Способ получения производных соматостатина

Способ получения производных соматостатина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Сова Советских

Социалистических

Республик (1 е) 58683 7

К ПАТЕНХУ (61) Дополнительный к патенту (51) М. Кло

С 07 С 103/52 (22) Заявлено09. 12.74 (21) 2093830/04 (23) Приоритет — (32) 10. 12.73

0 1.08.74 (31) 423352,493595 (33) CEA

Государственный комитет

Соаата Мнннстроа СССР оо делам изооретеннй и открытий (43) Опубликовано30. 12.77.Бюллетень ¹ 48 (53) УДК 547.964. .4.07(088. 8) (4б) Дата опубликования описания 04.01.78

Иностранцы

Ганс Уэли Иммер, Казимир Сестань, Вернер Роберт Нельсон и Манфред Карл Готц (Канада) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

Ауэрст Маккенна энд Харрисон Лимитед (Канада) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ СОМАТОСТАТИНА

Изобретение относится к улучшенному спо- собу синтеза производных соматостатина, физиологически активных соединений, применяемых в клинической фармакологии для лечения акромегалии и управления ювенильным диабетом, Известны способы синтеза соматостатина с использованием твердофазного метода заключающегося в том, что исходную ам«нокислоту ковалентно связывают с последу- то ющим наращиванием пептидной цепи путем конденсации с соответствующей аминокислотой 1 1, (2).

Однако при таком методе конечный продукт получают недостаточно чистым, посколь» 15 ку очистка возможна лишь на заключительной стадии синтеза, поэтому этот метод не может быть использован в крупномасштабном производстве пептидов, молекулы которых со размерны с мопекупами соматостатина. Кро-Qp ме того, в указанном методе обязательна зашита вторичных функциональных групп, например сульфидной, амннной или гидроксильной, которые являются очеиь стойкими группами и по, завершении процесса удаляются 26 в жестких условиях, что также приводит к загрязнению конечного продукта.

С целью улучшения качества продукта и возможности его крупномасштабного синтеза предлагается способ получения соматостатина и его производных, обладаюших активностью природного гормона, с использованием азидного метода синтеза пептидов (3)

Способ получения производных соматостатина обшей формулы

СЦа СНф-ГОГли-Цнс- Л из-Асн-Фен-фен«Трп-Лиз-Трн-Фен-Трн-Сер- .K HCHR -СН (Q, ф.—

Э где g — водород или аминогруппа;

К - водород или карбоксип, есль

R< -аминогруппа, R -карбоксил, то символ ,.Лнз в положении 4 и 9 может также представлять Р Лиз, с использованием конденсации соответствующих аминокислот и удалением блокируюших групп, заключается в том, что проводят реакцию сочетания азииным методом гептапептида общей формулы

СНа СНйа-СO-Гли-Бис(4 ) Лиз(Бок)-Асн-феи Фен-КН КН (Il)> где R — водород или БокКН, еС -Апмили Трт, с гептапептидом формулы 86837

Н-ТрпЛиз(Бок)-Трн(P )-Фен-Трн(" )-Сер(p )- К Н-CHR -СН $ —,6 (.1И) где R имеет указанные значения; г, y > и p - водород или группа Бут;

/3 — группа Ацм или Трт, 5 и полученное линейное производное обшей формулы

CH CHR -СО-Гли-Цис(d )-Лиз(Бок)-Асн-Фен-фен-Трп-Лиз(Бок)-Трио )-Фен-Трн(y )-Сер()-КН»СНК -СН,5- Ф(® где R R3 gL Д, f ) и имеют с а 10 указанные значения, окисляют йодом или тиоцианогеном в соответствуюшее циклическое дисульфидное производное общей о м ы

СН CHRIS-»СО-Гли-Цис-Л из (Бок)-Асн 35

-феп-Фен-Трп Низ(Бок)-Трн ()-фен-Трн (1)-Сер(у" )-NH -CHR -СНя {U) с последуюшим удалением всех оставшихся блокируюших грулп в кислых условиях и вы- 20 делением производных соматостатина общей формулы (1 ).

Пример 1, Трет-бутилоксикарбонилаланилглицинметиловый эфир (Бок-лла-Гли,-ОМе).

25 о

В охлажденный до 0 С раствор 14,18 г трет-бутилоксикарбонилаланина (0,075 моль) и 10,1 r 1-оксибензотриазола (0,075 моль) в 150 мл диметилформамида (ДМФ) при перемешивании добавляют 18,2 г (0,088 моль)30 дициклогексилкарбодиимида (ДЦК). Затем раствор перемешивают 1 ч при 0 С и 1 ч о при комнатной температуре. В полученную смесь добавляют раствор 10 r (0,0798 моль) хлоргидрата глицинметилового эфира в 3S

400 мл ДМФ и 12, 8 мл этилморфолина и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха. Остаток растворяют в этилацетате, удаляют нерастворившуюся часть фильтрованием, Расг вор промывают 100 о-ным водным раствором лимонной кислоты (3x75 мл), насьпценным раствором бикарбоната натрия (Зх100 мл), насьпценным раствором хлористого натрия 45 (2х50 мл), сушат над сульфатом магния, растворитель отгоняют и получают целевое соединение в виде л1асла, ЯМ Р-спектр (СЮС() Й 1, 3 3 (Ь 3 Н ), 1,42 (S, 9H), 3,75 ($, ЗН), 50

Пример 2, Трет-бутипоксихарбонипани лглицин (Бок-А па-Гли-ОН }.

При иеремешивании к раствору 86 r трет-6утил оксикарб онил алан илгл инин метил ового эфира (0,33 л1оль), полученного в 5% примере 1, в 600 мл метоксиэтанола добавляют по каплям 350 мл 1 н. раствора гидрата окиси натрия в твчение нескольких минут, смесь перемешивают 2 ч, охлаждают и осторожно 60 мл 50%,-ной лимонной кислоты доводят рН до 4. Растворитель от» гоняют, остаток растворяют в этилацетате, нерастворившиеся компоненты удаляют фильтрованием, фильтрат сушат над сульфатом * магния, растворитель отгоняют, сырой продукт перекристаллизовывают из смеси этилацетата с петролейным эфиром при 60о

80 С и получают целевое соединение, Ь"-) >-9 6 (с 1 ДМФ) т пл 128оС (разл)

Пример 3. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицин-2,4,5-трихлорфениловый эфир . (Бок-Ала-Гли-ОТхл ), В охлажденный до температуры от -1 0; до -150Ñ раствор 56 г трет»бутилокси карбонилаланилглицина (0,227 моль), полученный в примере 2, и 58,5 r 2,4,5.-трихлорфенола (0,237 моль) в сухом этилацетате (600 мл) по каплям при перемешивании добавляют раствор 61 г ДЦК (0,295 моль) в 100 мл этилацетата, Смесь перемешивают 2 ч при -10 С, 2 ч. при о

0 С и в течение ночи при комнатной температуре, Выпавший осадок отфильтровывают, растворитель отгоняют, остаток растворяют в этилацетате, удаляя нерастворившиеся компоненты фильтрованием, растворитель отгоняют, остаток кристаллизуют вначале из серного эфира, затем иб смеси этилацетата с петролейным эфиром и получают целевое соединение, т,пл. 109-111 С, о (<) g -18,7 (с 1; ДМФ).

