Способ получения ферментного препарата содержащего -1,3 и - 1,6 глюканазу

Способ получения ферментного препарата содержащего -1,3 и - 1,6 глюканазу

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

!

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДВПЛЬСТВУ

4:оюз Свветскин

Сввциалистических республик (11) 598933 (61) Дополнительное к авт. свил-ву— (22) Заявлено 29.06.76 (21) 2378380/28-13 (51) М. Кл С 12 О 13/10 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.03.78. Бюллетень №11 (45) Дата опубликования описания 10.03.78

Гвщдврставнний ииапвт

Свевта Ма@стран СССР пв диан нэвбрвтвннй н втнрктнй (53) УДК 577.15.663..1 (088.8) (72} Авторы изобретения

Н. А. Тиунова, И. В. Зайкнна, Н. Я. Кобэева н Н, А. Родионова (7! ) Заявитель

Ордена Ленина Институт биохимии им, А. Н. Баха (S4) СГЮСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО

P — 1,3 И P — 1,6 = ГЛЮКАНАЗУ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству ферментов микробного происхождения и р 1,3 и Р 1,6 глюканаэ, которые могут быть использованы для расщепления глюканов в клеточной стенке дрожжей.

Известен способ получения P — гнюканаз путем глубинного выращивания Al- Ь otjgctei sp.ÀÒCÑM

021712 на питательной среде, содержащей источник углерода, азо-.а, необходимые минеральные соли . с последующим выделением продукта (1j .. !О

Однако при получении препарата известным способом выход P.r òþêàíàç невысок и расщепление дрожжевого глюкана лри их действии происходит не полностью до глюкозы. В качестве источника ут. лерода используют дорогостоящее и дефицитное 1." сырье — пекарские дрожжи.

Целью изобретения является повышение выхода и удешевление технологии получения, р- 1,3 и Р. 1,6- глюканаз.

Для этого согласно прещигаемому способу в качестве продуцента используют гриб вида,Geotiichutn сапйдов а в качестве исто пп ка углерода, азота, фосфора используют соответственно свекловичный жом и пшеничные отруби, азотнокислый натрий 25 и сернокислый аммоний и фосфорнокислый калйй однозамещенный .

При этом на 1 л питательной среды используют

10 — 20 г свекловичного жома, 10 — 50 г пшеничных отрубей; 0,5 — 3,0 г NaNOq, 0,1 — 1,5 г MgSO4 <7 Н О;

0,5 — 3,0 r (NH4) 2804 ° 0,5 — 5,0 г IG4PO4

Свекловичный жом и пшеничные отруби дешевле пекарских дрожжей (стоимость 1 кг пекарских дрожжей 0,5 руб., а 1 кг свекловичного жома и пшеничных отрубей 0,06 руб.

При этом используют в качестве продуцента

9eode сАи.rn can8jdum штамм 3 с.

Получаемый фермент стабилен при хранении и расщепляет как дрожжевой глюкан, так и другие

p - глюканъ|, состоящие из клюкозных остатков, соеди ненных. P - 1,3 и P - 1,6 - связями, почти полностью цо глюкозы.

Питательную среду стерилизуют. известным способом, охлаждают и засевают 1 — 2 суточной культурой микроорганизма — продуцента p - глюканаэ, проводят ферментацию в течение 50 — 70 ч и выделяют фермент путем осаждения спиртом или ацетоном из фильтрата культуральной жидкости. Ферментный препарат может быть получен путем высушивания фильтрата культуральной жидкости на распылительной сушилке.

598933

Осаждение спиртом

601

302

Сушка распылением

7216

507

392

224

П р. и м е р. Готовят 3 м среды следующего состава:

Свекловичный жом 2,00

Пшеничные отруби 2,00 йайОз 1,50

5 (йн4) э 804 1,50

KH2 РО4 0,10

MgS04 7НзО 0,05

Стерилизуют общепринятым способом. Засевают

Зл глубинной культуры 6ео1 Ichuln celndlduIII Ьс I0 двухсуточного возраста, выращенной на среде того же состава.

Гриб культивируют в фермеитере при 28-32 С в течение 60 ч при аэрации (g мз на 1 м среды и при перемешивании со скоростью мешалки 100 об/мин рН среды после стерилизации 5,4 — 5,6.

В препарате, полученном на распылительной су30 шилке (целлокандин Г-Зх), содержится ho»lee 7 тыс. ед/г P — 1,3 — г»поканазьг, à g — 1,6 — глюканазы— более 200 ед. Спиртоосажденный препарат (целлокандин à — 10х) содержит этих ферментов на 35 — 40% больше.

