Способ получения глюкоамилазы

Способ получения глюкоамилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Соцналнстнческнх

Республик (11) 602544 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22} Заявлено 0808;74 (21) 2049886/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 1504 78. Бволлетень № 14 (51) М. Кл.

С 12 73 13/10

Гоо1СаротвввоиС aowaToT

Соввта Мвввотров СССР оо двоав ваобрвтвивй а отврытвв (53) УДК 577.15.07 (088.8) (45) Дата опубликования описания 170378

M.Е.Бекер, И.A.Äðåéìàíå, А.Ф.Апсите, У.Э.Виестур, В.Т.Лука, В.К.Вайваре, Л.И.Орещенко, K.A.Åàëóíÿíö, В.Д.Беляев и И.К.Черемухин (72) Авторы изобретения

Институт микробиологии имени Августа Кирхенштейна

AH H o CCP (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ

Предлагаемое изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения амилолитических ферментов.

Известен способ получения глюкоамилазы глубинным культивированием его продуцентов из рода дрожжей EndOнттсорь ь 1(bu 6Яе в аэробных условиях

При этом выращивание продуцента и 10 главную ферментацию ведут на питательной среде одного состава, содержащей крахмал в чистом виде или вещества, содержащие крахмал (1(. Посевной материал, выращенный на данной !5 среде, подают непосредственно в главные ферментаторы, например, передав ливанием. Выход 80-120 ед./100 мл.

Однако данный процесс длителен, 20 общий цикл составляет 64-68 ч, из которых 48 ч приходится на выращивание продуцента. Приготовление крахмалсодержащей среды затруднено, так как крахмал оседает, затруднена также сте-25 рилизация, поскольку крахмал термически неустойчив.

Цель изобретения заключается в увеличении активности фермента и ускорении процесса получения глюкоамилазы. ЗО

Для этого в предложенном способе при выращивании посев ай культуры

Е пс(о и1 1 с ор э э и выращивании биомассы в качестве источника углерода используют спирт алифатического ряда в количестве 1,5-5,0Ъ. Выращивание биомассы следует осуществлять на питательной среде при скорости ее протока, равной 0,3-1,1 ч

Предложенный способ заключается в следующем.

Посевной материал и биомассу культуры End omy еор ы а ftbpLiqer Ы-574 выращивают на полусинтетической среде, содержащей в качестве единственного источника углерода спирт алифатического ряда, минеральные соли, кукурузный экстракт и кашалотовый жир.

После выращивания посевного материала его вводят в главный фермЕнтатор, в котором при скорости протока среды

0,3-1,1 ч выращивают биомассу продуцента. Затем в культуральную жидкость вводят индуктор биосинтеза глюкоамилазы — крахмал, и культивирование продолжают до накопления максимальной глюкоамилазной активности. Полученную: культуральную жидкость сушат или из фильтрата культуральной жидкости вы602544

Пример 1. В качестве проду цента используют дрожжи Еидои усо рь з Й bu Р е R-574.

Посевной материал выращивают в течение 18 ч в колбах на качалке при

30 С. Выращенный посевной материал о в количестве 10Ъ вводят в ферментатор, затем в течение 1 ч периодически размножают культуру и после этого переходят на выращивание продуцента 15 непрерывным методом при скорости протока среды 0,3-1,1 ч, рН 7,0, температуре 30 С и непрерывной аэрации

0 при расходе 80 мг/О /л. мин.

Состав среды для выращивания по- 20 севной культуры и выращивания биомассы следующий, Ъ:

Этиловый спирт 1 5

Сульфат аммони я 0,25

Однозамещенный 28 фосфат калия 0,2

Хлористый кальций 0,04

Кукурузный экстракт 1,0

Кашалотовый жир 0,5

Культуральную жидкость, вытекающую из непрерывно действующего ферментатора, вводят в периодически действующий ферментатор, в котором в течение 1-2 ч продолжают периодическое культивирование с целью полного усвоения этилового спирта культурой.