Пример 4. Трет-бутилоксикарбонилфенилаланилфенилаланилм етил овый эфн р (Бок-Фен-ф ен-ОМ е ), о

В охлажденный до 0 С раствор 21,2 г (0,08 моль) трвт-бутилоксикарбонилфенилаланина (Бок-Фен-ОН) и 10,8 г (0,08 моль)

1-оксибензотриазола в 120 мл ДМФ при перемешивании добавляют 18,3 r (0,089 моль) о

QUK. Смесь перемешивают при 0 С 2 ч и добавляют к ней раствор 17,6 г (0,082 моль) хлоргидрата фенилаланинметилового эфира в

240 мл БМФ и 14 мл этилморфолина, зао тем перемешивают в течение i ночи при 25 С.

Осадок отфильтровывают, фильтрат,упарива- ют при пониженном давлении, остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают

10%-ным водным раствором пимонной кисло: ты (2х160мл),насыщеннымрастворомбикарбоната натрия (ЗХ200 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (2Х120 мл), сушат над сульфатом магния, упаривают, остаток кристаллизуют из смеси этилацетата с петролейным эфиром и получают целевое соединение, т.пл. 123-124 С fag -13,4 (с 1; ДМФ).

Пример 5. Трифторацетат фенипанилфенилаланинметилового эфира (Н-фен-Феы-ОМе СГ СООН).

586837

25 г (0,058 моль) трет-бутипоксикарбонилфени апанилфен илаланинметип ового эфира, полученного в примере 4, растворяют в холодной трифторуксусной кислоте при 0 С, раствор перемешивают 1,5 ч, кислоту оттоняют при пониженном давлении, к остатку добавляют 1-5 мл метанола, продукт осаждают эфиром, отфильтровывают, промывают эфиоом и получают целевое соединение, т. пл. 250 С (разп; метанол-изопропиповый 1о спирт), f4) 10,6 (с 1; ДМФ).

Пример 6. Трет-бутилоксикарбониласпарагинилфенипаланипфенипаланин метиловый эфир (Бок-Асн-фен-фен-ОМе).

К раствору 23,7 r (0,054 моль) Н- 15

-Фен-Фен-ОМе CF -COOH, полученного в примере 5, в 100" мл ДМФ добавляют, 7,84 мл:H -этилморфолина и 22,6 r (0,055 моль) трет-бутипоксикарбонипаспарагинтрнхпорфенилового эфира. Смесь вьщер- 20 о жйвают при 0 С 3,5 дня, растворитель отгоняют" к остатку добавляют эфир и растирают в порошок, который отфильтровывают. Перекристаллизацией из метанола получают целевоесоеаинение,т. пл. 194-195 С f4) -34,0 25 (с 1; ДМФ).

Пример 7, Бензилоксикарбонил- Я6

-тре ь -бутилоксикарбониплизипаспарагинилфенилаланипфенилаланинметил овый эфир (3-Л из-(Бок) -Асн-Фен-Фен-OMe j . 30

22,5 r (0,0417 моль) Бок-Асн«фен-Фен-ОМе, полученного в примере 6, растворяют в холодной трифторуксусной кислоте (150 мл), перемешивают при 0 С 1 ч, растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле и эфиром осаждают соединение .формулы Н-Асн-Фен-Фен-ОМе CF СООН, в о ь охлажденный до О С раствор О,5 r (0,0172 моль) которого в 70 мл ДМФ при перемешиваний добавляют 2,4 мп К -этилморфолина и раствор 10 r соединения формулы 3 Лиз-(Бок)-ОК р (0,02 моль) в 50мл

ДМФ. Смесь выдерживают при 0 С 2 дня, о растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток перекристаллизовывают из ме-45 танола и получают целевое соединение, т.пл. выше 200 С.

Вычислено,%: С 63,79; Н 6,66; М 10,88i

Найдено,%: С 62,94; Н 6,71; М 10,49.

Пример 8. Дициклогексиламиновая соль И -(а -фенил-5-хлор-2-оксибензипиден)- I5 -ацетамидометилцистенна (СЯ-Цис(Ацм)- ОН КН (С,Н, ) Д.

К раствору 19,6 r (0,085 моль) хлорranрата Я цетамидометипцистеина и б

19,7 г (О, Хьб моль) 5-хлор-2-оксибензофенона в растворе гидрата окиси тетраметиламмония в метаноле (340 мл, 0 S ммопь) добавляют 5 r гидратирован60

Його алюмосиликата щелочного металла (молекулярные сита ЗА), смесь перел ешииют

1 день при комнатной телшературе. Твердые продукты отфильтровывают, фипьтрат упаривают досуха, остаток растворяют в

800 мл смеси воду со льдом и непрореагировавший кетон отфильтровывают. Маточник охлаждают, подкиспяют твердой лимоннои кислотой до рН 4 и экстрагируют этилацетатом (ЗХ200 мл). Экстракт прол ывают хоподнои водой, сушат над сульфатом магния, сульфат магния отфильтровывают, к фильтрату добавляют раствор 15,5 г (0,085 моль) дициклогексиламина в 50 мл этипацетата и получают целевое соединение . в виде кристаллов, т.пл. 161-163 С.

Пример 9. Гидрат — R — (Ы. -фенип-5-хл ор-2-оксибензил иден ) — S -ацетамид ометипцистеинип- Я -трет-бутнпоксикарбониппизиласпарагин илфенилаланипфенилаланинметиловый эфир (СМ-Цис (Ацм )-Лиз (Бок)-Асн-Фен-Фен-ОМе Н О3.

