Способ выращивания вируса

Способ выращивания вируса

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОЛИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Сомтсиих

Социал исти чесюа

Республик

> 595380 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 18.03.75 (21) 2114998/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 28.02.78. Бюллетень «¹ 8 (45) Дата опубликования описания 22.03.78 (51) M. Кл. С 12 К 9/00

Гасударстаанннй камнтат

Вааата Мнннстраа СССР ка данам ннюйратаннй н сткритнй (53) УДК 576.8.093.1 (088.8) (72) Авторы изобретения

А. А, Соминина, Г. Е. Юркова и И. А. Черенковская

Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ВИРУСА

200

2500

500

0,1

0,5

2,0

0,1

1,0

1,2

1,2

1,0

2,0

0,2

10,0

1,0

20,0

99

150

Изобретение относится к области медици ны, а именно к вирусологии.

Известен способ размножения вирусов в культуре клеток, заключающийся в том, что для выращивания вируса используют суспен- 6 зию клеток культуры, которую в свою очередь получают посредством непрерывного культивирования клеток (1).

Одна ко известный способ не обеспечив ает непрерывного получения вируса в повышен- 10 ной концентрации.

С целью непрерывного получения вируса в повышенной концентрации в процессе выращивания непрерывно добавляют неинфицированную клеточную культуру в логарифмичес- 1ь кой фазе роста в концентрации 0,8—

1,2 млн/мл и одновременно отбирают 0,3—

0,7 объема вирусной суспензии в сутки.

Способ осуществляют следующим обр азом. 2О

Пример. В ферментере размножают клетки Неlа в объеме 600 мл до концентрации

550 тыс. жизнеспособных клеток в 1 мл при температуре 37 С и скорости вращения мешалки от 200 до 300 об/мин. Для размноже- 25 ния клеток используют среду Бирча следующего состава:

Соли, мг/л:

NaCI 5900

КСI 400 . з0

MgCI бН20

ИаНСОз

NaHqPO4 2Н О

CaCI 2Н О

MnCl2 4Н О

ZnSO4 7Н О

FeSO4 7Н О

CuSO4 5НгО

Витамины, мг/л:

i-Инозитол

d-Биотин

Фолиевая кислота

Никотин амид

Пантотенат Са

Пиридоксин гидрохлорид

Тиамин гидрохлорид

Рибофлавин

Гипоксантин

Вд

Холин хлорид

Аминокислоты, мг/л:

1-Аргинин НСI

1-Изолейцин

1-Лейцин

1-Гистидин НСI

1-Лизин HCI

1-Метионин

1-Фенилаланин

1-Треонин

1-Валин

595380

Составитель С. Малютина

Техред Л. Гладкова Корректоры: T. Добровольская и Л. Брахнина

Редактор М. Дмитриева

Изд. ¹ 270 Тираж 568

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР.по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Заказ 816

МОТ, Загорский филиал

1-Алании 90

1-Глицин 15

1-Сериен 20

1-Триптофан 20

1-Цистин 75

1-Тирозин 70

1-Глютамин 100

1-Глютамин Na 1530

Дополнительные компоненты, мг/л:

Глюкоза 2000

Феноловый красный 10

Среду Бирча обогащают 1% сыворотки эмбриона коровы, свободной от антител и ингибиторов к вирусу парагриппа 3 типа. Клетки заражают путем внесения 5 мл вируса парагриппа 3 серотипа (штамм у 2932), имеющего инфекционный титр 10 ТИДзо/мл (множественность инфекции 1 ТИДзо нз 60000 клеток) .

Через 7 суток культивирования, когда содержание инфекционного вируса в культуральной жидкости составляет 7,5 Ig/0,5 мл, содержание гемагглютининов 1:8 и процент зараженных клеток 51% при снижении жизнеопособности популяции до 30%, подключают перфузионную связь с хемостатом. К этому моменту концентрация жизнеспособных клеток в хемостате составляет 960 тыс/мл, объем равен 500 мл. Для размножения клеток,в хемостате используют среду Бирча с

2% сыворотки эмбриона коровы. Резервуар подачи среды содержит среду Бирча с 1% сыворотки эмбриона коровы. Скорость подачи среды, осуществляемая при помощи перистальтических насосов по линии в хемостат, составляет 240 — 360 мл/сутки при температуре 4С.

Через сутки содержание жизнеспособных клеток в ферментере увеличивается до 55%, 4 концентрация инфекционного вируса возрастает в 10 раз.

В течение последующих 8 суток концентрация клеток в хемостате колеблется от 0,8 до 1,2 млн/мл, содержание инфекционного вируса в вирусном ферментере.составляет от

7,45 до 9,5 Ig ТИДзо/мл, титры гемагглютининов от 1:8 до 1:16, процент жизнеспособных клеток от 40 до 65%, а содержание клеток, 10 поддерживающих репродукцию вируса (с положительной гемадсорбцией), колеблется от

56 до 90%.

Использование предлагаемого способа обеспечивает возможность непрерывного по15 лучения вирусной биомассы, а также повышение концентрации инфекционного вируса в

100 раз по сравнению с результатами, получаемыми при суспензионном культивировании.

Формула изобретения

Способ выращивания вируса, например па25 рагриппозного, в культуре клеток, о т л и ч а ющийся тем, что, с целью непрерывного получения вируса,в повышенной концентрации, в процессе выращивания непрерывно добавляют неинфицированную клеточную культуру

3О в логарифмической фазе роста в концентрации 0,8 — 1,2 млн/мл и одновременно отбирают 0,3 — 0,7 объема вирусной суспензии в сутки.

35 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Сергеев А. Размножение вирусов животных в культуре ткани. М., 1966, с. 230.