Способ получения производных глюкозы

Способ получения производных глюкозы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПА1ЕН7У о

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 584743. (6!) Доно тиительпый к патенту (22) 3аявлеио 140973 (21) 1962273/13 (23) Приоритет - (32) 19. 09. 1972 (31) 406 820 (33) Испания (43) Опубликовано 15.1277, Бюллетень № 46 (45) Дата опубликования описания 221277 (51) М. Кл.

A 61 К 31/70

1 осударстаенный комитет

Соаата Миннстроа СССР

Il0 делам изобретений н открытий (53) УПК 615 45 615 . 771. 7 (088. 8)

Ъ (72) Авторы . изобретения

Иностранец

Хосе Игнацио Бланко Кордеро (Испания) (71) заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛЮКОЗЫ

Изобретение относится к получению фармакологических соединений, которые могут найти применение при лече" нии злокачественных опухолей.

Известен способ получения производных глюкозы путем смешения 30% леофилизированной мочевины с 10%-ным раствором глюкозы (1). Однако известный способ не позволяет получить вещества, обладаюшего противоопухоле- 10 вой активностью.

С целью придания веществу противоопухолевой активности предлагают способ, отличающийся от известного тем, что мочевину смешивают с пятиводным. сульфатом магния в молярном соотношении 1:0,06-1:0,5 при 10-55 С и гомогениэируют, добавляют глюкозу в молярном соотношении мочевина:глюкоза, равном 1:1, воду или физиологический 2() раствор в количестве 300-400 мл, встряхивают, после выстаивания добавляют йодид калия в молярном соотношении мочевина:йодид калия, равном 1:0,251:1, встряхивают до полного растворе- 25 ння, подкисляют пересыщенным спиртовым раствором бенэойной кислоты в молярном соотношении 1:0,25-1:1 до рН

2-4, отфильтровывают осадок. Кроме того, после подкисления бензойной кис- 30 лотой смесь нагревают, отделяют маточный раствор и после кристаллизации отделяют жидкую фракцию.

В качестве исходной основы берут глюкозу или мочевину. Для подкисления применяют различные органические и неорганические кислоты. Температура во время реакции может колебаться, предпочтительной является температура 40 С, может быть и более низкой, но не ниже 10 С, при температуре ниже 40О С для осуществления реакции требуется больше времени. Количество воды и солевого раствора должно быть незначительно, результаты будут тем лучше, чем меньше применяемые количества. Бензойную кислоту можно добавлять в пересышенном спиртовом растворе или в чистом виде, причем в последнем случае подают спирт до пол— ного растворения.

Продукт в зависимостй от метода. работы и применяемых степеней разведения получают или в виде твердого вещества осаждением в разбавленном растворе, или в виде жидкости самопроизвольным отделением в высококонцентрированных растворах. Обе эти формы обладают фармакологической эффектив584743 ностью, хотя твердая форма проявляет меньшую активность.

Пример 1. В стеклянную колбу подают 24,024 г мочевины и 24,5 г

М SO 7Hz 0, смешивают и гомогенизируют р температуру поддерживают равной 40 С в. течение 2-4 ч, образуется прозрачная вязкая паста. Затем добавляют 72,0 r глюкозы и 300-400 мп дистиллированной воды или физиологи- 10 ческого раствора хлористого натрия, медленно встряхивают до полного растворения, после чего раствор выдерживают двое суток при постоянной температуре 40 С. Можно также с самого начала соединить мочевипу, глюкозу и

Мц $0 . 7Hz0 в твердой форме до îáðàзованйя пасты, а потом добавить дистиллированную воду или раствор хлористого натрия, или we мочевину, глюкозу и Mg S0 .7HzO можно растворить в дистиллированной воде или растворе хлористого натрия.

Потом добавляют 33,2 r йодида калия, встряхивают до полного растворения и через сутки вводят 24,4 г бенэойной кислоты в пересыщенном спиртовом растворе или спирт добавляют после бенэойной кислоты до достижения полного растворения. В первом случае, когда добавляют пересыщенный раствор бенэойной кислоты, образуется большой белый осадок, который отфильтровывают, и после растворения в достаточном количестве спирта вводят в фильтрационную жидкость, иэ которой выпа- Ж дает мелкий порошок; его тоже отфильтровывают. В другом случае получают сразу активный белый порошок, но он содержит большее количество примесей.