Дициклогексипаминовую соль N. -(Ф фенил-5-хлор-2-оксибензилиден) — S -ацетамидометилцистеина (12,0 г; 20,4 ммопь) суспендируют в 200 мп воды, 55 мл 10%- ной пимонной кислоты доводят рН суспензии до 4. Свободную кислоту экстрагируют этипацетатом, экстракт промывают водой и сушат в течение ночи над безводным сульфатом маг. ния при 0-10 С (при комнатной температуре: происходит разложение), Растворитель отгоняют, остаток растворяют в 150 мл ДМФ и получают раствор свободного цистеинового производного.

Раствор 11,7 г,(0,0152 мопь) гетра пептида с блокированными группами формулы

3-Л из(Бок) -Асн-Фен-фен-ОМе, полученного в примере 7, в 210 мп сухого дистиллиро- ванного ДМФ и 210 мл ледяной уксусной кислоты гидрогенизируют в присутствии

1,7 г катализатора (5% Рц/С) (восстановление:завершается(в течение 2 ч). Катализатор1отфильтровывают, растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле, осаждают серным эфиром и получают тетрапептид, не содержащий блокирующих групп, формулы Н Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-ОМе.

В полученный раствор цистеинового производного с блокированными группами в

ДМФ; прибавляют . 2,7 г (0,02 моль) 1-оксибензотриазопа, затем в охлажденную до о

-10 С смесь при перемешивании добавляют

4.1 r (0,02 моль) - QUK и выдерживают при д о

-10 С 30 мин, при 0 С 1 ч и при комнатной температуре 1 ч. Раствор тетрадекапептида, не содержащего блокирующих групп, в 200 мл ДМФ и 2,6 мл К-этипморфолина о добавляют в охлажденную до 0 С смесь и

586837

8 непрерывно перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в метаноле, осаждают эфиром и продукт кристаллизуют из смеси метанола с водой, получая целевое соединение, Ы р-33,3 (с 1; ДМФ), ЯМР -спектр (CD С ), 4:1,35 (S., 98), 1»8(S»»3H)» 3»55 (4 » ЗН)» 1 0 1 6 (от, 6Н), ip

Пример 10. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицип- Q -ацетамидометилцистеинил- и -трет-бутилоксикарбониллизиле, аспа оагинилфенилаланилфенилаланинметиловый эфир (Бок-Ала-Гли-Цис(Ацм)-Лиз(Бок)- 15

- сн-фен-фен-ОМе), 13»8 г (Q,Q127 моль) пенгапепгида с блокированными группами формулы Сд Ь-GHc (Ацм ) -Л иэ (Бок ) -Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере 9, растворяют в

500 мл 80%-ного раствора уксусной кислоты, раствор перемешивают 20 ч, растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в метаноле и осаждают эфиром, получая соединение формулы 25

Н-Цис- (Ацм)-Лиз(Бок) -Асн-Фен-Фен-ОМе (оЦ -19,1 (c 1; ДМФ), . в холодный раствор которого в 185 мл ДМФ при 0 С добавляют 2 мл И -(тнлморфолина (рН раствора 8) и, продолжая охлаждение, 30 раствор трет-бутилоксикарбонилаланилглицин-2,4,5-трихлорфенилового эфира (7,5 rg

0,0176 моль). Полученный раствор выдерживают в ледяной бане 2 дня, растворитель отгоняют, остаток растворяют в этаноле, 35 осаждают эфиром и перекристаллиэовывают . иэ метанола, получая, целевое> соединение, Г 4 р-30,9 (с 1; ДМФ).

ЯМР-спектр (CDСВ y ), О, 1,38: (f 18Н) 3 58) (Х,ЗН), 7,25 (2п» 4э

1OH)1

Аминокислотный анализ: Ала 1,05

Асп 1,16; Usc 0,174; Гли 1,00; Лиэ 1»21»

Пример ll. Трет-бутилоксикарбонилаланилглицил- K -ацетамидометилцистеинил- К -трет- бутилоксикарбониллизилае спарагинипфенипапанкйфеиипапанингидразид (Бок-Ала-Гли-Цис (Ацм): -Л из (Бок) -Асн-фен-50

-фен М -Н М НД.

В раствор 2,0 г (1,87 ммоль) гепта- пептидного эфира формулы Бок-Ала-Гпи-Цис(Ацм) Лиз(Бок)-Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере 10, в 8 мл диметип- й5 сульфоксида (ДМСО), добавляют 2 мл г (41,3 ммоль) гидраэингидрага. Полученную смесь перемешивают 8 ч, оаЬщают

1 150 мл воды, фильтруют, сушат и попучают целевое соединение. 60(Аминокислотный анализ: Лиз 0,98;

Асп 1,04; Гли 1,0; Ала 1,01; 1/2 Цис

0,37; Фен 2,12, Пример 12. К,$-дигригипцисгенницЯ вЂ” трет-сутилоксикарбониллиэиласпарае гин илфенилаланилфенилаланин метил овый эфир (Трт-Цис(Трт) Лиэ(Бок)-Асн-Фен-фен-OM e ) .

К охлажденной до 0 С смеси 100 мл

» этилацетата с 400 мл 5%-ного водного раствора лимонной «ислоты при перемешивании добавляют 15,82 r (0,023 моль)

К, $ -дигритипцистеиндиэгиламиновой сопи„

\ о перемешивают при 0 С 30 мин, расслаивая смесь. Водный слой отделяют, экстрагируют этилацетатом, обьединенную органическую фазу промывают холодной 2 5%-ной лимонной кислотой и насыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу . супгач над безводным сульфатом магния, растворитель отгоняют и получают К, $ -дитритилцистеин, в раствор которого (0,023 моль) в 100 мл ДМф добавляют 3,75 г (0,027) моль) ,l-оксибензотриаэола, охлаждают до 0 С и при перемешевании вносят 4,81 г (0,233 моль)

ДЦК, затем перемешивают еше при 0 С 2 ч и пэи комнатной температуре 1 ч. Раствор вновь охлаждают до 0 C и, перемешивая, добавляют раствор 14 r (0,0175 моль) сое:динения формулы Н Лиз(Бок)-Асн-Фен-Фен-ОМе в 254 мл ДМФ и 2,43 мл К-этилморфолина. Полученную смесь перемешивают о

l6 ч при 25 С, растворитель отгоняют до

».100 мл, выпавший осадок отфильтровывают» фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в 400 мл этилацетата, фильтруют, фильтрат промывают 2,5%-ным водным раствором лимонной кислоты (Зк100 мл), 7%-ным раствором бикарбоната натрия (3x100 мл) и насыщенным раствором хлористого натрия (2х50 мл), раствор сушат над безводным супьфагоммагния и расгворигепь оггоняюг., Остаток перекрисгаппиэовываюг из смеси этилацетата с петролейным эфиром, получая целевое соединение, т.пл. 180-181 С, о (ОС 17,9о (с 1» ДМФ)

Пример 13. Трат-бутилоксикарбонилапанипгпицив-; S -тритилцистеинил- К е

-чрат-бутилоксикарбониллиэиласпарагинилфенилаланилфенилаланинметил эфир(Бок-Ала-Гли-Цис(Трт) Лиэ(Бок)-Асн-фен-Фен-ОМе).

