Способ получения рибонуклеозид-5триофосфатов и сахарофосфатов

Способ получения рибонуклеозид-5триофосфатов и сахарофосфатов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

лат сс взмал вое .ЕНте. т.„ - хммау », 6ef6p

ОПИСАН

ИЗОЬРИти

К АВТОРСКОМУ СВИДЕ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид (22) Заявлено 24.12.75 (21) 2304 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.12.77. Бюл (45) Дага опубликования описан л.з 6 01N 33/16

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий

612.015.1 (088.8) (72) Авторы изобретения

С. Э, Ансберга, И. И. Брод, А. М. Ирген, В. ll. Каула, В. P. Кестере и Р. А. Лудрика (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛЕОЗИД-5ТРИФОСФАТОВ И САХАРОФОСФАТОВ

Изобретение относится к получению рибонуклеозид-5-фосфатов, которые могут найти применение в биохимии и медицине.

Известен способ получения рибонуклеозид5-трифосфатов и сахарофосфатов путем биохимического фосфорилирования сахаров или их производных в присутствии ферментных систем пивных дрожжей при рН 6,9 — 7,0 с последующим выделением продукта (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода целевого продукта.

С целью увеличения выхода продукта и расширения сырьевой базы по предлагаемому способу в процессе биофосфорилирования на стадии интенсивного гликолиза дополнительно вводят кислую фосфатазу.

Пример 1. 200 мг аденозина растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют 0,764г неорганических фосфатов (калий фосфорнокислый однозамещенный: натрий фосфорнокислый двузамещенный — 1:4), 0,0144 г калия хлористого КСI 0,0144 r магния хлористого МдС1г 6НзО, 10 мл пивных дрожжей, 0,4 г сахарозы, 15 ед. кислой фосфатазы, 0,6 мл тол уола.

Кислую фосфатазу прибавляют на 25-ой минуте проведения процесса, рН 6,9 — 7,0, температура 37 С, время ферментации 0,5 — 1,0 ч.

Для прекращения реакции прибавляют 2 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. г тепень

2 фосфорилировання 99%, чистота препарата

97%.

Пример 2. 2 r Na — УМФ (уридин-5 монофосфат) растворяют в 70 мл воды при 37 С и прибавляют 9,890 r неорганических фосфатов (калий фосфорнокислый однозамещснный: натрий фосфорнокислый двузамещенный = 1: 4, 0,144 г КСI, 0,144 г МдС1з 6Н О, 4 г сахарозы, 150 ед. кислой фосфатазы, 6 мл толуола и 100 мл пивных дрожжей.

Кислую фосфатазу прибавляют на 25-ой минуте проведения процесса, рН 6,9 — 7,0, температура 37 С.

Время ферментации 0 5 — 1,0 ч. Для прекращения реакции прибавляют 20 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Степень фосфорилирования — 95%, чистота препарата 97% .

Пример 3. 110 г сахарозы, 330 r неорганических фосфатов (калий фосфорнокислый

20 однозамещенный КН2Р04, натрий фосфорнокислый двузамещенный ХагНР04 ° 12НзО =

1: 4), 5 г MgC12 6Н20, 5 r КСI растворяют в

60 мл воды, прибавляют 200 г пивных дрож>кей и 27 мл толуола, 300 ед. кислой фосфа25 тазы прибавляют к среде биосинтеза на 25-ой минуте проведения процесса.

Биофосфорилированис проводят при 37 С и рН 6,9 — 7,0. Для прекращения реакции прибавляют 200 r трихлоруксусной кислоты. Сте30 пень фосфорилирования 96%.

5S4247

Составитель С. Малютина

Редактор В. Блохина Техред И. Михайлова Корректоры: Л. Денискина и Л. Орлова

Подписное

Заказ 2624/8 Изд. гй 979 Тираж 1109

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, 2

Пример 4, 200 мг аденозина растворяют в

7,6 мл воды. К раствору прибавляют 0,76 г неорганических фосфатов: КН Р04 (калий фосфорнокислый однозамещенный), NaqHPO4 °

° 12НзО (натрий фосфорнокислый двузамещенный) = 1:4, 0,014 г КС1, 0,014 г MgC1 °

° 6НзО, 0,4 г сахарозы, 10,0 мл пивных дрожжей Х генерации, 0,6 мл толуола при рН среды 7,0 и температуре 37 С. Степень фосфорилирования 35 /о, время фосфорилирования

3,5 ч.

П р имер 5. 200 мг аденозина растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют 0,76 r неорганических фосфатов: КНОРР 04 (калий фосфорнокислый однозамещенный), ИазНРО4 °

12Н О (натрий фосфорнокислый двузамещенный) в соотношении 1: 4, 0,014 г КС1, 0,014 г М С1з 6НзО, 0,4 г сахарозы, 10,0 мл пивных дрожжей Х генерации, 0,6 мл толуола, 15 ед. кислой фосфатазы. Кислую фосфатазу прибавляют на 25-ой минуте проведения процесса, рН среды 6,9 — 7,0, температура 37 С.

Время ферментации составляет 1 — 2 ч, степень фосфорилирования 97,7о/о.

Предлагаемый способ обеспечийает высокий выход целевого продукта, расширение производства рибонуклеозид-5-фосфатов. Производство этих продуктов обеспечит возможность широкого применения их в биологии, генетике, биохимии и медицине.

Формула изобретения

Способ получения рибонуклеозид-5-трифосфатов и сахарофосфатов путем биохимического фосфорилирования сахаров или их производных в присутствии ферментных систем пивных дрожжей при рН 6,9 — 7,0 с последующим выделением продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и расширения сырьевой базы, в процессе биофосфорилирования на стадии интенсивного гликоли20 за дополнительно вводят кислую фосфатазу.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Заявка № 2092898/04 от 06.01.75, положи тельное решение получено 20.11.75.