Питательная среда для учета спор и вегетативных клеток маслянокислых бактерий в молоке и сырах

Питательная среда для учета спор и вегетативных клеток маслянокислых бактерий в молоке и сырах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социапистических

Респубпик (вв) 596618 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 100576 (21) 2359078/28-13 с присоединением заявки И (23) Приоритет (43) Опубликовано 05,03,78.Бюллетень М 9 (45) Дата опубликования описания 14.о278

2 (Sв) М. Кл.

С 12 К 1/06

Гаовдвратвенный комитат

Совета Миииотрав СССР ва .делам изобретений и открытий (53) УДК 663. 1 (088.8) (72) Авторы изобретения

А.В,Гудков и Г.Д.Перфильев (7й) заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт маслодельной и сыродельной промышленности (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УЧЕТА СПОР И ВЕГЕТАТИВНЫХ

КЛЕТОК МАСЛЯНОКИСЛЫХ БАКТЕРИИ В МОЛОКЕ И СЫРАХ

Изобретение относится к молочной промышленности и предназначено для учета маслянокислых бактерий в молочных продуктах.

Известна питательная среда для выявления спор маслянокислых бактерий содержащая следующие компоненты (в вес.%): 0 5 глюкозы, 0 5 ацетата натрия, 2 дрожжевого автолизата, 0,1 растворимого крахмала, 0,05 цистеина, 1,5 агара, гидролизованного молока до IOO t1).

Селективность данной среды достигается путем ее тепловой обработки после посева при 80 С в течение 10-15 мин.I6

Недостатком данной среды является невозможность обнаружения вегетативных клеток маслянокислых бактерий в молоке и сырах, так как при вышеуказанной тепловой обработке все вегета20 тивные клетки погибают °

Цель изобретения — разработка состава селективной питательной среды для количества учета спор и клеток маслянокислых бактерий в молоке и сыре.

Поставленная цель достигается тем, что в состав питательной среды дополнительно введены мясо-пептонный бульон, лактат кальция, агар, бура, хлор. зо ное (1Ц ) железо и гидрокарбонат натрия, рН среды 5,7, а в качестве индикатора среда содержит 1 мл 0,4%-ного водного раствора нейтральрота.

Пример приготовления. среды. К

1000 мл мясо-пептонного бульона при комнатной температуре добавляют 5 г лактата кальция, 5 r ацетата натрия, 0,8 г солянокислого цистеина и 20 r агара. Смесь нагревают до 95 С, выдерживают до расплавления агара и при постоянном перемешивании добавляют

10 мл 0,01%-ного На B O . 10 Н О, 10 мл 0,01%-ного раствора хлорйого железа (III ), 10 мл 1%-ного раствора гипрокарбоната натрия и 1 мл 0,4%-ного водного раствора нейтральрот. С помощью молочной кислоты устанавливают рН на уровне 5,7 0,05. Приготовленную таким образом среду разливают в пробирки по 10 мл, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 112 С в течение 30 мин.

Пров ка этой среды на чистых

Культу,ах микроорганизмов, представляющих интерес для сыра, показала следующее: маслянокислые бактерии (Св.1угоЬ uk

rheum,Cf.роьЫи (огтцпт, СС. Ьп(ум<со)тт) растут в этой среде йочтн также хоро596618

Молоко сырое 177,5

60

177,5

177,5

Сыр B ВОЗРВс те 5 суток

18,4

2319

60

18,4

15 суток

35 суток

250

141ю5

1.4150

180625

2500

60 шо, как и в оптимальных средах, например СДА, с разрывом столбика агара, изменением цвета среды с красного до соломенно-желтого, иногда образуя черное кольцо в слое водного агара;

6 протеолитические виды споровых анаэробов (CP. ep o eloge пеь ) дают слабый рост газообраэования и изменения цвета индикатора, но с образованием чер% його кольца в водном агаре; }О молочнокислые стрептококки закваски на среде не растуту молочнокислые палочки вида Lacfobac1в (и vier pea пta rue дают слабый рост иа среде без газообразования, измене- )5 ния цвета индикатора и без появления черного кольца в слое водного агара; кишечная палочка дает слабый рост в верхней части среды беэ газообразования и изменения цвета среды, иногда щ образуя черное кольцо; молочнокислые бактерии, кишечная аалочка, протеолитические виды спорьвых анаэробов при посеве в среду совместно с маслянокислыми бактериями рос-® ту и выявлению последних не мешают.