Определение активности. К 5 мг субстрата (ламинарану, дрожжевому глюкану, препарату клеточных стенок дрожжей S. c e e ч- I s ol e или пустулану) в 0,5 мл ацетатного буфера рН 5,0, 0,1 М, добав40 ляют 0,5 мл разбавленного раствора фермента. Смесь инкубируют в течение 1 ч при 40 С. Образовавшиеся сахара определяют по методу Сомоги — Нельсона. Из полученных результатов вычитают t количество вос станавливающих сахаров, содержащихся в качестве пря45 меси в ферментном препарате, а также в субстрате..

Активность глюканаз выражена в мг глюкаэы, которая образуется при действии 1 г ферментного препарата на субстрат в течение 1 ч при 40 С в стационарных условиях.

Культурально-морфологическая характеристика штамма Geatl icbuIII cani3iduIII 3 с на 10-е сутки;

На синтетической среде Чапека с сахароэой н йайОз — колонии диаметром 25 — 30 мм с ровным краем, радиально-складчатые. 803 IIIHbDI мицелий IIopo- 5 шнстый, скудный, прижатый, белый. Обратная сторона колонии желтоватая, пигмента нет.

На сусло-агаре (сусло 5 по Банлингу) колонии диаметром 35 мы с глубокими радиальными складК8МН, с poBHbIM Kp30M, слегка вдавленным В агар, @» слабо зональные.

Полученную культуру сепарируют для отделения клеток микроорганизма, и ферменты осаждают из центрифугата культуральной жидкости при добавлении трех обьемов спирта или двух обьемов ацетона. Отделенный фильтрованием осадок ферментов высушивают на воздухе.

Активный ферментный препарат получают также путем высушивания фильтрата культуральной жидкости на распылительной сушилке, В таблице даны результаты определения активности р-1,3 и Р.1,6- глюканаз в препаратах, полученных двумя различными способами, нри действии на ламинаран (P - 1,3- глюкан), дрожжевой глюкан, на препарат клеточных стенок дрожжей и на пустулан (P1,6 - глюкан); данные рассчитаны на 1 г препарата.

Воздушный мицелий белый, тяжестый, шерстистый. Обратная сторона колонии желтовато-бурая, пигмента нет. В центре колонии — крупные капли желтовато-коричневого эксудата.

Предложенный способ но сравнению с известным обеспечивает:

1. Повышение выхода целевых ферментов за.счет использования гриба Qe сф I- ic 6 ц,ш со?141дмтп и использования среды с жомом и пшеничными отрубями, взятыми в качестве источника углерода.

2. Удешевление среды за счет использования жома и отрубей вместо пекарских дрожжей.

3. Получение высокостабильных ферментов, которые не теряют активности при хранении в течение трех и более лет.

4, Получение ферментов, которые расщепляют дрожжевой глюкан полностью до глюкозы. о

Препарат может быть применен также для получения глюкозы из ламинарана, постулана и из клеточных стенок дрожжей.

Препарат можно применять в качестве добавки (премикса) в корм скоту, птице и свиньям для лучшего усвоения дрожжей (БВК), так как неусваиваемого дрожжевого глюкана в них содержится до 10 o.

Формула изобретения

Способ получения ферментного препарата, содержащего Р- 1,3- и Р 1 6 - глюканазу,предусматривающий культивирование продуцента ферментов на питательной среде, содержащей источник углерода,азота,фосфораи магний, отличающийся

598933

Составитель T. Деребренникова

ТехРед 3. Фанта Корректор С В)екмар

Редактор В. Яибобес

Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретени» н открытн»

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб„ 5

Заказ 1344/21

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, уп. Проектная, 4 тем, что с целью повышения выхода целевых ферментов, в качестве продуцента используют грибы вида 6 вот,р1с1ютп ссптдтдцвга в качестве источников углерода, азота, фосфора используют соответственносвекловичный жом и пшеничные отруби, азотнокислый натрий и сернокислый аммоний и фосфорнокислый калий одноэамещенный.

2.Способпоп.1, отличающийся тем, что на ) л питательной среды используют 10-20 г свекловичного жома; 10 — 50 г пшеничных отрубей, 6

0,5 — 3 r NaNO3, 0,5 — 3,0 r (NH ): SO; о.5 с,ц нНгР 34 0,1 — 1,5 г Мд804 7 НзО.

З.Способпоп. l, отличающийся том, %To H3 грибов Bldg Ci4otl тсЬопт condidum- используют штамм 3 с.

Источники информации, принятые во внимание прн экспертизе:

l. Патент Великобритании И 1370346, кл. С ЗН.