Получаемый мелкий порошок желтоватого 40 цвета имеет склонность к комкованию, полностью растворяется в воде и не растворяется в спирте.

Пример 2. Для получения жидкой фазы выполняют те же операции, что 45 и для получения твердой; смесь иэ мочевины и сульфата магния, к которым позже добавляют глюкозу, растворяют в 40 мл или в меньшем количестве дистиллированной воды или в растворе 60 хлористого натрия. Добавляют бензойную кислоту в чистом виде и потом спирт в количестве, которое достаточно для полного растворения бензойной кислоты. Бензойную кислоту можно также добавить в пересыщенном спиртовом растворе. Смесь выдерживают при 40 С.

Наблюдается образование трех фаз; нижней твердой и двух жидких, которые полностью разделены, причем промежуточный слой более интенсивно окрашен и имеет большую вязкость. При нагревании в верхнем слое образуются твердые корки, которые снимают до тех пор, пока верхний слой не исчезнет полностью. В этот момент жидкий средний 65 слой подают в отдельный сосуд, в котором поддерживают комнатную температуру. Вследствие изменения температуры этот жидкий слой принимает кристаллический вид, и через несколько дней в нижней части сосуде начинает образовываться прозрачная жидкость, которая постепенно поднимается до стабилизации в конце концов в двух слоях — нижнем жидком и верхнем твердом, которые разделяют фильтрацией. Из них жидкий слой — фармакологически эффективен. Эта жидкость имеет желтую окраску изменяющейся интенсивности, она густая, маслянистая и имеет характерные запах и вкус.

Продукт испытывался на животных, чтобы определить его токсичность и фармакологическое действие на физиологические постоянные животных, причем также на животных, у которых экспериментальным путем была развита опухоль. Применяли раковые опухоли; саркому Б 37 и асцитическую саркому Эрлиха.

Исследуют действие на живой организм полученного предлагаемым способом соединения в жидкой и твердой формах (на асцитическую карциному Эрлиха). Опухоль получают в лаборатории постепенным введением в гомозиготные мыши SWISS. Для эксперимента применяют гомозиготных не достигших половой зрелости мышей-самок "SWISS типа С0?, их возраст 4-6 месяцев, вес около 30 r.

При всех экспериментах опухолевые клетки получают внутрибрюшинной пункцией на восьмой день после заражения мышей; их промывают и суспендируют в изотоническом растворе хлористого натрия и имплантируют известным образом в здоровых животных. Следят точно за тем, чтобы экологические условия и питание были одинаковы во всех экспериментах. Все мыши получают метку, позволяющую их идентифицировать и записывать их вес в начале и во время всего эксперимента. Кроме того, каждый день определяют среднее арифметическое каждой группы подопытных животных и контрольной группы. На восьмой и двенадцатый дни после заражения посредством пункции живота собирают асцитическую жидкость для подсчета клеток. Всех мертвых животных как контрольной группы, так и группы подопытных животных вскрывают и подвергают микроскопическому исследованию.

При данных опытах следят эа двумя критериями; во-первых, контролируют рост опухолей, а именно с помощью кривой веса, а во-вторых, контролируют переживших животных, которым был введен описываемый продукт.

584743

Во время двух опытов убивают несколько животных для микроскопического и макроскопического исследования.

Лечение начинают в различные моменты времени относительно имплантации опухолей, которые колеблются от трех дней до имплантации,до трех дней после нее. В одной группе подопытныМ животных применяемые дозы активного соединения определяют в зависимости от развития опухолей, а в другой группе опухолям дают расти в течение трех-четырех дней и лечение начинают после того, как вес увеличился на 2 r или более. Число введенных опухолевых клеток равно 1х106, 2х10 и

8х10 6

У rpynn подопытных животных, которым внутрибрюшинно введены 1х10 и

2х106 клеток асцитическои карциномы

Эрлиха, наблюдают большую разницу в росте опухолей в сравнении с контрольной группой. У контрольных групп измеренный в начале живой вес повышается на 40-50%, в то время, как израстание веса у подвергаемых лечению групп подопытных животных не составляет даже 20; от измеренного в начале живого веса, и в большинстве опытов вес позже опять уменьиается до достижения начального значения. После гибели последнего контрольного животного число оставшихся в живых животных составляет 40-70Ъ от числа подвергаемых лечению; их держат еще месяцами в лаборатории. Некоторые из этих животных проявляют склонность к образованию твердой париетальной опухоли, и в отдельном случае — асцитической опухоли, которая вызывает гибель жи- 40 вотного только через три месяца после начала опыта.

