588926 - Способ получения антибиотических веществ

Способ получения антибиотических веществ

Иллюстрации

Показать все

Реферат

О п (и, 588926

Союз Советских

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К flAYEHTY (6!) Дополнительный к патентувЂ” (22) ЗаЯвлено 0806.73 (21) 1931001/30-15 (23) Приоритет 08.06.72 (32) 57058/72 (51) М . Кл, С 12 D 9/14 (31) (33) Япония

Гее деретееннын немнтет

Оееета мнннетрее СВОР на делам наебретеннй н етнрытнй (43) Опубликовано150128. Бюллетень №. 2 (45) Дата опубликования описания 1201.78 (53j УДК 615.779.931 (088. 8) Иностранцы

Апуси Аоки, Рикия Фукуда, Тосно Накаябу, Кэйдэиро Исибаси, Чиеко Такэичи и Мицуо Исида (Япония) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Санкио Компани Лимитед (Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ

Неб

Изобретение относится к способам получения антибиотиков с помощью микробиологического синтеза, в частности к способам, основанным на культивировании в качестве продуцента видов, относящихся к gkraptornyces.

Йзвестен способ получения антибиотиков, по которому нродуцент антибиотиков, относящихся к 5 t rep t o w y ce e e культивируют на жидкой питательной среде, близкой к нейтралЬной, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, в аэробных условиях.

После культивирования продуцента производят выделение целевых продуктов.

По предлагаемому способу получейия антибиотиков возможно получение в одном технологическом т икле соединений общей формулы (1(2 где Яа вЂ” водород или метил;

М2 вЂ” метил илк пирроилоксиметильная группа вЂ” СН,00

5 Н Д вЂ” метйл, этил, причем в том случае, когда %т вЂ”.водо род, то к вЂ” метил или пирроилокси метильная группа и Т з вЂ” метил или этил, l0 а в том случае, когда Ра вЂ” метил, то

М вЂ” метил и Яа-: метил или этил, и формулы TI 6н

Ъ о(и, По предлагаемому способу в ка25 честве 6Ф re р1о m у се Е берут штамм

В-41-146 (депонирован в научно-исследовательском институте промышленной микробиологии агенства промышленной науки и техники Японии, I3i ko ken ki n k i

30 Р 1438) .

588926

Культивирование продуцента ведут на жидкой питательной среде, близкой к нейтральной, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли,в азробных условиях способ предусяатри вает выделение целевого продукта из культуральной среды.

В результате обширных исследований авторами изобретения было установлено что новый антибиотик вЂ” соединение 1, которое названо заявителем В-41, производится микроорганизмами штамма

В-41-146, то есть штамма, который относится к роду Skveptowусез, не только значительно превосходит по акаРицидной активности органические соединения, обладающие акарнцидной акти. ностью, но также может быть эффективно использован для борьбы с сельско,6 хозяйственными и садовыми вредными насекомыми, в частности с тлей, личинками насекоьых отряда Лепидоптера и т.д.

Антибиотик В-41, который представляет собой активнодействующий компонент о инсектицидной и акарицидной композиции, можно разделить на девять типов вещестВ А1 У А% У АЬ У АМ, В.1, Ва

В Р С1 H C

Физико-химические свойства этих ве 6 ществ приведены в табл. 1.

588926 c1 РЪ

an л

СЧ

I» х

ОЪ ь 4 Ф

СЧ В

° Ф и

° ° й1

° Ф 1 °

C0 Pl

СЧ ОЪ с

СЧ an

1О о

Ъ ж о

Ю С«Ъ

CO «Ф

М »

С» С»

С«Ъ «Ф

СС1 1 E Ь

СЧ О

СЧ

4 х в

CO ь 4

g (ч в

° Ф ° ° и х

° « «Ф ми

° ° ° Ф

Ж;и о

® и ф оа о ED л

4 х

Ю (Ч

1»

g в

ОЪ СЧ аО 1 с с

Со Ю

С»

О\

ЦЪ

М.СО

С»

1А

° и х

СЧ В

СЧ л

М о ж

v (Ч

° Ф л

1 (Ч

4 х в

СЧ

«Ф 1О иЪ аО

CO 0Ъ

СЧ

Р Ъ

° Ф

СЧ

ССЪ

ad о

Ф ж е" и

СФЪ (Ч

g в ль

ССЪ Ю

Ь Ь

СО CO

\О

Ch л

1О

СЧ

С«Ъ

00 я

Ch (Ч О в а С»

° Ф

СЧ & e

1 о

0 ч ж

С»

С0

Ln л

С«Ъ

Саа

С Ъ

Ж в

<Ч

СЧ

Щ в

1 »

С«Ъ

O ь

+ ю.

