Способ количественного определения антибиотиков

Способ количественного определения антибиотиков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е <>592845

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Со1оа. Советских

Социалистических

Реслублнк (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 13.01.75 (21) 2096001/30-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 15.02.78. Бюллетень ¹ 6 (45) Дата опубликования описания 01.03.78 (51) М.Кл 2 С 12 D 9> 02

Государственный комитет

4овета Министров СССР (53) УДК 615.779.90 (088.8) ло делам изобретений н открытий 1 (72) Авторы изобретения

А. П. Башкович, А. В. Прокопович, H. Д. Лохина, И. М. Терешин, М. А. Малков, Н. С. Реди, А. М. Зисерман и H. М. Мишина (71) Заявитель

Ленинградский научно-исследовательский институт антибиотиков (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

АНТИБИОТИКОВ

Градуировочная кривая для определения концентраций олеандомицина представлена ниже.

Плотность 1=420 нм

0,15 0,25 0,35 0,48 0,71

Изобретение относится,к микробиологической промышленности и может найти применение при производстве витаминов, алкалоидов, .аминокислот.

Известен способ количественного опреде.ления канамицина в растворе путем проведения реакции с нингидрином с последующим колориметрированием окрашенного продукта (1). Однако известный способ не обеспечивает определения антибиотиков, имеющих кислотноосновные группы.

С целью определения антибиотиков, имеющих кислотноосновные группы по предлагаемому способу в процессе биосинтеза и выделения в исследуемый образец добавляют краситель, содержащий кислотноосновные группы и гидрофобные элементы структуры и экстрагируют образующиеся соединения органическим растворителем, не смешивающихся с водой.

Пример 1. Берут i0,5 мл нативного раствора неомицина, добавляют 15 мл 0,015%-ного водного раствора красителя бромтимолового синего, 10 мл фосфатноцитратного буфера с рН 5,6 (0,2 М Ка-,НРО -2Н О вЂ” 35,65 г в

1 л и 0,1 лимонной кислоты — 21,008 г в 1 л, соотношение растворов 8,-", мл и 11,6 мл).

:Экстрагируют комплекс хлороформом в течение 20 мин, Хлороформный слой отделяют и колориметрируют на ФЭКе при синем светофильтре № 4 в кювете № 3 против контроля (те же реактивы и 0,5 мл воды). Концентрацию неомицина определяют,по градуировочной кривой, которая представлена ниже.

Оптическая плотность 0,23 0,56 0,83 1,2 1,5 1,9 продуктов реакции при ).=424 н,я

Концентрация, неогяици- 50 100 150 200 250 300

10 на, ед!мл

Пример 2. Анализ концентраций олеандомицина осуществляют так, как описано в примере 1, используя буфер Мак-Ильвейна

15 с рН 4,2, в качестве экстрагента хлороформ.

Концентрация, ед/мл 23,7 39,5 59,2 79,0 118,5

Пример 3. Берут 0,5 мл культур альной жидкости нистатина, добавляют 15 мл

0,015%-ного водного раствора бромтимол синего, 10 мл 0,1 М фосфатного буферного раствора с рН 5,0 и экстрагируют комплекс метиленхлоридом. Затем поступают так, как описано в примере 1. Органическую фазу от592845

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Новожилова Техред И. Карандашова Корректор И. Симкина

Подписное

Заказ 970/2138 Изд. № 192 Тираж 563

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил, пред, «Патент» деляют от водной и от твердой фазы — мицелия.

П р им е р 4. Анализ содержания леворина в мицелии осуществляют так, как описано в .предыдущем примере, использовав в качестве исходного раствора суспензию 0,1 г мицелия в 200 мл воды.

Прим е р 5. 12 л раствора олеандомицина с активностью 11,2 ед/мл с рН 6,6 фильтруют через колонку с катионитом СДВ-ЗТ в

Na+ -форме,со акоростью 80 мл/см ч.

Десорбцию проводят 30 мл метиленхлорида, содержащего 0,5% бромтимол синего. В элюате определяют концентрацию олеандомицина колориметрированием.

Преимуществами предложенного способа является простота, быстрота проведения и высокая чувствительность анализа. Так, на проведение известных методов анализа требуется от нескольких часов до суток, предложенный способ требует не более получаса, чувствительность метода выше известных в

5 — 10 раз. Все это позволяет оперативно контролировать технологические процессы получения антибиотиков .и за счет этого повысить нх выход.

Способ количественного определения антибиопиков путем колориметрирсвания охра10 шенного продукта взаимодействия антибиотика с химическим реагентом, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью определения антибиотиков, имеющих кислотноосновные группы, в процессе биосинтеза и выделения в ис15 следуемый образец добавляют краситель, содержащий кислотноосновные труппы и гидрофобные элементы структуры и экстрагируют образующиеся соединения органическим растворителем, не смеши вающимся с водой.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

1. Гoc. Фар маклея СССР. Хизд. М., 1968.