Способ получения смеси -аминокислот

Способ получения смеси -аминокислот

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

, ьоо и

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Респтблии (61) Дополнитсльиос и авт. спид-ву (22) Заявлено 15.11.76 (21) 2420789/28-13 с присоединением заявки № (23) Г1риоритет (43) Опубликовано 30.03.78. Бюллетень ¹ 12 (45) Дата опубликования описания 28.03.78 (51) М. Кл.- "С 120 13106

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (53) УДК 668.394,(088.8) (72) Авторы изобретения

Л. С. Слободяникова, М. И. Фастовская, В. М. Беликов и В. К. Латов (71) Заявитель Ордена Ленина институт элементоорганических соединений АН СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СМЕСИ 1-АМИНОКИСЛОТ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения биологически ценных вешсств— смеси 1 -аминокислот, нс содержащей пептидов, предназначенной для использования в пищевой промышленности, медицине, сельском хозяйстве.

Псптиды в ряде случаев являются нежелательными примесями. В препаратах, прсдназиачсниых для парснтсрального питания, оии

ЯВляются исто|!Инком токси|!ности. Igpoxlc ТоГО, IIcl(OTopbIc т!Сптиды яВляlотся исто IHIIKoM горького вкуса в гидролизатàx белков, упоT рсблясмых и пищевой промышленности. Ha7IIчис пептидов также нежелательно в средах, применяемых для выращивания вирусов и культур тканей.

Известен фсрмснтативный гидролиз белков, IIo которому гидролиз протекает нс полностью и в результате ооразуется смесь аминокислот и пептидов.

Для снижения содержания пептидов, в особенности высших, применяют очистку гидролизатов на ионообменных смолах или проводят многоступенчатый (кислый и ферментативный) гидролиз смесью ферментов.

Наиболее близким к изобретению по своей технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения смеси аминокислот, согласно которому гидролиз осуществляют иммобилизованными протеазами.

Недостатком этого способа является невысокая степень гидролиза (80 — 90% ).

Цель изооретения — получение смеси 1 -аминокислот, не содержащей пептидов, предназначенной для применения в пищевой промышленности в качествс вк совых и питательных добавок к различным пищевым продуктам, в м III(pOOIIO.BOI IIHCCI(OII II В мсд1!Цинс, а Также увеличение выхода готового продукта.

Это достигается Tcм, что гидролиз осуществляют фсрмснтным прспаратом «Протосубтилин Г15Х», выделенным из Bacillus subtilis, иммÎбилизованном на органическом носите;IL — сополимсрс стирола и малеинового ангидрида или на неорганическом носитслс— силохроме.

Особенностью данного процесса является то.

ЧТО TIp II Г ! 3p 0.1 H3 C ОСл 1(О В ОГО Г! 3 p O, I I!3 a I I Cпользуется комплексный фермснтный прспа20 рат, производимый в промышленном масштабе. Используемыс для иммобилизации носители (сополимср стирола и малеинового ангидрида, силохром) также легко доступны, дешевы и производятся в нашей промышлен2> ности. Процес иммобилизации нетрудоемкий и легко может быть осуществлен в промышленности. Процесс п!дролиза пептидов, содержащихся в белковых п!дролизатах, может Осушpcтвлятhся !(ак В динамическом, 30 так и в статическом, режимах, причем проведение гидролиза иммобилизованным прс600!74

25

1о

G.1

Изд. М 314

Тираж 568

Подписное

Заказ 264/13

Сапунова, 2

Типография, пр, паратом позво ÿåò многократно использовать фсрмснт. Так как гидролиз ведут только с помощью одного комплек ного фермснтного препарата, то в отличие от известных способов, где используют при гидролизе последовательно ряд ферментных препаратов, процесс

1ч1дролиза пептидов значительно упрощается и удсшсвляется, Прн этом достигается глубина гидролиза 98w2%.

Благодаря указанным особенностям предлагаемый способ позволяет просто ii дешево получать смеси 1 -аминокислот, нс содержащую псптиды.

П р и м с р 1 (динамический). В термостатированные (25 С) колонки (10+35 мм) помещают 100 мг иммобилизованного ферментного прспарата в 20 мл 0,25 М фосфатном буфере рН 7,4. Уравновешивают фосфатным буфером, а затем пропускают 100 мл 1 -ного раствора смеси аминокислот (75%) и пептидов (25 /о ), выделенных из автолизатов пекарских дрожжей (аутолизин) в том же буфере со скоростью 15 — 20 мл/ч, и следят за нарастанием аминного азота по 2, 4, 6-тринитробензосульфокислоте, Теоретическое возрастание аминного азота при полном гидролизс пептидов рассчитывают как отношение содержания общего азота к аминному, взятое для гидролиза смеси аминокислот и пептидов.