° Ф в

1« о ж м

««Ъ и

СЧ

СЧ л

СЧ

СЧ л

М в л

СЧ

ОЪ

М (»

Ю л

+ («Ъ

ССЪ 4

° Ф («I В

С» л

О о

v ф 1С оа л

4 х в

С«1

1»

Id в

Л1

СЧ

1 »

1О ю I» Ф х

СЧ & о Ф

Чх х àoH ао оа

111

) л

% ь 4 Ф g

СЧ &

1 о

Ф ч ж

СЧ

A и

СЪ

\О л

+ Ф СО л

» с

Ю В

С»

Ю ÑO

an ñO

М »

Ю Со

1 ь

Г»

М в

О\

Г Ъ л

М о х е

Id е х

1 х е

1 IaI о н х о

Х OI

m О х х

e o

СО CO an Ch

4 anлю

М с с с

С0 1» СЧ СО

1О . \О

СЧ «I an

CO В С0

% с

Ю CO Oa

1 аО

<«Ъ Ch С Ъ

° Ф С«Ъ 1

% ъ С

Ю CO а

1 10

С«Ъ О\ С«Ъ

СО m

Ъ с Ь с0 л

С7 С»

v ж ж х

С3 Ch хо ф х5 а х е Ф х х

Е е к о е ехх а хо

1»

3 ф х

Х Oa td а х х ах к н0 а ф

Х g Ц е оо к н

О оф

0 OÈ

p,+ е

И о а ао н н х е е И

И о х

I Х о х

o o

ld ф

Х Ф

rd ни

adII а

Е»

IC е:> 5о

ad с г а х о" о 1 е е еМ ех

О. ла О

ХО Х Н

43RЯ 4 ф О L

z8 ай

Д Д Р3

„ 1 х я еббр

4 31a1

О ad хах ф-1 IC хвю

vs*

О, Ф х ео

Нн ое кх

4 о

C Cd е а0 н хк ф I

И М им о и ° .о

-OКО о

Я g в«

Щ $1«I «g«

0в «О а с х ч

dI IC 1aI O и 5х а

588926 а

Зн о

1 а

М х

1 х аф

2 %

Вн

Э Э жо юона

-eu

Э Э хо вой

- cu о ° гч о m а су л4 лФ ар

И 3н о он о ч ж

Ф Э

М О

03 ни

1 о а

0m ж OI фя л Г ъ о

° ф л л

1 а а о и о

Е х а о х х о

Э х х х и

1 Х оо х m хи х в

Э Э

1 Л ао а оло

Э со о

e o m ало

Э Э хо

° Ф LA (л lA

- о ю о ч 05

° э л л ллем- и

Э Э

ыо

СЧ Ф N 1 Л о о и) О 5 ю л л л И

Ф Э

Ы О о л кл о а0 лиз 05 е лЕ и

I а Э о > а

Й!н э

ГАХН ХЭо ох ххо ах -ox н ахэ1

@9m Но

9 Q P6 сч

g хОъ 0) хл и IRt о хи 3 иххое ю

uuкхоо хох оа я - Q юсч х

Х I

Фо ЯЭ Э

О11 ХХХХ хххео а аа внэо

410 О

ЭОа 901:В н х Ф Мх а

-ouх ао

ЕЭНЮЕН1: цаео1:лх

3 и х х а м х о рхх в хйх-R ф ОВФО хйо @ фонио х ceo

tume

9 ОХ

Й- Йй

8 4 оа

I 6 °

О а5 и

Э х

1Я 63 оа хе аа

Э и их х

Э хо

Э 3

588926! н е и э ео м х

О. о Ф ж !

I н

Ю ие ео

f4 х

0 о л

z л о

Ф ж

v йо

05 е и о 0 ж !! и о

2 иэ ео !

Н е

В1 иэ е о

1!3 Х л о

Г о

I!1 о н

2 ие ео м х л

„,о

4 к ж

1 н

5 иэ ео

fo x йо

c v

1 о

00 ж о

Э х и

A х v

X IX ! о о m х v х х в

1 Ж

Ie а з х Р3 и д Э Хл ннМа!

o v ад ч о

I ЖC(XI ьх В

u I!I e g

3 и аRoai3, ! .нэ а . их <ч иР\ ехл ннма! о и а.х! оа

Ц 1 с х но а и

1 к

v ае х охх

Й R9 и но э х х о нц

l. 1 Ц о х щ:". 3 он ма а н уо

I н

v e эо ах

Э йВOOxI и х е

1! !1ХХ онеа

I!! V Ê И Е еоеео ххцшх

М о л о .! -ох 1 чх! х 1!1<х!

Э Э 1!! е я щ «не к н<их оинхй х едено

ЦО я О е н н х х о mхоо

4 Э О Х с

Оохин+ х 4О хО

ooze

О мах х voeì !т

Е Х 1 Й !!! х 0 w о ххжн н

V. 0ÖV1а

Q ф ф ф Ы с

4+Хэа0 о н х < хех>

xNegco )!

