Способ выделения фермента целлюлозы из содержащего его раствора

Способ выделения фермента целлюлозы из содержащего его раствора

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1 г н

<и; 590931

Сеюз Советсмнк

Сецналистмчеснн х

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено180275 (2Ö 2106796/28-13 с присое)1ннением заявки ¹ (233 Приоритет (43) Опубликовано 251278.Бюллетень № 47 (45) Дата опубликования описания 25.1278 (53) М. Кл.

С 07 Я 7/028

С 12 9 13/10

Государственный коыитет

Совета Министров СССР. по делам изобретений и открытн Й (53) УДК 663.11.

576.8.093. 1 (088.8) (72) Авторы изобретения

Р. В. Фениксова, К. A. Калунянц, М. С. Ваганова, Г. В. Щусь и В. Г. Рыжакова (73) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский-биотехническнй институт (54 ) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТА ЦЕЛЛЮЛАЗЫ

ИЗ СОДЕРЖИЦЕГО ЕГО РлСтВОРл

Изобретение относится к способам выделения ферментных препаратов микробного происхождения и может использоваться для получения очищенных препаратов, например целлюлаэы ° 5

Известен способ выделенчя ферментов в том числе целлюлаэ, иэ растворов 1) . Согласно этому способу продуцент целлюлазы vicbodevma divide, Таichoderma б по итп, еаза ichurn сапйдца выращивают на питательных средах.

Культивирование проводят прн постоянной аэрации и температуре 28-30 С в

0 течение 2-6 суток. По окончании культивирования мицелий гриба отделяют.

Полученный. ферментный раствор концентрируют в вакууме при 28-30 С до содержания сухих веществ 20Ъ. Затем к концентрату добавляют при постоянном перемешиванин сульфат аммония и жидкие парафины. Осадок флотируют в течение 4 ч. По окончании флотации осветленный маточный раствор сливают, ферментный осадок суспендируют и смешивают с органическим растворителем, например этанолом. Полученную смесь сепарируют, при этом флотоагент удаляется из ферментного осадка вместе с органическим растворителем. Ферментный осадок высушивают одним из известных способов, например лиофильно. Выход фермента при таком способе выделения составляет

853 к исходной активности ферментного раствора.

Цель изобретения — повышение выхода фермента целлюлазы из содержащего его раствора и его стабильности при хранении, а также снижение себестоимости препарата.

Для этого, согласно предлагаемому способу, выделение фермента целлюлазы из содержащего его раствора осуществляют осаждением фермента на сорбент с последующей фильтрацией полученного сорбата и сушкой его одним из известных способов, например в потоке теплого воздуха. Раствор фермента перед добавлением сорбента охлаждают, а в качестве сорбента используют измельченную целлюлозу. Ileлесообразно раствор перед добавлением сорбента охладить до 5-15 С, а а измельченную целлюлозу с величиной частиц 10-100 мк вводить в количе« стве 0,1-10 г на каждые 50 единиц активности фермента.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

590957

Перед выделением фермента рН ферментного раствора доводят соляной кислотой до 3,0-б,0, затем раствор охлаждают до 5-150С, в охлажденный раствор задают измельченную целлюлозу с величиной частиц 10-100 мк в количестве 0,1-10 r на каждые 50 единиц активности фермента. Суспеиэию 5 перемешивают в течение 0,2-2 ч и отфильтровывают. Сырой сорбат высушивают в потоке теплого воздуха и измельчают. Полученный препарат обладает стабильностью при хранении. Целлюлоза является субстратом, иа который действует фермент, поэтому в процессе гидролитического действия фермента сорбент полностью разрушается, а освободившийся Фермент атакует новые порции субстрата, добавленные в реакционную смесь.

Пример. Продуцент целлюлазы

Tvichadevvact vitiate выращивают на питательной среде следующего состава, Ъ:

Стекловичный жом 5

Сульфат аммония 1

Одноэамещенный фос-. форнокислый калий 0,2

Вода Остальное 25

Культивирование проводят при постоянном перемешивании и аэрации в течение б суток при 28-30 С. По окон0 чании ферментации отделяют мицелий фильтрацией. В фильтрат культуральной 30 жидкости при 25 С добавляют 15%-ную соляную кислоту в количестве 0,5 л на 1 мФ После перемешивания рН фильтрата составляет 4,5. Затем фильтрат охлаждают до 5 С и добавляют 20 кг измельченной до величины частиц 100 мк целлюлозы. Суспензию перемешивают в течение 20 мин механической мешалкой и фильтруют через капроновую ткань.

Полученный сорбат высушивают на ленточной сушилке при 50 С. Выход Фермента в данном случае составил 95100%.

Активность полученного по предлагаемому способу препарата при хранении его в течение года при 20 С не о изменялась.

Предлагаемый способ позволяет довести выход ферментного препарата до 95-100%, исключить использование органических растворителей и нейтральных солей на осаждение фермента, испольэовать в качестве сорбента отходы целлюлозно-бумажной промышленности, повысить степень очистки ферментного препарата и стабильность его при хранении, .а также значительно снизить его себестоимость.

Формула изобретения

1. Способ выделения фермента целлюлаэы из содержащего его раствора, например культуральной жидкости, предусматривающий осаждение фермента,,.о т л и ч а и шийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и его стабильности при хранении, раствор, содержащий фермент, перед осаждением охлаждают и осаждение Фермента осуществляют на сорбент, представляющий собой измельченную целлюлозу, полученную суспензию Фильтруют и отделенный при этом сорбат сушат.

2. Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем, что раствор охлаждают до 5-15 С. в

3. Способ но п.l, о т л и ч а юшийся тем, что сорбент вводят

s количестве 0,1-10 r на каждые

50 единиц активности фермента.

4 ° Сорбент по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что величина частиц целлюлозы составляет 10-100 мк.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Авторское свидетельство СССР

9 495347, кл. С 12 Э 13/10, 30.07 ° 73. Составитель М. Андреева редактор Л. Письман Техред С.Веца Корректор С. Шекмар

Заказ 7313/49 Тираж 517 Подписное

ПНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Раушская наб. д, 4 5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4