Штамм перевиваемой клеточной линии почки плода коровы ппк

Штамм перевиваемой клеточной линии почки плода коровы ппк

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И C-АНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ нц 588238

Союз Советских

Социалнстическик

Республик

K АВТОРСКОМУ СВИДЕИтзЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 02.06.75 (21) 2141073, 15 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет (43) Опубликовано 15,01.78. Бюллетень _#_ 2 (45) Дата опубликования описания 06.02.78 (51) М. Кл. С 12К 1/00

С 12К 9/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 578.085.23 (088.8) (72) Автор изобретения

3. П. Наумец (71) Заявитель Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (54) 111ТАММ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ПОЧКИ

ПЛОДА КОРОВЬ| — ПИК

Изобретение относится к биологии и представляет собой новый штамм перевиваемой клеточной линии почки плода коровы, используемый в ветеринарной и медицинской вирусологии для культивирования вирусов и решения ряда задач практической и экспериментальной биологии. При изготовлении диагностических препаратов и вакцин видовая принадлежность ткани — ППК дает преимущество для культивирования вирусов крупного рогатого скота.

В литературе известны перевиваемые клеточные линии почек плода коровы. В частности, известен штамм перевиваемой клеточной линии почки 6-тн месячного плода коровы.

Первичные и пассажные культуры представляют веретенообразную массу клеток. В культурах хорошо размножались только вирусы везикулярного стоматита и вакцины.

Аденовирусы, гернес вирус, В вирус прн пассажах быстро теряли инфекцнониость.

Наиболее близким по своим свойствам к предложенному штамму является штамм перевиваемой клеточной линии почки эмбриона коро вы, который имеет клетки преимущественно эпителиального типа.

Однако морфология клеток сохраняется характерной для первых пассажей. В культурах старше 8 — 10 дней клетки уплотняются, удлиняются и принимают веретенообразную форму. В первых пассажах коэффициент пересева 1: 6, после седьмого пассажа 1: 2 — 1: 4.

Клетки почек не подвергаются трансформации. Штамм хотя и чувствителен к ряду вирусов, но ьызывает цитопатические изменения в культуре клеток и полную деструкцию монослоя в течение 48 часов.

Целью изобретения является штамм перевиваемой клеточной линии почки плода коровы — ППК, обладающий повышенной интен1р сивностью размножения, формирующий морфологически стабильный эпителиоидный монослой клеток, чувствительный к широкому спектру вирусов, не контаминированный микоплазмами или в нрусными агентами, по срав15 нению с известными перевнваемыми клеточными линиями почек эмбриона крупного рогатого скота.

Полученный штамм перевиваемой клеточной линии почки плода коровы — ППК имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики.

Зпителноидные клетки полигональной формы имеют четкие границы. Ядро округлой формы находится в центральной части клетки.

Протоплазма клеток светлая, не вакуолизирована. При высеве единичные клетки в процессе размножения образуют колонки округлой формы с неро вными краями.

Рост клеток однослойный. Сплошной монозр слой формируется на 5-й и 7-й день при посев588238

Составитель

Тсхред Н. Рь

Л. Мурая бкииа

1(оррсктор А. Степанова

Редактор Н. Аристова

Подписное

Тираж 563 а Совета Министров СССР ий и открытий аушская наб., д. 4/5 апунова, 2 пр. С

Типография, 3 ной дозе клеток в 10" мл. Клетки легко отделяются от стекла 0,02 /о раствором версена.

При пипетировании образуется мелкая однородная взвесь клеток.

После образования монослоя производят пе- 5 ресев клеток. Старую питательную среду удаляют, клеточный монослой промывают раствором Хенкса и в сосуд добавляют 0020/0 раствора версена, подогретого до 37 . Флаконы оставляют в термостате при 37"С на 5 — 10 мин. 10

С помощью микроскопа наблюдают за действием версена. После разобщения клеток монослоя, их округления, флаконы осторожно переворачивают так, чтобы плоскость с клетками была над раствором. Сливают версен. Затем 15 энергично встряхнув клетки, к ним добавляют питательную среду.