Э 1 л

I!!ХКЕ ИХ о ах>о аох х -I!I хее к ео цхью н хаохл х но!:е -e

ЕХ4ЦИ X аоо ао э Nx ц ° д

Н 4 4 хиох «о ах &м х

5 а н нхя э «с хиэах х х ин ю4ц

e I!I v х .делса

e I Х AX лба и!<5

Й о е50 -д ми хю À

V nt X X 1!I е 1 хх эн х

g v ñ е ирмне «а

ЭХИЦХИ на не

-еаао ю1д ох

Зйенонх

X Оg О 4 Х Э хн ooeI!I иэ2иххн х vov о.эи ем н

V 4 %X 0 3 Е

o e e x o I!1

g x Io 1 н м н

-кх а о о. ооаэхко

Р4 н!О 1:и

5 о п1 е х х х х х фэ э э

О 1.

vvevge ех 1н ажао хм и

4О Х МУ

Rill I «к ф

x2ev х э g e се(4» 4 ° !Ц < 4

vae4mO1

4 Ц X 1 Оi и с йа о

@(et: 401 õ

5 х х хе -йХ мехи ае

Ца Фан

eg Ac и х -эх а х о !с И и!

588926

Таблица 2

Силикагель F

Система растворителей

1. Ацетон: н-гексан=30:70

0,47 0,32 0,42 0,44 0,47 0,61 О 63 0,22 0,24

2. Этилацетат: бензол 50:50

О 61 О 62 О 63 О 65 О 79 О 80 О 82 О 45 О 47

3. Этилацетат: хлороформ 25:75 0,17

0,35 0,39 0,41 0>75 0,79 0,81 0,12 0,13

4 . Ацетон: бензол=40: б О

О 85 О 75 О 77 0 79 О 92 0 92 О 92 О 60 0 63

5. Ацетон: бензол=15:75

О 39 О 32 О 39 О 39 О 57 О 51 О 53 О 11 О 13 с б. Этанол:Я-гексан 2:98

О О

Таблица 3

Глинозем Р

Система растворителей (табл.2) А1 в

В>

0,55 0,16 0,32 0,34 0,67 0,92. 0,92 О

0,56 0,10 0,21 0,23 0,73 0,81 . 0,83 О

О 40 0,10 0,15 О 17 О 63 0 65 О 67 О

0,27 0,05 0,09 О,ll 0,35 0,45 0,47 О

0,17 0,03 0,07 0 09 0,20 0,42 - 0,44 О

Величины Р для укаэанных веществ, которые получены с помощью хроматографии в тонком слое с применением пленки для хроматографии в тонком слое, содержащей флуоресцентный реагент, (вы-,б пускаемый фирмой Токио Касеи Когио М под торговым наименованием Спотфилм

Из исследования приведенных физико- химических свойств, в частности очень четкого расщепления линий масс-спектра, и результатов анализа с помощью рентгеновых лучей следует, что компоненты флуоресент ), приведен в табл. 2 и 3

Определение проводили, измеряя интенсивность флуоресценции, которая достигалась в тех случаях, когда каждое иэ веществ облучали УФ-лучами с длиной волны 2 536 я.

А, Ag, А4, В1, В, В, С и Ст антибиотика В-41 характеризуются общей структурной формулой I, где радикалы имеют значения, приведенные в табл. 4 °

588926

Таблица 4

° Л

Снз

СН3

Н снэ

CHS снз сн

В2

Н сн

-At„eC к

-At eeC к

СН3

С,Н6 снэ

СН5

Н сн -ососн, .сн сн сн

0494 г с11э

Снгснгснз

ОН

CHS

0Н

25 СНЗ сн

В1

СИ1

35 си

tNoC !

Из изложенного выше становится со- 30 вершенно очевидно, что компонент А1 .антибиотика В-41 отвечает структурной формуле П. ежив

Поскольку какие-либо антибиотики, отвечающие приведенным формулам и обладающие указанными физико-химическими свойствами, неизвестны, совершенно очевидно что вещества В-41 иэобреI

50 тения являются новыми антибиотиками.

Штамм В-41-146 рода, который производит антибиотик Ц;41, обладает следующими микологическими характеристиками °

1. Морфологические характеристики:

В самых обычных лабораторных сре;дах иэ тонкодисперсного разветвленного субстратного мицелия образуется динный воздушный мицелий и образуются мутовки со спиралями или петлями.

На ранней стадии .не наблюдается фрагментация мицелия.

Споры с более или менее короткими наростами от 0,6 до 0,9х1,1-1,5 мкм образуют цепочки с 10-50 конидиями.

На поверхности спор имеются короткие бородавчатые наросты.

Спорангии и склероции не наблюдаются.

2. Характеристики культуры в различных питательных средах, I) Сахарозо- нитратный агар: .

Хороший рост, бесцветность субстратного мицелия, с обратной стороны бледно-коричневый, воздушный мицелий слабый, . полупрозрачный, кожистый, растворимый пигмент бледно-коричневый.

