Способ получения ферментного препарата каталазы

Способ получения ферментного препарата каталазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ::

К АВТОРСКОМУ СВИДНЕЛЬС7ВУ ((1! 5 .-)417 2!

) т ( (6l) Донов!нител(п(ое л авт. свил-ву (5l) M. Кл. (22) Заявлено 21,07.76 (21)2384104/2b-1 с присо динением заявки №

С 12 D 13/10 (23) Приоритет

Гасударственный номнтет

Совета в(иннстров СССР по делам изобретений и открытий (43) Опубликовано 25.02 78. Бюллетень ¹7 (53) УДК 577 15 В (-3 . 1. (088,8) (45) Дата опубликования описания,03.02.78 (72) Авторы изобрегеиия

М. Ф. Гулый, Р. Г. Дегтярь, Л. В. Гудкова, H. И. Мироненко, H. В. Латьцпко, A. H. Кривчун и В. Е. Кнонов

Институт биохилтии им. A. B. Палпадина Al- Украинской ССР и Косарский спиртокомбииат (71) Заявители. (54) C((ÎÑÎÁ Г(ОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО Г(РЕПАРАТА

КАТЛЛАЗЫ

Изобретение относится к технологии получения фермептиых препаратов, в частности катализы из микробиологического сырья, и может быть использовано в ферментиой прол1ышлеиности. 5

Известны способы получения катапазы из дорогого и дефицитного сырья ж!1вот1!Ого происхождения, например печени и эритроцитов крови (1), Однако катапаза, попученная из тканей (О животных, об падает узким Опт яму мам р l l действия, недостаточной TI..(iìîócòîé÷!fâîñòûa и невысокой устойчивостью к действию перек»си водорода и ряда де!и!ту(7и(зук7!1!!!х факторов, что о! раничивает ее промьпппенное»спопьзова7!!1е. ((звестен способ выдепеп»я катапазы из микроб»олог»ческого сырья, в f»(. I ffoctff из куп!.ту(7!пты!ОЙ жидкОсти йь(зе! Д1тг!7в f7igep, путем сорбц»» фермеffTA на !7с (!Ор!!пи(7ов!зн- «!!! .,ук цопц>опозу ир» рН 4,0-5,5 с поспедук

»и!и песорбцпей фосфпт !ым буфером с pll

8,0 2).

° +! !7 О1!!7сО!7 недо! "f ff f Очз!О 3(jgtf кт!!вен и це !!;»!!О. :.! !!РОл!ы!ш!е!ьчОГО !!pit;.Iñ и .. !1!Iя

Наибопее близким к предлагаемому изобретению по технической сущности является способ выделения очишенных ферментных препаратов катапазы из культуральной жидкости гр»ба (зеттгстсйттттт state

l7idopB . et Sinai, получаемой при глубинном выра:диван»и гриба по авт. свид. ¹ 353956(3).

Способ включает адсорбцию .катапазы на гепь-фосфате кальция, отдепение адсорбента с катапазой, выделение кат. !пазы эпюц»ей, осажден»е фермента спиртом и очистку преп:l(Iàòà д»апизом. Выход катапазы в !!реп!1рато составпяе r 70-80% от ее содержания в купьтурапьной жидкости.

Ка гапаза, полученная по этому способу, об!еаппет широким оптимумом рН действия, высокой термоустойчивостью, достато и!Ой устойч!!!!остыв к действито перекиси водорода и ряда денатурируюших факторов, а также llмеет высокук! !!Дельную активность: ((! at 460000 ).

llo при попучении фермента ио описанному способу п»цеп»й гриба является отходом

И(70!!ЗВОДСfBQ, п 7u I !ЗРЕЛfB УСТЛЧОВЛЕНО, гто B п(>оизводст!зеftffbfx успов»лx I!pl! глубин594172 раствором одноосновпого фосфорнокислого кап I5I» dc3TP M 3irlGQT Отделяют пентР ИСПУГ ИРО

Валяем и Осадок ГEÇ:III нрОмывают О, 3 А растВОРОМ. ОДНООСНОВНОГ0 КаЛИЯ.

f 1РО ..i линОЙ f) а створ) пр исОеди 1яют к эпюа ту. f!з понученного.раствора, Охлажденноо

ro до 2-4 С, катализу Осаждают полуторным объемом спирта, например, этилового (емпературой От -4 до -6 С или изопропилового при комнатной температуре.

