

3150х10

2619к10"

g 388х 104.

2293х10"

22ббх10"

2014х10"

2322х104

2749х104

1790х10

2989 «104

2893 х10»

2851х10

2768х10

2436х10

2145х10

1841 х10".

1785 х10"

1758 х104

1564х10"

1795 х10х

2237х10

1384х104

582773

Та блица 8

2758«101

3184«104

3938«10"

3769 «10»

3636.«10» !

2490 10"

3105 «10"

3730 «10»

1255

0,02

0,2

Лимонная

1260

0 05

0,4

1260

0,06

0,08

0,6

1270

0,8

1273

0,09

1,0

1255

0i03

0,06

Ос 07

0,2

Молочная

1258

0,4

0,6

1276

3680,«10Ч

35 17, «10"

1277

0 0,08

0,8

1275

0,09

1,0

2695 «10

3404:«101

4214 «10»

4100 «10»

3914 «104

1189

0,02

0,2

Гликолевая

1 195

0,05

0,08

0,09

0,4

1196

0,,6

1190

0,8

1190

0,09

1,0

1790 «104

0,03

1290

Контроль

П р и и е ч а н и е. Инвертазнаи активность (общая и специфическая) во всех опытах равна нулю.

Т а б л и ц а 9

263 000

305 500

385 400

1226

1244

1260

0,03

0,2

Лимонная

0,4

0,04

0,6

380 500

1265

0 05

0,08

0,8

350 200

261 500

295 600

343 400

1265

1,0

1203

0,02

0 2

Молочная

1204

О,4

1204

0,03

0,04

0,6

325 100

300 600

1205

0,8

1208

0,04

346 100

401 200

496 200

478 700

462 900

312 500

390 600

475 900

469 900

448 400

320 400

406 800

504 000

487 000

465 800

230 900

2145 «10

2456«10

3059» 10

3008 «10»

2769" 10

2174 «10

2455 «10

2851«10

269 8« 104

2488«10». 582773

Гликолевая о,г

0,4

0,6

О,8

1,0

1384 104

Контроль

0,ог

1280

177 200

П р и м е ч а н и е. Инвертазная активность (общая и специфическая) во всех опытах равна нулю.

Формула изобретения класса монокарбоновых, дикарбоновых или трикабоновых кислот.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ н и с я тем, что культивируют плечень рода hbsiclia

3. Способ по п.1, о т л и ч а юЭ0 .щ и и с я тем„ что культивируют плесень рода CircinetM.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США В 3647625, кл.195-11, 1972.

Составитель М.Андреев

Редакто Н.Х бла ова Те ед Н.Андрейчук Ко екто Л.Небола

Заказ 3654/714 Тирах 541 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий

113035 Москва -35 Ра шская наб. . 4 5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 о,ог

0,03

0,05

0 06

0,06

) .. пЬсоб получения < -галактозидазы посредством .культивирования плесени на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения активности препарата фермента, в питательную среду добавляют 0,2-1,0эес. Ъ органической кислоты, выбранной из

1202

)гог

1207

1208

270 400

338 400

359 300

349 500

325 700 гг53 )о4

2815 «104

2989.<10

2896 10

1696 104

Способ получения -галактозидазы

Патент 582773