П) Глюкозо-аспарагиновый агарг

Интенсивный рост; бесцветность субстратного мицелияг с обратной стороны бледно-коричневыйг воздушный мицелий обильный, окрашенный в серый цветг растворимый пигмент бледно-коричневый.

Ш) Глицерино-аспарагиновый агар

Интенсивный рост; бесцветность субстратного мицелия; с обратной стороны бледно-коричневьФ; воздушный мицелий белый,.а на срезе на белом фоне образуется множество ярких серовато-коричневых точек; растворимый пигмент желтовато-серый.

IV) Агар иэ неорганических солей н крахмалаг

Интенсивный рост; бесцветность субстратного мицелия; с обратной стороны желтовато-серый; воздушный мицелий серый,а на срезе на сером фоне обраэуется множество бледно-желтоватых точек, растворимый пигмент яркий оливково-серый.

5889 6

V) Тиросиновый агар:

Интенсивный рост; субстратный мицелий серовато-желто-коричневый; с обратной стороны коричневый; воздушный мицелий серый, а на срезе на сером фоне иногда образуются желтоватосерые точки; растворимый пигмент яркий коричневый.

VI) Питательный агар:

Слабый рост; бесцветность субстратного мицелия; с обратной стороны бледно-коричневый; воздушный мицелий слабый, белого цвета, растворимый пигмент не образуется.

VII) Агар на основе дрожжевого и солодового экстрактов:

Интенсивный рост; субстратный мицелий серовато-желто-коричневый; с обратной стороны желтовато-коричневый„. воздушный мицелий обильный серого..

20 цвета, а на срезе на сером фоне образуется множество бледно-желтых пятен; растворимый пигмент желтый;

УШ) Овсяно-мучной агар:

Интенсивный рост; субстратный мицелий бесцветный; с обратной стороны

25 оливково-серый; воздушный мицелий серый, а на срезе образуются бледножелтые точки; растворимый пигмент бледно-оливковый.

3<1

3 Физиологические характеристики:

T) Температурный интервал роста:

18-37 С.

Оптимальный температурный интервал роста: 25-30 С.

П) Разжижение желатины: медленное, но сильно положительное.

Ш) Гидролиз крахмала: сильно положительный.

IV) Коагуляция снятого молока: положительная (28 С) .

V) Образование меланина: отрицательное.

УХ) Восстановление нитрата: положительное.VII) Утилизация различных источников углерода (агар Придхэма и Готтли-. еба).

Степень утилизации:

+++Рафиноза.

++ 11 -глюкоза,=О -фруктоза, сахароза ) -рамноза .tI -инозит 7) маннитол.

+ L -арабиноза, 1) -ксилоэа.

По указанным свойствам этот штамм наиболее близок штамму 8krepkomycee

ChаНа поо Двн.s.tS . (Международный жур-. нал систематической бактериологии, том 18, И 2, стр. 97, 1968), однако этот штамм .характеризуется следующи. ми отличиями от штамма В-41-146.

1) Штамм В-41-146 интенсивно образует мутовку, тогда как штамм g4 . сяо140tfoogerr& jg моноподиально разветвлен. 65

2) Поверхность спор микроорганизмов штамма В-41-146 бородавчатая, тогда как поверхность спор микроорганизмов штамма &1г. сЬаНа it аосте п sos покрыта иглами.

3) На агаре на основе дрожжевого и солодового экстракта и arape на основе неорганических солей и крахмала микроорганизмы штамма В-41-146 íà сером фоне образуют бледно-желтые точки, тогда как микроорганизмы штамма $kr.

charta поофе к Э S таких точек не образуют.

4) Микроорганизмы штамма B-41-146 усваивают Ь -арабинозу, 17 -ксилозу и Х -инозит, тогда как микроорганизмы штамма gkr. спаНалоофе fist& такие источники углерода не усваивают .

Учитывая эти отличия по микологическим свойствам, авторы изобретения пришли к выводу, что штамм В-41-146 является новым видом микроорганизмов

Рода /(rept щусЕВ.

Известно, что актиномицеты проявляют тенденцию к мутации в естествен-. ных условиях и под воздействием таких искусственных факторов, как, например облучение Уф-лучами, облучение радиоактивными лучами, а также прй обработке химическими средствами и т .д .

То же самое явление наблюдается при испытании штамма по изобретению В-41146. Предлагаемый штамм В-41-146 включает в себя все такие мутанты, то есть он включает в себя или охватывает все штаммы, которые производят антибиотик

В-41, и те штаммы, которые невозможно четко отличить от штамма В-41-146, а также их мутанты.

При осуществлении предлагаемого способа антибиотик В-41 получают выращиванием штамма В-41-146 в соответствующей питательной среде с последующим его выделением. Этот штамм можно выращивать в соответствии с методами выра- щивания в неподвижном состоянии, но при получении антибиотического вещества в больших количествах наиболее предпочтительно выращивать штамм в соответ» ствии с методами выращивания в жидкой среде с аэрацией и перемешиванием.