У групп опытных животных, которым введены 8х106 раковых клеток в течение первых пяти дней наблюдается на- 45 растание веса (около 2-3 r), затем они сохраняют этот вес или теряют его опять медленно до конца опыта. Здесь остается в живых меньшее число животных, чем у групп, которым было введе- {y но меньшее число клеток (20-40Ъ). В двух экспериментах, в которых вводят

8х106 клеток, лечение проводят в течение 3 и 4 дней: контролируют нарастание веса и случаи переживания. 66

Вес подопытных животных гораздо ниже веса контрольных животных, но подвергнутые. лечению животные остаются только еще три дня в живых.

Не наблюдается никаких различий, если лечение начинается за три дня до имплантации опухоли. Если прерывают лечение в день имплантации, то опухоль развивается так же, как и у контрольных групп, а если продолжают его, то получают те же самые результаты, @ что и при описанных выше экспериментах.

Одной группе вводят сначала небольшие дозы активного соединения, которые повышают потом до 100 мг. При этой дозе можно установить внезапное падение кривой, которое продолжается до восстановления первоначального веса. ;однако в данном случае остается в живых меньшее число животных.

Применяемые дозы активного соединения колеблются от 2 до 100 мг в день (эта терапевтическая широта возможна благодаря нетоксичности препарата). Получаемые результаты показывают, что имеется тесная связь между применяемой дозой и опухолью. У животных, которым вводят дозы ниже

10 мг/30 г, достигают хороших результатов, если количество введенных клеток меньше 2х10 . При более высоких концентрациях опухолевых клеток необхо .. применять соответственно повышенные дозы. Если лечение начинают через 5-6 дней после заражения, то небольшими дозами не достигают никаких результатов и следует вводить большие количества, чем 50 мг в день.

Лечение твердых опухолей начинают через 10 дней после их имплантации, когда опухоль больше 0,5х0,5 см. После лечения в течение трех дней на поверхности опухолей появляется черное пятно, которое распространяется нормальным образом в течение следующих

10-12 дней, потом тормозится в росте и отделяется от окружающей среды;

Испытуемый препарат практически нетоксичен и безвреден. Переносимость препарата удовлетворительная.

Формула изобретения

1. Способ получения производных глюкозы путем смешения мочевины и глюкозы, отличающийся тем, что, с целью придания веществу противоопухолевой активности, мочевину смешивают с пятиводным сульфатом магния в молярном соотношении

1:0,06-1:0,5 при 10-55 С и гомогенизируют, добавляют глюкозу в молярном соотношении мочевина: глюкоза, равном

1:1, воду или физиологический раствор в количестве 300-400 мл, встряхивают, после выстаивания добавляют йодид калия в молярном соотношении мочевина: йодид калия, равном 1:0,25-1:1, встряхивают до полного растворения, подкисляют пересыщенным спиртовым раствором бензойной кислоты в молярном соотношении -1:0,25-1:1 до рН

2-4, отфильтровывают осадок.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю6 и и с я тем, что, после подкислеия бензойной кислотой смесь нагревают

584743

Составитель С.Малютина

Ре акто Л.Новожилова Тех ед A.Áîãäàí Ко екто Е.Папп

Заказ 4614/718 Тираж б77 Подписное

ЦНИИПИ государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Ра ская наб. . 4 5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 отделяют маточный раствор и после кристаллизации отделяют жидкую фракцию .

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Сб. Препараты и кровезаменители Ленинградского научно-исследовательского института гематологии и переливания крови, Л., изд. Медицина, 1970, с.50.