Способ определения специфических антител

Способ определения специфических антител

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Соеетскмх

Соцмалмстниескнх

Республмк

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ЯВТОРСКОМУ СВИДИТЙЛЬСТВУ 11 587398 (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 14.06,76 (21) 2371640/28 13 г с присоединением заявкя № (5)) М.

& 01 g SS/16 фС 07 Q 7/00

Гвсудврственнмй квмнтет

Свевтв Инннетров СССР вв делам нзоервтеннй и втнрытнй (23) Приоритет (43).Опубликовано 05.01.78. Бюллетень ¹1 (45) Дата опубликования описания11,01.78 (53) УДК 612.398..132 (088.8) (72) А вторы нзобретения

M. И. Грутман и С. Л. Ягуд

Киевский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиология и паразитологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ

АНТИТЕЛ изобретение относится к нммунологии и может быть использовано для изучении иммунитета при бактериальных и вирусных инфекциях, а также при вакцинации.

Известен способ определения специфичео ких антител, относящихся к различным клас сам иммуноглобулинов, путем сорбпии из образца иммуноглобулннов исследуемого класса с помощью иммуносорбента, приготовленного на базе антисыворотки к это- }0 му классу с последукхттям элюярованием этих йммуньглобулннов и оцределением специфических антител общепринятымифеетодамн (1 1.

Однако такой способ трудоемкий и требует большого числа операций. )5

С целью упрощения способа иэ исследуемой жидкости удаляют сопутствующие амму« ноглобулины с помощью иммуносорбента и определяют целевой продукт непосредственно в жидкости. 20

Пример. Определяют антитела против антигенов из Sfi,SOnnei .о ыасащнхся к, "J>g, в сыворотках больных дизентерией Зонне.

Дпя этого иэ сывороток адсорбяруют все иммуноглобулины классов 3Q g u g g М.А дсррбцию ямму ноглобулинов классов 3qQ и Д Я нв проводят, поскольку содержание этих иммуноглобулинов в сыворотке в 10-1000 раэ меньше, чем 5 А, а также потому, что антитела класса GEE не определяются в реакции гамагглютинации, применяющейся в этом исследовании для определения специфических антител. Таким образом, иммуноглобулины 3(9 и 3 Е не могут сколько-нибудь значительно повлиять на.пеэультаты определения.

Для адсорбции 3q $ я " Jg М нэ сывороток предварительно готовят иммуносорбент. С этой целью смешивают равные количества неразведенных моноспецифических сывороток против QgM (титр 1:10) и против 5g g (титр 1:15 . К смеси сывороток при постояте ком цомешивании по каплям добавляют

5%ный раствор глютарового альдегяда (яэ расчета 3 объеме этого раствора на 10 объемов сыворотки ) и оставляют на 3 час при комнатной температуре. Через S чac образующийся гель тщательно гомогениэнруют в гомогеннэаторе н трижды отмывают

0,15 М раствором хлорнстого натрия, эа587398

Составитель В. Дроздов

Техред Н. Бабурка Корректор А. Впасенко 77/

ПО писное

Редактор Л. Волкова

Заказ 126/34 t д

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 буференным 0,01 М фосфатным буфером, рН 7>2 ° Затем в каждый из исследуемых сывороток добавляют тщательно суспендированный с помощью гомогенизатора иммуносорбент, предварительно осажденный центри- фугированием. На 1,5 мл сыворотки берут иммуносорбент, приготовленный из 1 мл смеси моноспецифическил сывороток против

3q g и 3)M взятых в соотношении l 1. о

Оставляют в термостате при 37 С на 1 час„ о а затем на ночь в холодильнике. r. Наутро иммуносорбент бсаждают центрифигурованием и проводят еше две подобных адсорбции.

Дри второй i и третьей адсоцбциях на 1,5 мл сыворотки каждый раз берут иммуносорбент

15 в количестве, ответствующем 0,5 мл смеси моноспецифических сывороток. После трех адсорбций в исследуемых сыворотках отсутствуют иммуноглобулины > фи J g g, 20 о чем свидетельствует реакция иммунодиффузии в агаре по методуМот с тК . Затем, в подвергнутых адсорбции исследуемых сы воротках опредепяют с помощью реакции пас сивной гемагглютинации антитела (класса

3q А) против Sh. Serrate, . В качестве антигена используют липополисахарид из.Sh.Sorrrrti, Предлагаемый способ определения содержания специфических антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов, обеспечивает исключение отмывки комплекса иммуносорбент иммуноглобулин от неспецифически сорбировавшихся белков, эпюации иммуноглобулйна и его последующее освобождение от элюента, соответственно исключаются потери при всех операциях, и концентрация определяемого иммуноглабулина в образце, подвергнутом адсорбпиям, практически равна его концентрации в исходном материале. Это обусловливает более высокую чувствительность метода по сравнению с существующим, все это приводит к уменьшению трудоемкости способа и дает воз.можность проводить определение сразу в большом количестве проб.

Формула изобретения

Способ опре де пения специфических анти те л, относящихся к различным классам иммуногпобупинов, путемсорбции, о т л и ч а ю ш и й- с я тем, что, с целью упрощения способа, из исследуемой жидкости удаляют сопутствующие иммуноглобулины с помощью иммуносорбента и определяют целевой продукт непосредственно в жидкости.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. ЖМЭИ, 1951, с. 125-126.