В качестве питательной среды можно использовать любую питательную среду которую обычно применяют для выращивания штаммов, относящихся к роду Strep

kornyCes . Группа веществ, являющихся источниками углерода, включает в себя крахмал, декстрин, глюкозу, мальтозу, кукурузный экстракт и мелассу, а грувпа веществ, являющихся источниками аэа та включает в себя мясной и дрожжевой экстракты, соевую муку, казеин, сульфат аммония и нитрат аммония. В случае необходимости в питательную среду можно добавлять неорганические соли калия, кальция, магния, железа, меди, 17

588926 цинка, марганца, кобальта и др. эле- земом и элюируют хлороформом. Эффекментов или микроэлементов. тивные по акарицидной активности фракДля выделения антибиотика В-41 из ции отбирают и отгоняют хлороформ.Эту жидкой питательной среды разработаны операцию повторяют несколько раз, в и применяются такие обычные методы, 5 результате чего получают 8,2 г сырокак экстрагирование органическим рас- ro вещества. При использовании сырого творителем в присутствии или в отсут- вещества в концентрации 2 мг/мп его ствии адсорбента или вспомогательного акарицидная активность составила 100%. агента. В этом случае клеточную мас- Сырое вещество пропускают через су можно отфильтровать от жидкой 10 колонну, заполненную адсорбентом среды и затем проэкстрагировать opra- geyhadex L. H-20 (торговое наименическим растворителем, например ме- нование продукта, выпускаемого фирмой танолом или ацетоном, или же жидкую Фармасиа Ко ) и элюируют метилосреДУ М«« НеПОСрЕдСтвенно экстраги- вым спиртом. Получают вещ чают вещества которовать таким органическим растворите- рые являются основн с о новными компонентами ю ей последовательностиг лем как хлороформ, этилацетат, бен- B-41, в следующей

Ь и A . Однако каждое зол, н-гексан или циклогексан. Agi В1, В, аз, H y Д

Для очистки маслообразного сырого из этих веществ содержит некоторое

В-41 которое получают при количество веществ смежных фракций, вещества вЂ”, к вие чего их выделяют в виде далении растворителя иэ экстракта, вследствие чего их выд уд н применяют известные способы очистки, смеси двух в ще х ве еств а именно: В +A

И в частности способ хроматографическо- »g+Ag

+А +А . Смесь В +A обрабатывают

2 го выделения в колонне или способ экс- в силикагеле р вой х оматографической олонне и элюируют смесью хлороформа трагирования растворителем. колонне и э ру

В приведенных примерах активность = и этилацетат . у

Смесь В + A + A также обжидкой среды определяют методом оку- 115 мг А . Смесь ают в силикагелевой хроматогранания паутинных двупятнистых клещи- рабатывают ков. Для этого листья обыкновенной фа- фическай колонне олонне и получают 200 мг Вд. соли, на которых паразитируют паутин- и и 30 мг В, который идентичен Вд Даче ез глиноземную хроматогра ичеую ографичеонк п опускают оставшуюся ные двупятнистые клещики, окунают и э лее через г выдерживают в течение 1 мин в 70%-ном скую колон у р у

oN с или группу веществ A,+ A> и получают 372мг

4 5 тем их сушат на воздухе и опред акарицидную активность по истечении 3 которую пропускали указанн вое масло, повторно и многократно проI

П и м е р l. 30 л жидкой питатель- мывают метиловъм спиртом и полученные

Н 7 21 д р ащ элюаты пРопУскают чеРеэ силикагелевУю хроматографическую колонку, вследствие с Н 7 2) содержащей 2,0Ô ,@ чего получают 78 мг компонента С проОЪ ки соевых бобов и 0,2В дукта В-41 и 52 мг компонента С ваемый сосуд емкостью 50 л и затем стеВ-41. рилиэуют нагреванием. Штамм В-41-146 дукта В- 1. инокулируют в указанную среду и прово- Для приготовлвни р лвния предлагаемой индят процесс выращивания при аэробном сектицидной акарицид и и ной комнозицин одперемешивании среды при 2ФС, расходе 45 но или несколько уч пол енных таким обтока воздуха на аэрацию 8 л/мин и разом веществ A- yi ф э в A A В «Вз Су и Сд азбавляют наполнителем,,перемешивании со скоростью мешалки продукта B-41 раз

250 об/мин. Процесс выращивания прово- после чего в случа сл ае необходимости в дят в течение 120 мин причем питатель- эту композицию добавляют другие вспоная среда приобретает яркую желтую 50 могательные агенты. ак окраску. ооле