В раствор 13,5 r (10,7 ммоль) соединения формулы Трт-Цис(Трт) Лиэ(Бок)Асн-фен-фен-ОМе, полученного в примере 12, в 800 мл ледяной уксусной кислоты по каплям при комнатной температуре добавляют 200 мл воды Полученный раствор перемешивают при 45 С 2 ч, затем разбавляют 1 мл воды, выпавший осадок отфильтро586837

9 вывают,. фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в метаноле, осаждают эфиром и получают Н-Цис(Трт)-Лиз(Бок)-Фен-фен-ОМе, в раствор 10,2 г (9,48 ммоль} которого в 79 мл ДМФ, охлажденный до о

О С, добавляют 1,5 мл К зтилморфолина, раствор 5,64 r (13,3 моль)трет-бутилоксикарбонилаланилглицин-2,4,5-трихлорфенилового эфира, полученного в примере 3, в

25 мл ДМФ и 0,5 r 1-оксибензотриазола. i0

Полученный раствор выдерживают 3 дня при о

0 С, растворитель отгоняют, остаток растворяют в метаноле и осаждают эфиром. Перекристаллизацией полученного продукта из метанола получают целевое соединение, (Ф) - 5

20,7 (с 1; ДМФ).

Аминокислотный анализ: Лиз 0,95, Асп 0,94; Гли 1,0; Ала 0,98; Цис 0,52;

Фен 1,92, Пример 14. Треъ-бутилоксикарбони- 20 лаланилглицил- $ -тритилцистеинил- К трет-бутилоксикарб ониллизиласпарагинилфенипаланилфенипапанингидразид> (Бок Ала

-Гли-Цис (Трт) -Л из (Бок) -Асн-Фен-Фен,Н-Н Н НН1.

В раствор 6,5 r (5,25 ммоль) сложного метилового эфира гептапептида формулы

Бок-Ала-Гли-Цис (Трт)-И из (Бок)-Асн-фен-Фен-ОМе, полученного в примере 13, в

410 мл метанола, охлажденного в ледяноя бане, по каплям добавляют 8,8 мл (0,179 моль) гидразингидрата. Смесь перемешивают при о

0 С 20 мин, затем при комнатной температуре 4 дня. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают холодным метанолом, су- 35 шат и получают целевое соединение.

Аминокислотный анализ: Ииз 0,95;

Асп 1,0; Гли 1,0; Ала 0,98; Цис 0,90; фен 2,03. 40

Пример 15. Бензилоксикарбонилтреонилсеринметиловый эфир (3-Три-Сер-ОМе) .

Раствор 3,22 г (6,43 ммоль) бензилоксикарбонилтреонинпентахлорфенилового эфи- 45 pa в 20 мп ДМФ добавляют в раствор

1,0 г (6,43 ммоль) хлоргидрата метипового эфира серина в 15 мл ДМФ и 0,95 мл тризтиламина при 0 С. Полученную смесь пе» ремешивают 20 ч при комнатной температу-50 ре, осадок отфильтровывают, фильтрат концентрируют при пониженном давлении, остаток растирают в порошок в смеси эфира с петролейным эфиром (1:1) до полного удаления пентахпорфенойа. Нерастворившийся ос- 55 таток кристаллизуют из смеси этипацетата с изопропиловым .эфиром и получают целевое о соединение, т.пл. 133-135 С.

ЯМР-спектр (СЬС(5 ), 6 : 3,75 (ЗН), 5,1 (2Н) и 7,3 (5Н). Ю

А. Бензилоксикарбонил-О-трет-бутил)тре он ил-(О-трет«б утиц ) -серинметил овый эфир (З-Три(бут)>-Сер(Бут)-ОМе).

К смеси 13,3 г (43 ммоль) метилового эфира Оберет-бутилсерина с 14,4 г (46,8 ммоль) бензилоксикарбонила-(О-трет-бутил)-траонина и 5,33 мл (43 ммоль)

® -этилморфолина в 100 мл сухого тетрагидрофурана (ТГФ), охлажденной до О С, добавляют по каплям охлажденный раствор

9,3 г (45,1 ммоль) ДЦК в 25 мл ТГФ, перемешивают 45 мин при 0 С и 90 мин при о

25 C. Осадок отфильтровывают, ТГФ отгоо няют при пониженном давлении при 25 С, остаток растворяют; в эфире, фильтруют, фильтрат зкстрагируют последовательно насышенным раствором бикарбоната натрия, на сышенным раствором хлористого натрия, охлажденнной льдом 1 н. лимонной кислотой, водой, насьпценным раствором бикарбоната натрия, водой и насышенным раствором хлористого натрия. Органический экстракт сушат над сульфатом магния и упаривают при пониженном давлении. Остаток чистят хрома тографией на нейтральной окиси алюминия, злюируют бензолом, упаривают и получают целевое соединение в виде масла.