Стерильная среда может храниться беэ изменения своих свойств при комнатной температуре в течение 20-30 дней. Она имеет равномерную пурпурнокрасную окраску.

Перед проведением анализа среду кипятили на водяной бане в течение

20 мин для удаления растворенного в .среде кислорода.

Пример применения среды. При анализе,сыра 1 г его растирали в стерильной ступке в асептических условиях и смешивали с 10 мп стерильной водопроводной воды или 2%-ного раствора ацетата натрия, нагретого до 40 С. Иэ 40 полученного первого разведения (0,j г/мл) готовили обычным способом ряд последующих десятикратных разведений.

Каждое разведение засевают по 1 мл в 2-5 параллельных пробирках с расплавленной .и охлажденной до 45 С питательной средой.

При исследовании молока в пробирки с расплавленной и охлажденной до

45 С средой заливают 1,0; 0,1 и 0,01 мл молока.

При определении общего количества спор и вегетативных клеток маслянокислых бактерий тепловой обработки разведений сыра и молока не проводят °

При определении только спор разведения прогревают перед посевом при 80 С о в течение 15 мин.

Посевы инкубируют при 37 С в течение 3 дней. По истечении этого срока в пробирках фиксируют газообраэование (по разрыву столбика агара) и изменение окраски индикатора до желтого цвета, что свидетельствует о росте в среде маслянокислых бактерий.

Количество клеток, содержащихся в

1 r исследуемого продукта, было подсчитано по таблице Мак-Креди общепринятым методом.

Иэ приведенных результатов.видно, что количество спор маслянокислых бактерий, определенных в СДА и рекомендуемой среде МПЛА, одинаково. Однако количество спор этих видов не характеризует интенсивность маслянокислого брожения в сыре.

Ъ

Содержание спор и вегетативных клеток маслянокислых бактерий в молоке и выработанном из него сыре, определенное принятым (СДА) и рекомендуемым (МПЛА) методами, приведено в таб" лице.

596618

Мясо-пептонный бульон

91,0-93, 0

Дрожжевой автолизат

3,0-5,0

1,5-2,0

Агар

Лактат кальция

0 5-1,0

Ацетат натрия

Солянокислый цистеин

О, 5-1,0

0,05-0,1

0,0001-0 0002

Бура

Хлорное (Ш ) железо

0001 0 0002

Составитель И.Привалова

Техред:E.äàâèä .ич Корректор!С.Гарасиняк

Редактор О.Иванова

Заказ 1037/29 Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Иэ результатов учета спор и вегетативных клеток маслянокислых бактерий по предлагаемому методу (по принятому методу их количество определилить невозможно) следует, что в сырах первой выработки маслянокислые бактерии интенсивно размножались. В

35-суточном возрасте их было в первом сыре в 72 раза больше, чем во втором, тогда как количество спор в первом сыре в этом возрасте было примерно в

4 раза меньше, чем во втором сыре °

Максимальное количество вегетативных клеток маслянокислых бактерий в первом сыре достаточно для того,,чтобы вызвать его порчу, в то время как во втором сыре они развиваются настолько медленно, что не смогут вызвать изменения его вкуса.

Формула изобретения 0

1. Питательная среда для учета спор и вегетативных клеток маслянокислых бактерий в молоке и сырах, содержащая дрожжевой автолизат, ацетат . натрия и солянокислый цистеин, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью стимуляции роста маслянокислых бактерий, она дополнительно содержит мясопептонный бульон, лактат кальция, агар, буру, хлорное (Ш ) железо и гидрокарбонат натрия при следующем соотношении ингредиентов, Ъ по весу:

Гидрокарбонат натрия 0,01-0,02

2. Среда по п.1, о т л и ч а щ щ а я с я тем, что, с целью подавления развития протеолитических бактерий,:среда имеет рН 5,7+0,5.

3. Среда по п ° 1, о т 2 и ч а ю— щ а я с я тем, что, с целью индикации развития маслянокислых бактерий, среда содержит 1 мл.0,4Ъ-ного водного раствора нейтральрота.

Источники информации, принятые во внимание при .экспертизе:

1. Гудков A. Определение количества споровых анаэробов молочных про- дуктов . — Молочная промышленность

1966, 9 11, с. 18.