Осадок отделяют центрифу-ированием, растворяют в воде и вторично переосаждают тем же спиртом, при тех же условиях. Затем осадок растворяют в воде, диализирукт против воды и al Icyll!ивают В вакууме. Выход каталазы в препарате составляет

70-75% от ее содержания в исходном раотворе, активность препаратов — 600010000 ед/мг.

БНИИПИ Заказ. 77 О/30 тираж 567 Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ном Выращивании Ретпс1И ып V

11епью изобретения является расширение сырьевой базы за счет использования В качестве сырья LIILLerrrra гриба Резис1И отп VktiPa, являющегося отходом производства.

Эта цепь достигается тем, что в способе получения очищенного фермептного препарата каталазы из гриоа Релтс Ы цто уйс се, предусматривающем адсорбцию катапазы на гель-фосфате кальция, Отделение геля с адсорбированной катапазой, элюирование катапазы одноосновным фосфорнокиспым калием, осаждение фермента спиртом с последующим диализом и сушкой, в качестве исходного сырья используют мицелий гриба

Penicitfium I/LteIEå, rIpII этом последний измельчают и из него экстрагируют фермент водой, а адсорбцию катапазы на гель-фосфате кальция осуществляют из экстракта при рН 6,8-7,2, причем перед элюированием гель с адсорбированной каталазой промывают водой с последующим отделением его от воды.

Способ получения очищенного ферментного препарата катапазы осуществляется следующим образом.

Мипепийгриба Pemck_#_ium Vftclfe Р1с1ар .

ЕЕ йби отделяют от купьтуральной жидкости, измепьчают и экстр агируют фермент водой, р Н экстракта равно 6,9-7,2. Экстракт отделяют и прибавляют к нему при перемешивании рав- 55 нь е объемы 0,5М растворов хлористого кальция и двухосновного фосфорнокиспого натрия в количестве, рассчитанном из содержания катапазы в растворе и сорбционной емкости образуемого геля. 40

Гель, образованный 1 мл 0,5 М раствора хлористого кальция и 1N 0,5М раствора двухосновного фосфорнокиспого натрия, адсорбирует из раствора 8000-9000 единиц катапазы. Это соответствует сорбции 45 на гель, образованный из 1 г хлористого кальция и эквимолярного количества фосфорнокиспого натрия, 80000 единиц катапазы.

Гель. с адсорбированной каталазой отделяют от раствора, промывают водой и 50 центр ифуг ируют.

ЗпЮируют каталазу rrprr интенсивном пе- ремешивании в течение 40-45 мин 1 И

Формула изобретения

Способ получения ферментного препарата катапазы Ila гриба Fenian..iCГтитп Vita& Rdopf.

et M@1, предусматрива1ощий адсорбцию каталазы на гель-фосфате кальцш1, отделение геля с адсорбированной каталазой, эпюиро- вание катапазы одноосновным фосфорнокиспым калием, осаждение фермента спиртом с последующим диапиоом и сушкой, о т и ич а ю шийся тем, что.,сцепьюрасширения сырьевой базы, в качестве исходного сырья используют мицепий гриба FerTLeif5ulTL

Vftale Р1ЫорР.et % а, при этом последний измельчают и из него экстрагируют фермент водой, а адсорбшио катализы на гель-фосфате кальция осуществляют из экстракта при рН 6,8-7,2, причем перед эпюированием гель с адсорбированной:катапазой промывают водой с последующим отделением его от.воды.

Источники информации, принятые во внимание щэи экспертизе:

l. H verTraTrn Я., $сп1 Ыет Н., Hermes. Н ., „ иле .иетпойе zur ьос1ег аф von kataNse сида р4дс1ет ЕеЬет ohne оттеас ипу отДал асйет Гоьил ьтти АеС,"2".. Physio . Che, 215, 229, 1961 . г

2 Авторское свидетельство СССР

% 410083, кл. С 07 Я 7/028, 1972.

3. Авторское свидетельство СССР

М 353956, кл. С 122 13/10, 1971.