ЯМР-спектр (С ЬС(5 ), 6 : 1,2 (т,21Н)

3,74(5, ЗН), 5,15 (5, 2Н), 7,35 (5, 5Н) °

Пример 16.Метиловьгй эфир бензоипоксикарбонипфенипа пани лтреонипсерина (3-Ф ен-Три-Сер-ОМ е) °

Смесь 1,72 r (4,86 ммоль) метилового эфира бензилоксикарбонилтреонилсерина, полученного в примере 15, в 15 мл 15%-нойуксусной кислоты с 15 мл метанола, 5,34мл (5>34 ммоль) 1 н. соляной кислоты и

0,15 г катализатора (5% Рс(/С) перемешивают в атмосфере водорода 20 ч. Смесь фильтруют через диатомовую землю (целит) фильтрат упаривают досуха и получают х оргидрат метилового эфира треонилсерина (Н-Три-Сер-ОМе>НС ), в раствор 1,24 r (4,86 ммоль) которого в 15 мл ДМФ и

4 о

0,623 мл триэтипамина при О С добавляют раствор 2,32 г (4,86 ммоль) бензилоксикарб онипфенилаланин-2,4,5-трихл орфенил ового эфира в 30 мл ДМФ. Смесь перемешивают 20 ч, фильтруют, фипьтрат. концентрируют при пониженном давленйи, остаток растирают в порошок в смеси эфира с гексаном до полного удаления трихлорфенола. Остаток кристаллизуют из смеси этилацетата с изопропиловым эфиром и получают целевое соединение, т.пл. 167-171 С.

ЯМР-спектр (СЪС 5 ) д : 3,7 (ЗН), 5,03 (2Н), 7,2 и 7,3 (10H).

А. Метиповый эфир бензипоксиквобонвтфенилалан ил-(О-Тр6Т-Оутип ) ре онил-(О»

5868

11 трет-бутип ) -серина (3-Фен-Три (Бут)-Сер (Бут) -ОМе)

14,4 г (30,8 ммоль) соединения 4ормулы 3-Три(Бут}-Сер(Бут)-ОМе, полученного в примере 15 А, растворенного в 120 мл метан ода, совместно с 3,56 r (30, 8 ммопь) пиридинхлоргидрата гидрогенизируют в присутствии 700 г катализатора (5% Р<), /С) и получают соединение формулы Н-Трн(Бут)-Сер-(Бут)-ОМе, которое и 14,7 r (30,8мопь)10

3-Фен-ОТцп растворяют в 150 мл этилао цетата, охлаждают до 0, С и затем к охлажденному раствору добавляют 3,96 мл (30 8 ммоль) К-этилморфолина, Смесь вые о держиваютпри 5 С 3 дня, осадок отфильтро- 15 вывают, фильтрат экстрагируют аналогично примеру 15А. Промытый экстракт сушат и упаривают при пониженном давлении. Остаток чистят хроматографией на силикагеле (1 кг), вымывая 20%-ным раствором этилацетата в бензоле, Элюат упаривают, остаток кристаппизуют из смеси эфира с гексаном и получают целевое соединение, т. пп. 101-103 С l l> 94 (с 1,ДМФ).

Пример, 17. Метилоный эфир бенбензоилка рб он илтре он илфен илаланилтре онилсерина (3-Трн-Фен-Трн-Сер-ОМе ) .

Смесь 1,7 г метилового эфира бензилоксикарбонилфенилаланилтреонилсерина, полученного в примере 16, в 15 мл 15%-ной зр уксусной кислоты и 15 мл метанола совместно с 0,15 г катализатора (5% Pd /С) быстро перемешивают в атмосфере водорода 4- ч. Смесь фипьтруют через диатомовую землю (целит), фильтрами концентрируют 3S досуха и получают соединение Н-Фен-Трн-Сер-OMe в форме кислого аддукта с уксусной кислотой, к раствору 1,4 г (3,4 моль) которого в 20 мл ДМФ и 0,48 мл триэо таноламина при 0 С добавляют раствор л0

1,7 1 r (3,4 ммоль) бензилоксикарбонилтреонинпентахлорфенилового эфира в 150 мл

ДМФ. Полученный раствор перемешивают

20 ч при комнатной температуре, затем растворитель отгоняют, остаток растирают 4S в порошок в эфире до полного удаления пентахлорфенола, Осадок христаллизуют из смеси этилацетата с изопропиловым эфиром и получают целевое соединение в виде его о моногидрата, т.пл. 195-197 С. 50

Вычислено,%: С 56,12; Н 6,49; К9,02.

С Н еМ О,с Н 0

Найдено,%: С 56,06,: Н 6,29; К 8,84.

А, Метиловый эфир бензилоксикарбонип-(О-трет-бутил)-треонилфенилаланил-(О-трет- И

-бутил)-треонил-(О-трет-бутил)-серина (3-Три(Бчт)-феи-Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе), г

10,5 r (17,1 ммоль) соединения формулы (3-Фен-Трн(Бут)-Cep(Бут)-ОМе) гид12 рогенизируют в ледяной уксусной кислоте (100 мл) в присутствии катализатора (5% Pcl/С). После завершения реакции (контроль по TCX) катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток Н-фен«Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе растворяют в бензоле и раствор упаривают при пониженном давлении (дважды) с последуюшей сушкой гидрата окиси калия также при пониженном давлении. В 100 мл сухого ТГФ растворяют

5,3 г (17,1 ммоль) соединения формулы

3-Трн(Бут)-ОН и 4,61 r (34,2 ммоль)

1-оксибензотриазола. Затем при перемешивао нии при 0 C по каплям в полученный раствор добавляют 3,52 г (17,1 ммоль) ДЦК в виде охлажденного раствора в 30 мл ТГФ. о

Перемешивают еще 1 ч при 0 С и 1 ч при о

25 С. Полученный продукт гидрогенолиза растворяют в 35 мл ТГФ, который содержит

2,19 мл (17,1 ммоль),М-этилморфолина, Затем этот раствор добавляют в раствор активированного сложного эфира. Смесь пео ремешивают при -25 С 1 ч, фильтруют, фильтрат упаривают при пониженном давлении, остаток растворяют в серном эфире, фильтруют и фильтрат экстрагируют холодной 1 н, лимонной кислотой, водой, насы щенным раствором бикарбоната натрия и насышенным раствором хлористого натрия. Остаток, полученный после сушки и отгонки эфира, хроматографируют на силикагеле (1 кг), вымывая 20%-ным раствором этилацетата в бензоле. Элюат упаривают, остаток кристаллизуют из смеси эфира с гексаном и получают целевое соединение, т.пл. 110-

113 С, (я(1 27,5 (с 1; ДМФ).

Пример 18. Метиловый эфир бензилоксикарбонил- Я -трет-бутилоксикарбо8 ниллизилтреонилфенилаланилтре онилсерина (3-Лиз (Бок)-Трн-фен-Три-Сер-ОМе).