В рез„L-аминокислот с содержанием последних 98+-2%.

Г1осле проведения гидролиза колонку. промывают 0,25 M фосфатным буфером и заполняют тем же буфе1зом. Многократное использование (до 10 раз) ферментного препарата не снижает способность его гидролизовать псптиды в белковых гидролизатах. В качестве фсрментного прспарата используют бактериальный комплексный ферментный препарат, выделенный из Bacillus subtilis штамм 103, иммобилизованный на разных носителях.

Иммобилизация ферментного препарата. а) В смеси 1,5 г гидролизованного сополнмсра стирола и малсинового ангидрида в

70 мл 0,25 М фосфатного буфера рН 7,4 растворяют 1,5 г ферментного препарата «Протосубтилин Г15Х» при комнатной температуре.

Затем образовавшийся ферментполимсрпый комплекс разделяют на три части и добавляют такое количество СгСlа в воде, чтобы получить металлсодсржа1цие ферментполимерныс комплекты (МФПК) с молярным соотношением Сг+ к элементарному звену сополнмсра как 1: 25; 1: 75 и 1: 100. Полученные таким образом МФПК тщательно промывают дистиллированной водой, затем ацетоном и высушивают в вакууме при комнатной температуре. Получают 0 6 — 1 г МПФК с выходом протеолитической активности 15 — 60%. б) В качестве носителя используют силохром с диаметром пор — 600А.

Получают иммобилизованный препарат в количестве 0,5 г, выход по активности составляет 0,2 — 0,5%. в) 0,2 г аминоалкилсилохрома с диаметром пор — 600Л выдержива1от в водном насыщенном растворе Сг+з при температуре 100 С в течение 24 I, затем образец высушивают.

1I bI c ) u1 с и н о м у о 0 p a 3 u I

0,25 М фосфатного буфера рН 7,4 выдсрж 1вают 30 мин и потом добавляют 0,05 г «Протосубтилина Г15Х» в 23 мл 2%-ного гидролнзованного сополимера стирола и малеиново1о ангидрида, медленно перемешивают на ма,,нитной мешалке в течение 2 — 3 ч. Полученный препарат промьвают холодной ди"тиллированной водой, этиловым спиртом и «ысушнвают в вакуумном шкафу при комнатной температуре. Получают 0,3 r иммобилизo«akIного препарата с выходом протсолитической аКТНВНОСТН 0,1 — 0,2%.

Пример 2 (статический). В термостатированный стакан (25 С) с постоянным персмешиванием загружают 100 мг иммобилизованного ферментного препарата «Протосубтнлин Г15Х» в 20 мл 0,25 М фосфатного буфера рН 7,4. Затем добавляют 20 мл 2%-ного раствора аутолизина и с интсрвалом в 1 мин проводят анализ аминного азота. Полный гидролиз достигается через 8 — 12 мин. Отделение фсрмснтного препарата от смеси аминокислот проводят как цснтрифугированисм, так и фильтрацией. Потеря активности фермснтного препарата составляет 6 -7%.

Предлагаемый способ по сравнению с известными позволяет значительно про1цс и д»шевлс получать смеси 1-амино" èñëîò, не содержащие псптиды, при этом глубина гидролиза достигается 98+-2%.

Аминокислотные смеси, не содержащие псптиды, полученные по предлагаемому спосооу, найдут широкое применение в здравоохранении в качсствс основы для лечебного питания., ocoockI Io II0c:i coIIcp all, IIoIIkIhi ; больных, в м ик.робиологичсской промышленности в качсст«с замcíllтсля дорогостоя1цих и нестандартныx питательных добавок (кукурузный экстракт) и 1р. и в сельском хозяйстве.

Формула изоорстения

Способ получения смеси 1-аминокис IQT путем гидролиза белковых П1дролизатов в присутствии иммобилизованных ферментов, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью получения смеси l -аминокислот, Нс содержащей пептидов, а также увеличения выхода готового продукта, гидролиз осуществляют ферментным препаратом «Протосубтилин Г15Х», выделенным из Bacillus subtilis, им мобилизованном на органическом носителе — сополимерс стирола и малеинового ангидрида или на неорга:11. ческом носителе — силохромс.