П 300-кратного раэбавле- основе таких веществ м ств можно приготовсты г ан лированные и тонкодисI ния акарицидная активность жидкой сре- лять дусты гранулирова ды составила 100Ъ. осле этого клеточ- персные гранулиров ли ованные препараты,сманую массу отфильтровывают и экстраги- чиваемые корош, У ки эм льгирующиеся конаэ оэольные препарат ацетоном который затем отгоняют. z,-, центраты,масляные р

Получают 44 г коричневого вещества. ты и т.д.Операции .Опе а ии очистки можно преЭто вещество экстрагируют гексаном, который потом отгоняют. Остаток рас- не полностью очищенное вещество можно использовать в качестве активнодействуго компонента. В случае необходилового спирта и приготовленный раст- ющего компонента. мости использования сырого вещества вор оставляют стоять на ночь нри темтнвно ейстй о адок от- как такового в качестве актнвноде стпературе -20С; выпавший осадок отвующего компонента вполне достаточно фильтровывают. Метиловый спирт отго35 г коричневого мас- очистить сырой продукт до такой степеняют и получают г к ла. Полученное таким образом масло ни, при которо в к хроматографируют на колонне с r а колонне с глино- 5 вес.ч./1000000 вес.ч. его акарицид588926

20 ная активность была бы равна 1000. В этом случае содержание антибиотика

В-41 в сыром продукте составляет приблизительно 50%, а остальная часть приходится на долю примесей жидкой ) среды.

Приведенный в данном описании термин наполнитель использован для обозначения искусственного или природного неорганического или органи- П1 ческого материала, который добавляют в инсектицид с целью упростить перенос его активнодействующего компонента на различные обрабатываемые объекты, в частности на растения, клещей, 15 вредные насекомые и т.д., или с целью упростить хранение, транспортировку или обращение с активнодействующим компонентом.

В качестве примеров подходящих твер20 дых носителей можно указать неорганические вещества, в частности глину, тальк, диатомовую землю, каолин, бентонит, карбонат кальция и искусственный-силикат кальция; натуральные и 25 синтетические смолы, в частности кумароновые и алкидные смолы и поливинилхлорид; воски, в частности карнаубский и парафиновый воск; скорлупу орехов, в частности грецких и кокосовых, а также соевую муку.

Приемлемы также и жидкие наполнители или носители, такие как вода, спирты, в частности этиловый и изопропиловый, и этиленгликолЫ простые З5 гликолевые эфиры, в частности этилен1гликольмонофениловый и диэтиленгликольмоноэтиловый; кетоны, в частности ацетон, метилизобутилкетон, циклогексанон, ацетофенон и изофорону простые эфиры, в частности тетрагидрофуран и диоксану ароматические углеводороды, в частности бензол, толуол, ксилол и метилнафталин; хлорированные углеводороды, в частности трихлорэтилен и четыреххлористый углерод, а также ниэ . кокипящие, средние и высококипящие фракции нефти, которые включают в себя керосин, легкие масла или ароматические углеводороды.

Группа примеров подходящих пропеллентов включает в себя фуроновые газы, сжиженные нефтяные газы, метиловый простой эфир и винилхлоридные мономеры.

Для эмульгирования, диспергирования, смачивания или распределения по поверхности используют поверхностноактивные вещества, которые могут быть как ионогенными так и неионогенными.

Группа приемлемых анионоактивных по- б0 верхностно-активных веществ включает в себя натриевую и кальциевую соли лигносульфокислоты, натриевую соль лаурилсульфокислоты и натриевую и кальциевую соли додецилбензолсульфокислоты и натриевую и кальциевую соли додецилбен золсульфокислоты. Группа примеров приемлемых катионоактивных поверхностно-активных веществ включает н себя высшие алифатические амины и продукты конденсации окиси этилена и высших алифатических аминов. Группа примеров подходящих неионогенных поверхностно-активных веществ включает в себя глицерины жирных кислот, сложные эфиры сахарозы жирных кислот, продукты конденсации окиси этилена с высшими жирными кислотами, продукты конденсации окиси этилена с алкилфенолами и алкилнафтолами и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена, Предлагаемая инсектицидная и акарицидная композиция может содержать защитный коллоидный агент, в частности желатину, аравийскую камедь, казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцеллюлозу, или тиксотропный агент, в частности полифосфат натрия или бентонит. Кроме того, композиция может содержать другое соединение, которое также характеризуется инсектицидной и акарицидной активностью, в частности такое как 2-(1-метилпропил) -4,6динитрофенил- Р -диметилакрилат,ди(п-хлорфенил)-циклопропил-карбинол, М вЂ (2-метил-4-хлорфенил) вЂ” М, М диметилформамидин, 2,4,4,5-тетрахлордифенилсульфон, 1,1,-бис-(п-хлорфенил)

-2,2,2-трихлорэтанол, 0,0-диэтил- 6вЂ”

-(2-этилтио)-этилфосфордитиоат,0,0-диметил- 9 -(Н -метил- К -формилкарбамоилметил)фосфордитиоат, 2-втор. бутилфенил- М -метилкарбамат или м-толил- И -метилкарбамат, или минеральное масло, вследствие чего эффективность композиции значительно увеличивается, а в некоторых случаях можно ожидать синергический эффект. Предлагаемую композицию можно использовать в смеси с любыми фунгицидами,, регуляторами роста растений, удобрениями и т.д.