Смесь 1,3 г осоединения формулы 3-Трн-Фея-Трн-Сер-ОМе, полученного в примере

17, в 30 мл метанола с 0,15 г катализатора (5% P d /С) быстро перемешивают в атмосфере водорода 20 ч. Затем фильтруют через диатомовую землю и концентрируют до сухого состояния, получая соединения формулы H-Тре-фен-Тре-Сер-ОМе, в раствор

1,0 г (2, 18 ммоль) которого в 15 мл ДМФ и 0,1 мл триэтиламина при 0 С добавляют раствор бензилоксикарбонил- Н -трет-буФ тилоксикарбониллизин-и. -нитрофенилового эфира в 150 мл ДМФ и перемешивают еше

20 ч. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в 3 мл метанола и к раствору осторожно добавляют

100 мл эфира. Выпавший осадок собирают и кристаллизуют из метанола, получая цвпео вое соединение, т.пл. 169-171 С.

586837

13

ЯМР-спектр (Q Я0-1 ), ; 1,36 (9Н), 3,65 (3), 505 (2H), 7,3 (OH).

А. Метиловый эфир бензипоксикарбонил„ът Е

-М -бутилоксикарбониллизип- (О-трет-бутил ) -треонилфенилаланил-(О-тре г-бутил)- 5 .треонил — (О-трет-бутил)-серина 13-Лиз(Бок-)

-Трн (Бут) -фен-Трн(Бут) -Сер(Бут) -ОМе). . 8,52 г (11,05 ммоль) соединения формулы З-Трн (Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер (Бут)«Оме, полученного в примере 17А, подвер- 10 гают гидрогенолизу в уксусной кислоте, затем обрабатывают аналогично примеру 17А.

Полученный трипептид формулы Н-Трн(Бут)-фен-Трн(Бут)-ОМе растворяют в 50 мл

ДМФ и добавляют к раствору 1,14 г 35 (11,05 ммоль) N -этилморфолина. Раствор охлаждают до 0 С, добавляют 5,54 r (11,06 ммоль) соединения формулы 3 Лиз (Бок)-ОЯ, и выдерживают при 5 С о

70 ч, Затем при пониженном давлении и о

20-30 С отгоняют ДМФ, остаток хроматографпруют на силикагеле (1 кг), вымывая хлороформом, содержашим 2% метанола.

Эпюат упаривают и получают целевое соедио нение, т.пл. 81-85 С (серный эфир-пет- . р one йный эфир ), ЯМР (CDCf >), 8: 0,99 1,43 (), 3,71 (S, ЗН). 5,13 (s,2H), 7,22 и 7,33 (2х g, 10Н).

36

Пример 19. Метиловый эфир > . аС -диметип- 3,5-дпметоксибензилоксикарбонилтриптофил- К -трет-бутилоксикарбо8 н илл изилтреоп ипфенилалан илтре онилсе рина

j Ддз-Трп-Л из (Бок) — Трн-Фен-Трн-Сер-ОМе

Сл есь 1,61 г соединения формулы

З-Лиз(Бок)-Трн-фен-Трн-Сер-ОМе, попученного в примере 18, в 15 мл 15%-ной уксусной кислоты и 15 мл метанола совместнос 0,15 r . катализатора (5% Р d, /С) быстро перемешивают в атмосфере водорода 20 ч. Смесь фильтруют через диатомовую землю, фильтрат упаривают досуха и получают соединение формулы H-Лиз(Бок)-Трн«фен-Трн-Сер ОМе. Затем раствор 0,653 r

45 (1,53 ммоль ) а, g — диметил — 3,5

-диметоксибензилоксикарбонилтриптофена, 0,345 г (3,0 ммоль) Я -оксисукцинимида и 0,315 г (1,53 ммоль) ДЦК в 13 мл о 50 сухого ТГФ перемешивают 1 ч при 0 С и о, 1 ч при 25 С. В раствор добавляют;.попученный ранее раствор 1,159 r (1,53 ммоль) соединения формулы Н-Лиз(Бок)-Трн-ФенТрн-Сер-ОМе с 0,22 мл триэтиламина в о 55

10 мл ТГФ, перемешивают при 25 С 3 ч, фильтруют, фильтрат упаривают, остаток хрол4атографируют на силикагепе (100 г), вымывая смесью хпоооформ-метаноп-пиридий (90:10;1), элюат упаривают и получают

60 целевое соединение Д„„(в метаноле), нм,289 (Е 5,310), 282 (6 7,410), 274 (Е 7,070), 219 (Е 43,700).

ЯМР-спектр (С Р С (5), 6 1,40 (9Н ), 3,74 (9Н).

А. Метиловый эфир рС, K -диметил"3,5-диметоксибензипоксикарбонилтриптофилЕ

- M -бутил оксикарб ониллиз ил-(О-трет-бутил )—

-треонилфенилаланид -(О-трет-бутил)-треонил.(О-трет-бутил)-серина t Ддз-Трп Лиз(Бок)-Трн (Бут ) -фен-Трн (Бут) -Сер (Бут ) -OMe).

Раствор 7,3 г (7,3 ммоль) соединения формулы 3-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-Фен-Трн(Бут).Сер(Бут)-ОМе, полученного в примере 18А, в уксусной кислоте гидрогенизируют и обрабатывают аналогично примеру 17А. Полученный остаток 1 Н-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-ФенГрн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе) растворяют в

20мл ТГФи добавляют 0,935 мл (7,3ммоль)

К -этилморфолина (смесь 1 ). 3,11 r (7,3 ммоль) соединения формулы Ддз-Tpn ÎH растворяют в 55 мп сухого ТГФ, добавляют 1,97 г (14,6 ммоль) 1-оксибензоо триазола, раствор охлаждают до 0 С и по каплям добавляют охлажденный раствор

1,5 г QUK (7,3 ммоль) в 15 мл ТГФ. о

Смесь перемешивают 1 ч при 0 С и 1 ч о при 20-25 С (смесь 2). Затем смесь 1 добавляют при перемешивании к смеси 2, перемешивают еше 1 ч при 20-25 С, охо паждают до 0 С, фильтруют и фильтрат упа-

4, ривают досуха. Остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают последователь но насыщенным раствором .бикарбоната натрия, насышенным раствором хлористого натрия, сушат над безводным сульфатом магния и концентрируют. Остаток хроматографируют на силикагеле (1 кг), элюат упаривают и получают целевое соединение, т.пл. 112о

114 С (серный эфир — петролейный эфир), (о() > 10,1 (с 1; ДМФ).