Затем B культуральную жидкость вводят индуктор биосинтеза глюкоамилазы— крахмал с таким расчетом, чтобы общее количество крахмала в культуральной .жидкости составляло 0,5-0,8Ъ.После . 40 добавления крахмала культивирование о продолжают при 30 С и непрерывной аэрации до достижения максимальной глюкоамилазной активности. Через 8 ч глюкоамилазная активность в культураль- 45 ной жидкости составляет 100 ед./мл по глюкозооксидазному методу.

Весь цикл составляет Зо-40 ч.

Пример 2. Выращивание продуцента и получение посевного материала 50 аналогично примеру 1. После достижения стационарного режима непрерывного выращивания биомассы при скорости протока среды 0,6-1,0 культуральную жидкость вводят в периодически действую- щий ферментатор.

После заполнения 20-50Ъ полезного объема ферментатора методом притока в течение 6-10 ч приливают пятикратно концентрированную питательную среду, содержащую 20-ЗОЪ этилового спирта.

Интенсивность аэрации повышают пропорционально росту биомассы при условии РО 10Ъ насыщения.

После окончания приливания более концентрированной питательной среды

Формула изобретения

1. Способ получения глюкоамилазы путем выращивания посевной культуры из рода FN Ао щу сорэ З на питательной среде, выращивания биомассы

65 и синтеза фермента на нитательной сре-, деляют глюкоамилазу общепринятым методом.

Выход глюкоамилазы составляет 80100 ед ./мл . Длительность процесса 3040 ч. концентрация биомассы увеличивается дважды до 35-40 г/л. После полного израсходования этилового спирта культурой в питательной, среде приливают в водном растворе разбавленный крахмал с расчетом, чтобы количество крахмала в культуральной жидкости составляло 0,5-0,8Ъ. Затем культивирование продолжают в течение 8-14 ч при условиях, аналогичных в примере 1. Глюкоамилазная активность составляет 8090ед./мл. Продолжительность цикла

44-52 ч.

Пример 3. Посевной материал выращивают в течение 18 ч в колбах о на качалке при 30 С. Выращенный посевной материал вводят в количестве 810Ъ в ферщентатор, который заранее заполняют питательной средой с этиловым спиртом до 2/3 рабочего объема.

Затем культивирование по периодическому проточному методу продолжают при условиях, аналогичных в примере 2.

Пример 4. Выращивание продуцента и посевного материала ведут ана-. логично примерам 1 и 2. Состав питательной среды для выращивания посевного материала и биомассы следующий,Ъ:

Метиловый спирт 2,0

Сульфат аммония 0,25

Однозамещенный фосфат калия 0,2

Хлористый кальций 0Ä04

Кукурузный экстракт 1,0

Кашалотовый жир 0,5

Количество получаемой биомассы составляет 40 г/л. Процесс главной ферментации можно вести по примеру 1, 2, 3. Через 10-16 ч глюкоамилазная активность составляет 80 ед./мл. Общий цикл 44-56 ч.

Во всех случаях обработку культуральной жидкости ведут любым из известных методбв. таким образом, предлагаемый способ позволил сократить общий цикл на 3040 Ъ, ускорить приготовление питательной среды для выращивания продуцента, т.к. спирты не оседают и термически более устойчивы, чем крахмал, а также на ЗОЪ сократить расход кислорода при аэрации.

Предлагаемый способ позволит впервые в Советском Союзе промышленно получить глюкоамилазу микробиологическим путем. В настоящее время ведутся подготовительные работы для внедрения способа на ливансКом опытном биохимическом заводе. Предлагаемый объем выпуска 20 усл.т. в год.

602544

Составитель Г.Лошкарева

Редакто Л. Новожилова Тех ед М. Келемеш t Ko eK To Д.Мельниченко

Заказ 1768/23 Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Ра ская наб. д. 4 5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 де, содержащей крахмал, отделения био- массы от культуральной жидкости и выделения фермента из нее, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения активности фермента и ускорения процесса, при выращивании посевной культуры и выращивании биомассы в качестве источника углерода используют спирт алифатического ряда в количестве 1,5-5Ъ.

2. Способ по п.l, о т л и ч а ю— шийся тем, что выращивание биомассы на питательной среде осуществляют при скорости ее протока, равной 0,3-1,1 ч

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: йвторское свидетельство СССР

9 340690 кл. С 12 I7 13/10, 1970.