Об эффективности предлагаемых инсектицидных композиций с акарицидным действием можно судить из приведенных примеров испытаний.

Пример испытания 1.

Иэ каждого из эмульгирующихся концентратов, которые содержат по 20% одного из веществ A1 вЂ” A4, В1 вЂ” В, Сз и продукта В вЂ” 41, которые были выделены по примеру 1, разбавляют до определенной концентрации. Листья фасоли обыкновенной, зараженные двупятнистым паутинным клещиком, погружают и выдерживают в течение 1 мин в приготовленных химических растворах. Затем их сушат на воздухе и по истечении 24 ч определяют акарипиднуюактивность в процентах. Данные полученных результатов приведены в табл.5.

588926

Таблица 5

Антибиоти

Акарициднан активность а

Концентрация раство а ч млн р

20 . 10 5, 2 5 1 25 0 63 (0 31 0 16 0 08 0 04

100 100 100 19, 9

100 100 100 67,6

А1

100 100 100 100 100

100

100 98,2 100 15,2

100 100 100 21, 3

100

В1

100

190

100

100 56,4 0

Пример испытания 2.

Эмульгирующийся концентрат, содержащий 20% сырого, полученного по при- 40 меру 1 коричневого маслообраэного продукта В-41, дважды очищенного хроматографическим методом на глиноземной колонке, разбавляют до заданной концентрации . Полученным химическим раствором 45 опрыскивают яблоневые листья, зараженные приблизительно 100 паутинными волосатыми клещиками и по истечении пяти дней подсчитывают число живых клещиков. Данные испытаний приведены в табл. 6, где в числителе указано количество живых клещиков в момент подсчета, а в знаменателе вЂ” количество клещиков до опрыскивания.

Таблица 6 ран ч ннн

Про

200

50/115

56/128 4/121

8/103

88/102

Сырой продукт В-41 5/108

Продукт Кельтан О/97

Беэ обработки меру 1 н очищенных хроматографическим методом с применением силикагелевой колонки, и сырой смеси А +А +А, по65 лученной путем обработки сырого проПример испытания 3.

Из эмульгирующихся концентратов, каждый из которых содержит 20% одного из продуктов В-41, полученных по при98, 1 81,5 69,2 20,0

100 100 100 100

100 100 1() 0 100

1,1-бис(п-хлорфенил)вЂ”

2,2,2-трихлорэтанол (торговое наименование Кельтан ) .80,5 16,6 0

100 74,1 18,3 0

100 100 100 51,8

100 100 100 97,3

588926

23 дукта В-41 на хроматографической колонке с использованием смеси этилацетатг бенэол 50:50, готовят растворы и разбавляют их до заданной концентрации.Полученный раствор используют для

Таблица 7

Продукт

Ака ицидная активность % н.

100

85,5

100

30,8

Пример испытания 4.

Иэ эмульгирующегося концентрата, который содержит 20% сырой, полученной 25 по примеру 1, смеси А1+ В, и трижды очищенную хроматографическим методом с применением силикагелевой колонки с использованием смеси н-гексан: ацетон 70:30 и сырой смеси A>+A>+B< про- ф) дукта В-41, полученного по аналогии

Таблица 8

Продук

64,2

92,3

100

Сырая смесь A +B1

Сырая смесь.A2+АЭ+В

52,8

89,8

100

О,О-Диметил-О(2,2-дихлорвинил) фосфат

33,1

73,1

100

Пример испытания. 5.

Яйцами стебельковой огневки первого поколения заражают ростки риса (сорт Кинмаэе ), высаженные в горшки площадью по 200 см . После того 85 как из яиц выведутся личинки, стебли риса опрыскивают предлагаемым продуктом. Смачивающийся порошок, содержащий 401 сырого, приготовленного .по примеру 1 продукта В-41, двукратно

Сырой продукт В-41

Сырая смесь А +А +А

Продукт Кельтан 90,9 опрыскивания листьев апельсинового дерева, зараженных цитрусовым красным хлещем, и по истечении 24 ч определя-. ют акарицндную активность в процентах.

Данные результатов приведены в табл.7. с первым продуктом, готовят растворы и разбавляют нх до заданной концентра-,. ции. Полученный раствор используют для опрыскивания капусты китайской, зараженной персиковой тлей. По истечении 24 ч определяют смертность, тли в процентах. Данные результатов нриведены в табл. 8. очищенного хроматографическим методом на глиноземной колонке, разбавляют до заданной концентрации и опрыскивают растения 100 мл раствора на каждый горшок. По истечении пяти дней стебельки срезают для подсчета живых и погибших личинок и определяют смертность личинок в процентах. Данные результаты приведены в табл. 9 °

588926

Т а б л и ц а 9

Продукт

Акарицидная активность %

Концентраци млн.