Культура клеток адаптирована к питательной среде следующего состава: среда 199 и

0,5 /о раствора гидролизат-лактальбумина в 20 равных количествах, 10% сыворотки молодняка крупного рогатого скота, пенициллин, стрептомицин из расчета 100 ед/мл.

Клетки неприхотливы к питательным средам и хорошо растут также на среде 199 или

0,5% -ном растворе гидролизат-лактальбумина при содержании сыворотки от 2 до 20 /о. Оптимальный рН среды является б,8 — 7,2.

В поддерживающую среду сыворотка не добавляется.

Хранение штамма ППК.

Для поддержания жизнедеятельности штамма клетки пересевают 1 раз в неделю при концентрации суспензии 1: б.

В условиях термостата при +37 С клетки сохраняются в течение месяца без смены питательной среды. При комнатной температуре

+18 С сохраняются в течение двух недель.

В условиях холодильника при +4 С сохраняются 7 дней. 40

Чувствительность к вирусам.

Штамм ППК обладает широким спектром чувствительности к вирусам крупного рогатого скота: инфекционного ринотрахеита, диареи, параинфлюэнцы, энтеровирусов, а также вирусов, общих для других видов животных— вируса везикулярного стоматита, ящура, Ауески, осповакцины. Вирусы вызывают цитопатические изменения в культуре клеток и полную деструкцию монослоя через 18 — 24 часов. 50

Контроль контаминации.

Контроль контаминации ППК микоплазмами проводится путем посева клеток на среду

Хоттингера, к которой добавлены факторы роста — 20 /о сыворотки лошади, 10% дрожжевого экстракта.

Контроль контаминации латентными вирусами проведен путем электронной микроскопии культуры.

Заказ 3256/1 Изд. Хз 198

НПО Государственного комитет по делам изобретен

113035, Москва, К-35, P

Для получения такого штамма использовали почки 3- месячного плода коровы, клинически здоровой из хозяйства, благополучного ь отношении туберкулеза, бруцеллеза и других инфекционных заболеваний. Корковый слой почки плода измельчали и трипсинизировали по общеупотребительной методике. Клетки суспензировали в 0,5%-ном растворе гидролизат-лактальбумина в сбалансированном растворе Хенкса с добавлением 10% телячьей сыворотки.

В результате проведенных исследований и клонирования получена однородная клеточная популяция с высоким индексом пролиферации — б.

В лаборатории вирусологии УНИИЭВ клеточная линия пригодна для изготовления диагностических препаратов и вакцин из штамма

«Оксфорд» вируса инфекционного ринотрахеита п1тамма, «Орегон» вирусной диареи и твинэфирного антигена и штамма SF4-вируса параинфлюзнцы-3 крупного рогатого скота.

Формула изобретения

Штамм перевпваемой клеточной линии почки плода коровы-ПП К, используемый для культивирования вирусов. Штамм хранится в лаборатории вирусологии Украинского ордена

Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии.

Морфологические признаки. Однородная культура, состоящая из эпителиоидных клеток, полигональпой формы. В центре клетки округлое ядро. Протоплазма светлая не вакуолизирована. При росте из одной клетки образуются колонии округлой формы с неровными краями.

Рост клеток однослойный.

Физиологические признаки. Лдгезивная способность клеток хорошая. Легко снимаются со стекла 0,02% раствором версена.

Кл тки неприхотливы к питательным средам и хорошо растут на среде 199 и 0,5%-ном растворе гидролизат-лактальбумина в сбалансированном растворе Хенкса с добавлением от

2 до 20о/о сыворотки крупного рогатого скота.

В поддерживающуlo среду сыворотка не доба вляется.

При пипетированпп дают равномерную мелкую взвесь клеток, Сплошной монослой образуется на 5 — 7 день при посеве суспензии 1: б.

Чувствительна к вирусу инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, диареи, парапнфлюзпцы, энтеровнрусов, ящура, везикулярного cIGматита, осповакцины, Ньюкастла Н. Вирусы вызывают цитопатические изменения в культуре клеток и полную деструкцию монослоя через 18 — 24 ч.