Способ определения силы адгезии клеток

Способ определения силы адгезии клеток

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (1 596865 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 30.06.76 (21) 2378501/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 05.03.78. Бюллетень № 9 (45) Дата опубликования описания(1<,02., М. (51) М. Кл.

G. 01 Я 19/04

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (53) УДК612,014 (088,8) (72) Авторы изобретения A Г. Маленков, A. Г. Меликянц и А, М, Меликян (71) Заявитель НаУчнс исследовательский инститУт по биологическим испытаниям химических соединений (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИЛЫ АДГЕЗИИ КЛЕТОК!

Изобретение относится к области биолопш и медицины и может быть использовано для из у !ения адгези и клеток в тка невы х системах.

Известен способ определения силы адгезии клеток путем фиксации клеток с последуюшим их отрывоvl под действием центробежной силы и вычисления величины силы адгезии по числу отделившихся клеток (().

Однако известным способом невозможно определить силу адгезии клеток в животной ткани.

Цель изобретения — определение силы адгезии в животной ткани при мини»альной степени повреждения клеток.

Эта цель достигается тем, что образец ткани фиксируют на плоскости. помешают ее в центр ооъема с изогонической жидкостью параллельно оси врашения и приводят во врашательное движение одновременно плоскость с образцом и сосуд с изотоническои жидкостью.

Предлагаемый способ осуществляют следуюшим образом. Образец ткани, выделенный из животного, фиксируют на плоскости и помегцают в центр объема с изотонической жидкостью, после чего всю систему одновременно (или нсподвижно закрепленный на плоскости образец) приводят во вра1цательное движение.

Врашение всей системы (иг!и образпа1 осуществляют с помощью электродвигат«!я. При это» варианты закрепления образца на плоскости могут быть различны в зависимости от его геометрии. Напри»ср. цилиндрическим стержнем можно закрспить тонкую кишку, толстую кишку или пищевод.

Адгезию оценив«нот по «бсо.1к1тно!! и относ!!тельной вел!«чин«» «:ëãåçIIH.

Абсолютная величина адгсзии ч11слен1«о рав1 на тому усил no (à — ",. -- 1. при котором клетки то. It>KO начинают ЙыдЕЛЯ ГЬСЯ Н3 тк11 попой системы.

Относительную величину адгезии мож1го опс нивать по числу клеток, выд«1Я1оiцихся lip! I фиксИРОВ«ННОХ! i ИЛИИ. F= COnst. (И«IO К.lегок в суспензии можно оценивать, например с помошью камеры Горяева. Способ обладаег высокой чувствительностью. Ошибка измерений составляет 5 — t5%. Предлагаемый способ- позволяет производить отрыв клеток от тк«нll B очень мягких ус1овиях, npII »ини !а;!ьно!! степени повреждения самих клеток.

Изобретение поясняется «!еду!ошиз!и nt»iMep«ХШ.

При«1ер 1. Опенка величины адгезии клеток > тонкои кишки кры«

596865

2

5

53

51

52

53

5l

7

5

7

Таблица 2

Количество клеток, выделившихся после инкубации ткани

Время инкубации, мин в среде, содержащей в среде, содержашей кальций ЭДТЛ

22

23

0

Для опыта берут белых беспородных крыссамцов весом 120 — 150 г. Вскрывают брюшную полость, выворачивают участок тонкой кишки длиной 1 см и фиксируют. этот участок на цилиндрическом стержне, погруженном в стаканчик с нзотоническим раствором. Цилиндрический стержень вместе со стаканчиком и раствором приводят во врашательное движение в течение определенного времени и затем подсчитывают число клеток, выделившихся в раствор при данном усилии с помошью микроскопа.

Клетки начинают выделяться при усилии, равном 0,1 10 4 дин/см . Эта величина почти в

5 раз меньше средней величины сцепленности для паренхиматозных клеток печени крыс. Так как величина сцепленности клеток тонкой кишки неодинакова по высоте кишечных складок, и первыми должны выделяться слушиваюшиеся клетки, полученные результаты полностью согласук>тся с имеющимися представлениями о природе сил адгезии.

Пример 2. Влияние рН на адгезию клеток 2о тонкой кишки крыс.

Образцы тонкой кишки, приготовленные аналогичным образом, подвергают предварительной одноминутной инкубации в изотонической среде с различными рН. Затем производят отрыв клеток способом, указанным в примере 1, при фиксированном усилии.

Резулы.аты проведенного эксперимента сведены в табл. 1.

Таблица

Число выделившихся клеток при рН п/и 3 7,4

В таблицу занесены значения количества gp клеток, найденных по всей площади камеры

Горяева.

Ошибка метода не превышает 10%. Полученные результаты показывают, что ЭДТЛ ослабляет адгезию клеток друг с другом. Предлагаемый способ отличается простотой, экономичностью, возможностью быстрого осуществления и болы.;:ой точностью измерения. Он

t озволяет оценить ".илу адгезии клеток в животных тканях,,: может быть применен в медицинской практике и в области биологии.

Способ может быть также использован при

В таблицу занесены количества клеток, подсчитанные по всей площади камеры Горяева. Полученные данные показывают высокую чувствительность предлагаемого способа к би- огенным факторам. Ошибка метода составляет 5 — 15%.

Пример 3. Оценка адгезии клеток тонкой кишки крыс.

Лдгезия клеток в тканях в значительной степени зависит от содержания ионов кальция в межклеточной среде, поэтому для испытания способа был поставлен опыт по исследованию влияния хелатного агента этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТЛ) на адгезию клеток тонкой кишки крыс. Известно, что ЭДТЛ связывает двухвалентные ионы, особенно кальций.

Сначала промывают и выворачивают участок тонкой кишки крыс, затем делят этот участок на две разные части и помещают первую часть в среду, содержашую ионы кальция, а вторую часть — в среду, содержашую ЭДТЛ.

После инкубации в указанных средах образцы тканей фиксируют в заданном положении на плоскости.

Для фиксации, образца применяют тонкий цилиндрический стержень, который вставляют внутрь отрезка тонкой кишки. При этом клетки располагаются на его цилиндрической поверхности. Затем цилиндрический стержень вместе с образцом приводят во врашательное движение с заданной скоростью внутри объема с неподвижной жидкостью. при этом с поверхности образца отделяются клетки.

Оценку адгезии производят по величине, обратной числу выделившихся в объем клеток, подсчитывая количество клеток в объеме с помошью камеры Горяева.

Результаты проведенного эксперимента сведены в табл. 2. оценке вида биологической активности химических соединений.

Формула изобретения

Способ определения силы адгезии клеток путем фиксации клеток с последуюгцим их отрывом под действием центробежной силы и вычисления величины силы адгезии по числу отделившихся клеток, отличающийся тем, что, с целью определения силы адгезии в животной ткани при минимальной степени повреждения клеток, образец ткани фиксируют на плоскости, помешают ее в центр объема с изотонической

596865

Составитель С. Малютина

Техред О. Луговая Корректор H. Тупица

Тираж 1112 Подписное

Редактор H. Лрванцева

Заказ 1128/42

Ш1ИИПИ Государственного комнтета Совета Министров СССР по делам изобретений н открьпнй! 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4(5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 жидкостью параллельно оси вращения и приводят во вращение или одновременно вращают плоскость с образцом и сосуд с изотонической жидкостью.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Ехрог. Call research, !960, № l9, с. 539—

548.