П р и л4 е р 20. oC, eL -Диметил«3,5-диметоксибензилоксикарбонилтриптофпл-Я -трет-бутил окс икарбон илл изилтре он ил F. фен илаланилтреонилсерингидразид (Ддз-Трп Пиз(Бок)-Трн-Фен-Трн-Сер- Я IMH>).

Раствор 1,05 г (0,95 ммоль) соединения формулы Ддз-Трн-Лиз(Бок)-Трн-Фен«Трн-Сер-ОМе, полученного в примере 19, и 1,2 мл гидразингидрата в 50 мл метаноо ла черемешивают при 0 С 2 дня. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают метанолом и получают целевой продукт, т.пл. 203206 С.

А. с(, 4 -Диметил-3, 5-д уетоксибензипохсикарбониптриптофип,— М -4зутилоксикарбон изил- (О-трет-бутил ) -треонилфе нипапанип- (О-уречбутип)-треонип-(О-трет-бутил1-серингидразин (Ддз-Трн-Лиз(Бок).»Трн-(Бут)-Фен-Три(Бут)-Сер (Буг)-:КЯКН ).

586837

Раствор 3,71 г 29,1 ммопь) соединения формулы Ддз-Трн-Лиз{Бок)-Трн{Бут)-фен-Трн(Бут)-Сер(Бут)-ОМе, полученного в примере 19А, в 25 мп ДМФ смешивают с 5 мп гидразингидрата, смесь выдерживают, не перемешивая, 3 дня при комнатной температуре, добавпяют воду, выпавший1 осадок отдепяют, п рекристаллизовывают из

„метанопа и получают целевое соединение, .т.пп. 189-191 С.

Пример 21. о(,, аС -Диметип«3,5-дыметипоксибензилоксикарбониптрипто-, фип- Ц -трет-бутилоксикарбонилпизиптреЕ

° онипфенипапанилтреонилсерил:- 3 -ацетаjQII3 TPII -ЛH3(BOK)-- 15

«Трн-фен-Трн-Сер- Цис(Ацм) -ОН .

В раствор 0,800 г (0,724 ммопь) соединения формулы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Трн-фен-Трн-Сер- NН Я Н, полученного в о примере 20, в 30 мп ДМФ при -20 С 20 добавляют 0,824 мл (1,81 ммоль) 2,2 н. раствора безводной соляной кислоты в этилацетате и 0,125 мл (1,68 ммоль) трето бутилнитрипа и перемешивают при -15 С

15 мин. Затем по каплям при о -15 С к раствору добавляют смесь 0,165 г

) (0,724 мм оль) ф -ацетамид ометипцистеина и 0,354 мп (2,53 ммоль) триэтипамина в

15 мл ДМФ. Затем раствор перемешивают .при -15 С 1 чи 20 ч при 5 С. ПриI ЗВ

I пониженном давлении отгоняют растворитель, остаток растворяют в 5 мл метанола и осторожно вводят в 400 мл серного эфира, Выпавший осадок отфильтровывают, растворяют в 5 мп метанола и осторожно добав- 55 ляют в 100 мп охлажденного 0,5 М раствора лимонной кислоты. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой (2х20 мп), осадок кристаллизуют из смеси метанолэтипацетат-изопропиловый эфир и получают о целевое соединение, т.пл. 139-142 С.

ЯМР-спектр (9 М 30= с(), 6 :, 1,35 (9Н), 1,55 (6Н), 1,83 (ЗН), 3,70 {GH).

А. C(, х. -Д иметил- 3,5-диметоксибензилоксикарбониптриптофип- МЯ -трет-бути- 45 локсикарбониплизиптреонилфенипаланилтреонилсерил- S -тритилцистеин (Ддз-Tpn- JI из (Бок ) -Трн-Фен-Трн-Сер-Цис (Трт ) -ОН).

К раствору .,6 г (1,45 ммопь) соединенияия формулы Ддз-Трп-Л из (Бок)—

-Трн-Фен-Три- -Сер-ЯН NH, полученного в примере 20, в 50 мп ДМФ прп -20 С добавляют 1,62 мл (2,26 ммоль) 2,24н. безводного раствора соляной кислоты в этипацетате, затем 0,253 мл (2,18 ммо ь) трет-бутил-ни грига, смесь перемешивают

6 при -15 С 15 мин. В полученный раствор при о

-15 С по ыаппям добавпают раствор 0,527г (1,45 мм опь) S -трити децис теипа и 0,7 2 мп (5,07 ммопь) триэтипамица а80мп ДМФ, 16 затем смесь перемешивают при-15 С 1 ч и о

20ч при 5 С, растворитепьудапяют при пониженномдавлении, остаток кристалпизуютиз метанола и попучают цеаевое соединение, т пп. 205-2 08 С.

ЯМР-спектр ())+$Q=J ) Ж 1,40- (9Н)

1,60 (6Н), 3,75 (6Н), 7,40 (20Н).

Б. К, сС -Диметип-3,5-диметоксибензипоксикарбониптриптофип- g -трет.-бутипоксикарбониплизил-(О-трет-бутил)-треонипфенилаланип- (О-трет-бутип)-треонил-(О.трет-бутип)-серил- 8 -ацетомндометилцистеин 1Ддз-Трп-Лиз (Бок) -Трн (Бут) -ФенТрн (Бут)-Сер(Бут)-Цис(Ацм)-OHj .

1,27 г (1 ммопь) соединения формулы

Ддз-Трп-Л из (Бок) -Тре (Бут ) -Фен-Трн (Бут) . Сер(Бут)-п(Н М Н>, полученного в примере

20А, растворяют в 25 мл сухого дистиппио рованного ДМФ, раствор охпаждают до -20 С . и прибавляют 2,5 мл 1 н. раствора соляной кислоты в этилацетате, затем 0,138 мп

4 (1,2 ммопь) трет-бутипнитрита и перемео шивают 15 мин при -15 С. Раствор 228мг (1 ммоль) хлоргидрата 5 -ацетамидометип. цистеина в 20 мп ДМФ и O 49мл (3 5 ммопь) э триэтиламина охлаждают до -15 С и добавляют в полученную реакционную смесь, о затем перемешивают при -15 С 1 ч при комнатной температуре в течение ночи. Вы . паривают при пониженном давлении, остаток растирают в порошок в воде, осадок собирают, промывают водой и сушат, получая целевое соединение.