100

Сырой продукт В-41

100

79,4

0,0-диэтил-О- (2изопропил-4-метил-6пиримидинил)фосфортиоат

82,1

25,5

Формула изобретения

Как следует из примеров испытаний

1-5, антибиотик В-41 обладает высокой 20 инсектицидной и акарицидной активностью и имеет значительно больший эффект в борьбе с клещами, чем обычные химические средства, Пример приготовления 1. 10 вес.ч. сырого, полученного по примеру 1 продукта В-41, дважды очищенного хроматографическим методом с применением силикагелевой колонки, гомогенизируют смешением 5 bee.ч. белой сажи, ЗО

50 вес.ч. талька и 35 вес.ч. глины.

Полученную смесь трижды измельчают в мельнице ударного типа, гомогенизируют и получают дуст.

Пример приготовления 2. 40 вес.ч. сырого, полученного по примеру 1 продукта В-41 гомогенно смешивают с

20 вес.ч. белой сажи, 5 вес,ч. додецилбензолсульфоната натрия, 2 вес.ч. поливинилового спирта и 33 вес.ч. гли- 40 ны. Конечную смесь трижды измельчают на мельнице ударного типа и вновь гомогенизируют, получая смачивающийся порошок.

Пример приготовления 3. 20 вес.ч. сырого, полученного по примеру 1 продукта В-41 гомогенно смешивают с

7 вес.ч. полиоксиэтиленнонилфенилового эфира, 3 вес.ч. додецилбензолсульфоната кальция и 70 вес.ч. ксилола.

Полученную смесь профильтровывают и

50 получают эмульгирующийся концентрат.

Пример приготовления 4 . 1 О в ес.ч . сырого, полученного по примеру 1,продукта В-41 растворяют в 10 вес.ч.ксилола. Конечный раствор смешивают с

80 вес.ч. машинного м сла, фильтруют в результате чего получают маслянистый препарат для опрыскивания.

Способ получения антибиотических веществ, включающий культивирование продуцента, относящегося к &

Ид где М1 вЂ” водород или метил; М вЂ” метил или пирроилоксиметильная группа -CH ÎÎ м

I (Н

Я З вЂ” метил, этил, причем в том случае, когда Ф1 вЂ” водород, то к вЂ” метил или пирроилоксиметильная группа и Р5 вЂ” метил или этил, а в том случае, когда к< вЂ” метил, то

М вЂ” метил и к вЂ” метил или этил; и формулы И : 1Й(I

Си

0(На в качестве $

588926

100 Вв

Фиа 2

Длина Йлны, ммк.м фи@!

Ялино 3олнцминм

ФИи 3 д,лина 6юлны наемки

Фиа.5 с вв

Фв

I бв

% 0

4 с

3 ф вби N

Длина Выну| ммкм

Длина Адни иянм мьаЭ. ювв гм ввю

Длина Волны мам фжб

588926

gprrrчrо Ваонермкм фею.б

Ъ И ф г

Ч000 0000 2000 1000 16I0 1ц00 и00 боонгбое число, сн фиг. 1/

5 00 с

b М

3 Ь

L бб ь

< 110

II g

ЛИ 000

До на аОЛНа1, ММИМ фиа. 7

tN t00 w 000

Д овю оапек, kwrrm

ФжУ с

1 00 М

4 ДЮ МФ ЮЮ 4КФ )НУ ЖЮ МЮ Nt бовюбоо мачо, см фиа М

Ч000 З000 0000 1000 1000 1Ч00 1гж WW ж болнабаг число, cw -1 фви 12

588926

W ?О

Фив.Я

МЮ ЗЯО 2000 1В001000W01200ПЮ Оа

Великое числе см - Фиа1б фнв1б

ИВО Зввв 2000 1ООО 1000 1400 280 1000 000

ВолмоВое росло гм

Фив. 10

Фив. 17

° 4

1 ф

40ОО ЯЯО 2ЯВ 1ЯО 1 1ЕВВ 1200 1ВЯ IIII

ВолиоВее росло. ем ъ ь Я

НОО 3Nt 20N 1000 1ФЮ JMI ФЯ 1ОВВ ВФ.

ВолиоВое число ом ь в у I0

Ью

4N 0000 2ЯО 1ВЯ 1ИУ .ад 1200 1ВВОВОВ

-в

Веллер росло, ом

° Ю

6О вв в

_#_N 2000 1000 VN W0 1200 1000 000 оолноВое число, см

QueJO

588926

Фиа Рб

ФмаИ

Составитель M. Дранишников

Редактор Л. Емельянова Техред А.Богдан .-Корректор С.нмалова

Эаказ 195/721 Тираж ХЯ Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,,й. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ получения антибиотических веществ

Патент 588926