Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов

Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧ ЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ .Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Изобретение относится к инактивации вирусов и, в частности, может бdiî ис ользовано для инактивации ви руса ящура при изготовлении противоящурных вакцин, Известны способы ингктивации «щура путем его обрабо-.ки химическими реагентами, например N-ацетилэтиленимином, N"ýòèëýòèëåíèìèíoì.

Известно, что N-эт.;лэтиленимин в концентрации 0,05 ь инактивирует вирус ящура типа О в культуральной жидкости (вирус репродуцирован в первич" ной культуре клеток почки телят) в течение 11 ч при 37 С и 52 ч пр;;

22 I. . В обоих случаях наблюдается ли" нейный спад инфекционности.

Однако N-ацетилэтиленимин является крайне нестабильным, а общими недостатками указанных препаратов являются труднодоступность и слабая инактивирующая активность, Цель изобретения — получение средства для инактивации вирусов, сбеспеЫ

А V

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМ;".TBO СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) (21) 1915956/15 (22) 07.05.73 (46) 07, 07,93. Бюл.. < 25

:.71) Всесоюзный иаучно-исследовательск и ящурный институт (72) Н.,А.Улупов, А,И,Дудников, П.А.Гембицкий i,g,С.Жук (56) Патент ФР " 1924303, 30 h 6, 1972.

Гембицкий П.А.. др, i: витез олигомеров этилениминов". Хин ческая промьвленность, 1972, Р, с, 30. (5.02),,,„50„„594771 А1 (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ИНАКТИВАЦИИ ВИРУСОВ

ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ ПРОТИВОВИРУСНЫХ Г" Е"

ПАРАТОВ ,.,7) Пр мене-.e ..-„, мега этит е:.янина дг. . нактивац.. вирусов при изготовлении противовирусных i репаратов. чивающего вы .о. ую и продолжительную иммуногенн< .ь изгото-;ляемых вакци.-: при эт..: и=я.>льзуемое длл нактив:ции вещество до.аппо быть техниче ки доступным и гос точно безопасным в обращении.

Это достигаетс применением димера этиленимина для инактивации вирусов при производстве противовирусных препаратов.

Димитр этиленимина получают при по" лимеризации этиленимина, Димер этиленимина характеризуется дотаточно высокой (по сраг ;ению с просте.;шими производными и гомологами этиленимина) температурой кипения (130 С) и обра"званием стабильного гидрата в в-.ейных растворах.

В связ, с этим, несмотря на сравнитель .: высокую токсичность в без водн..1 состоянии, связанную с прису- твием в молекуле этилениминого цикла, водные растворы димера малоопасны в обращении, 594771

15

И,С " 2 2 2

Н2С а — - = О.У26 25

20 ф

Составитель

Редактор Е.Нефедова Техред М.Моргентал Ко<»ектор О.Мандзич

Заказ 2830 Тира:н Под ное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям . открытиям при ГКНТ СССР

113035, Мссква, Ж-35, Раушская на ., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. уж род, ул, Гагарина, 101

Благодаря восприимчивости к нуклеофильным реагентам для нейтрализации димера этиленимина используют тиосульфат натрия. Нейтрализацией препарата после инактивации вируса достигается дополнительное повышение иммуногенности и увеличение срока годности вакцины.

Для инактивации берут 1"84-ный водный раствор димера этиленимина в количестве 1". об/об.

Инактивацию вируса ящура ведут в фосфатном буферном растворе при рН

7,4-7,6 и 25-26 С в течение 6-24 ч.

Остаток димера этиленимина нейтрализуют 24-ным раствором тиосульфата натрия из расчета 15 мл на литр суспенэии с доведением рН до 7,47,5 5 М раствором 11(:i, Пример, Димер этиленимина (С И Нщ), структурная формула

n — — - =, 4537 температур кипения

Г (130 С), растворяют в дистиллирован- 30 ной воде, сьсбодной ol уг.гекислого газа, до концентрации 2 . Водный раствор сохраняют в стеклянной, герметически зм.< :ыто<1 таре при 2-10 С,.

Пля п<р.-. от вления суспензии лжи" низи . о ia÷èoã, вируса используют ушкро." ь а; . ".ра«<в<ькеся н» более год: при -20 "С, Сус< ".<.эи.-. . -.-o вируса в фосфатном .;Фере ""- o»;;=: и

1:10 после очистки хлороформом дол».на иметь титр инфекционности не менее 10 мышиных ЛД 50 мл и быть активной в РСК в цельном виде на 4 креста и выше. Тушки крольчат раэма- лывают на коллоидной мельнице в смеси с 1/15 М фосфатным буферным раст" вором рН 7,3-7,4 в соотношении 1:10

I, и после 2 ч экстрагирования при

8 С в суспензию добавляют 5 об. ь хлороформа. Для тщательного перемешивания смесь пропускают через коллоидную мельницу и центрифугируют или сепарируют. Суспензия после очистки должна содержать не более 0,25 г/Й бело ка. Суспе <эию нгревают до 26 С и добавляют op . объемный раствора димера этиленимина. Продолжительо ность инактиваци; 24 ч при 26 С с периодическим перемешиванием, После инактивации в суспензию добавляют

2 М раствор тиосульфата натрия до концентрации 0,03 М (15 мл на литр суспензии). Полученный препарат охо лаждают до 4"8 С и используют для приготовления вакцины, Если рН суспензии после нейтрализации димер* поднимается выше 7,6 то в суспензию добавляют 5 М НС1 до получения рН суспензии, равной 7,5-7,6.

Для приготовления гидроокиси алюминиевой вакцины берут 63-мую ГОА, Разводят пополам дистиллированной водой, мелют на коллоидной мельнице, доводят рН до 7,4-7,6 20-ным раство" ром едкого натрия и стерилизуют, Рецепт составления вакцины следующий: к 700 мл суспензии добавляют 300 мл

ГОД, !00 мл глицерина и 5 мл 101-ного раствора сапонина. (1рименение димера этиленимин.-. по»

<аэывает, что скорость инактивац- вируса значительно выше в кравис с» скоростью инактиваци.-. оируса при пр<менении известных производных этиленимина.