ЯМР-спектр (С))С(), У: 1,12, 1,20 и

1,27 (27Н), 1,45 (9Н), 1,63 (6Н), 1,95 (ЗН), 3,68 (6Н).

Аминокислотный анализ: Лиз 1,0 Трн 2,0>

Сер 0,76; UIIc 0,6, Фен 1,0.

В. с(, Ы. -Диметил- 3,5-диметоксибензилокспкарбониптриптофил- Й -трет-бутиЕ л оксикарб онтлпизил-(О-трет-бутип ) -треонипфенипаланип- (О-трет-бутил) -треонип-(О«трат-бутпл)-серил- 8 -тритилцистеин

1Ддз-Трп-Лиз (Бок)-Три(Бут)-Фен-Три(Бут) -Сер(Бут)-Цис(Трт)-ОН3, 1,27 г (1 ммоль) соединения формулы

Ддз-Трп-Л из (Бок) -Трн (Бут) -Фен-Трн (Бут )—

«Сер(Бут) — g Н5f Н, полученного в примере 20А, растворяют в 20 мл сухого перегнанного ДМФ, раствор охлаждают до -20 С о и прибавляют 1,25 мп 2н, раствора соляной кислоты в этипацетате, затем 0,137 мл (1,2 ммоль) трет-бутилнитрита и перемео шивают 15 мин при -15 С, Раствор

0,363 г (1 ммоль) соединения формулы Н 14ис(Трт)-ОН в 35 мп ДМФ и 0,49 мп

{3,5 ммопь) триэтипамина охлаждают до о

-15 С и добавпяют в полученную реакцион ную смесь, затем перемешивают при -15 C о

f о ,1 ч и при 20-25 С в течение ночи. Раст586837

17

18 l5 ь:>оитепь о тгэняют при пониженном давпе о пии (0,2 мм рт,ст.) и 35 С, остаток расти-! ан т в порошок в охлажденном льдом 1 н. растворе лимонной кислоты, фильтруют, прэлэь>1я» >т водой, сушат, сухой продукт расти-.

5 рают о порошок в гексане, отфильтровывают и вновь сушат. Получают целевое соединен ие.

ЯМР-спектр (COCA ) 8: 1,13, 1,17 и

1,23 (27Н), 1,47 (9H), 1,74 {6Н), fo

3,78 (6Н).

Пример 22. Триптофип- К -третбутипоксикарбоничп изиптреонипфенипапанилтреонипсерип- $ -ацетамидометилцистеинацетата !" Н-Трп-Лиз(Бок)-Трн-Фен-Трн-Сер-Цис(Ацм)-OH . АсОН!

Раствор 0,465 r (0,367 ммопь) соединенияформупы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Трн-Фен-Трн-Сер-Цис (Ацм ) -ОН, полученного в примере 21, в 25 мл 80 о-ной уксусной 20 кислоты перемешивают при комнатной температуре 27 ч, растворитепь отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в

3 мл уксусной кислоты и осторожно вносят в 300 мп серного эфира. Осадок собирают, 25 сушат и получают целевое соединение.

ЯМР-спектр (Х) М SQ d „), о ; 1,34 (9Н)

1,90 (ЗН).

А. Триптофил- Я -трет-бутппоксикарбониппизиптреонипфенилалаииптреонил- 8 -три-36 типцистеинацетат Е-Е ТрпЛиз(Бок) Трн

Фен — Трн-Сер-Цис(Грт) -OH. AcOH) .

Раствор 1,02 г (0,710 ммопь) соедине>эия формулы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Тэ>н-ФенТрн-Сер-Цис(Трт)-ОН, полученного в при.эе- 35 ре 21А, в 50 мп 80" -ной уксусной кислоты перемешивают при комнатной температуре 27 ч, добавляют 100 мп воды, выпавший осад >к собирают, промывают серным эфиром, сушат и получают полевое соединение, 4О

ЯМР-спектр (DMSO- dе), 8: 1,40 (9Н)

7,35 (20I I ) °

Б, риптофип- H -бутилоксикарбониплиhF

;.э ил- (О-трет-бутип ) -треон ипфен ипаланил- (О-трет — бутэш )-треон ил (О-трет — бутип)-серип- 45

-апета мидометилцистеин (f Е-Трп-Л из (Бок)-Трн(Бут)-Фен-Трп(Бут)-Сер (Бут)-U,. (А лэ)-(>if)

1,50 г (1,045 ммопь) соединения формулы Дп:э-ТЕ>п /Еиз(Бок)- рн(Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер(Бут)-Цис(Ацм)-Off, полученногп в примере 21, растворяют в 12 мп охпажд >пней смеси уксусная кислота-муравьи .—

>эая кисл ота-вода (7: 1:2), раствор перемешивают в течение ночи при комнатной темпе-5

fMTQf» > РасTBOf>HTPJIB OTI оняют, OCTA TOK p&CI«воряют в метаноле и концентрированным раствором гицрата окиси аммония доводят

f>il Е>аствора до 6,5. Затем добавляют воду, ;>Са>Э>ца>Э ПРОДУКТ> KOTOPbIH ОТДЕЛЯЮТ> СУШЛТ, - вновь растворяют в метаноле и осаждают холодным серным эфиром. Получают целевое с оед ин ение.

ЯМР-спектр (C QC C ) > А 1, 17, 1,20 и 1,27 (27Н), 1,41 (9Н), 1,91 (ЗН).

Аминокислотный анализ: Лиз 1,0;

Трн 2,2; Сер 0,65; 1/2 Цис 0,69; Фен 1,1.

В. Триптофип- К -трет-бутип оксикарЕ

6 он илп из ил-(0-трет-6 утип ) -тре он ипфенипаланип-(О-трет-бутип)-треонил-(О-трет-бутип)-серил- S -тритипцистеин $H-Трп-Лиз(Бок)-Трн (Бут ) -4> ен-Трн (Бут) -Сер (Бут ) -Цис (Трт )—

ОН ) .

5,13 г (3,2 ммопь) соединения формупы Ддз-Трп-Лиз(Бок)-Трн(Бут)-Фен-Трн (Бут)-Сер(Бут) — Цис(Трт)-ОН, полученного в примере 21В, растворяют в смеси (56 мп) уксусная кислота- муравьиная кислота- вода {7: 1:2), полученный раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, растворнтепь отгоняют, остаток растворяют в 26 мл метанола, концен