Штамм нр-19продуцент коагулазы

Штамм нр-19продуцент коагулазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистически к

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

t (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 02.09,75 (21) 2172986/28-13 с присоединением заявки Ph (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.04.78.Бюллетень ЭЙ 14 (5I) М. Кл.

С 12 Э 13/10

ГеерарвтввннмИ «евнтат

Венвта Инннатнеа ййт не данам наабрвтвнн1 н втннмтнй (53) УДК 615. 779.94 (088.8) f45). Дата опубликования описания 160378 (72) вторы изобретения H.ñ.åãîpoâ, В.и.ушакова и В.В.клечковская

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М.В.Ломоносова (71) Заявитель (54) ШТАММ Аере фтИца осягасеца

HP-19 — ПРОДУЦЕНТ КОАГУЛАЗЫ

10!

Изобретение относится к микробиологии, а именно, к производству биологически активных препаратов из микроорганизмов. о

Предложенный штамм 4ер. оспгасець

HP-19 новый и в научно-технической и йатентной литературе не описан.

Целью изобретения является непатогеыный штамм плесневого гриба рода

М а р Е Я i Г u s, синтезирующий высокоактивиую внеклеточную коагулазу при глубинном выращивании на ряде простых по составу сред.

Предлагаемый штамм А ь р e g i Р Р и з

ya4ro се ц в HP-19 выделен иэ почв

Подмосковья. Хранится в коллекции микроорганизмов на кафедре микробиологии Московского государственного уни-. верситета им. М.В.Ломоносова под номером 19. штамм характеризуется следующими признаками °

При выращивании на твердой среде

Чапека при 26-28ОC на седьмые сутки роста диаметр колонии достигает 3,14,0 см. Колонии плоские, приподнятые в центре в виде хохолка, с выраженной эональностью в окраске от медовожелтого до охрянного цвета в центре.

Края колоний ровные, не погруженные в агар, белые. Радиальная складчатость выражена слабо. Обратная сторона колонии цвета слоновой кости, с возрастом темнеет.

Морфология. Конидиеносец. Окрашен в кирпичный цвет, стенка его шиповатая, высота 400-700 мкм, толщина 71U мкм.

Вздутия. В массе своей шаровидные, встречаются овальные, и иногда булавовидные. Размер вздутий 15-37х25-37 мкм.

Головки. В основном круглые, окрашенные в желтый цвет, с длинными цепочками кониций. Размер 70-120х120 мкм.

Стеригмы Двухъярусные. I ярус имеет размер 2,0-3,Ux6,2-8,/ мкм,П ярус-

1,5- 2,5х8,7-12,5 мкм. .Конидий.-шиповатые, окрашенные в кирпичный цвет, шаровидные или полушаровидные, размером 2,5-3,0 мкм.

Культуральные признаки.

При глубинном выращивании на сусле

6Б при 26-28 С рост на 2-3 сутки интенсивный, в виде буроватой массы, состоящей иэ шариков 0,5-1,0 мм в диаметре.

Толщина нитей мицелия достигает 2,54 мкм. Культуральная жидкость цвета некрепкого чая.

При глубиннем культивировании на минеральной среде Чапека в тех же

602545

При росте на этой среде рН культуральной жидкости остается без изменения, либо слегка сдвигается в ,кислую зону до 5,8-5,7. Максимальная

5 активность 480 усл.ед./мл определяется в 48-часовой культуре гриба.

Активность коагулазы определяют путем последовательного двукратного разведения испытуемого раствора дистилли10 рованной водой. Затем,к 0,1 мл каждого разведения добавляют 0,4 мл ци- . тратной плазмы человека, разведенной в 2 раза. После инкубации образцов в течение 18 ч прк 37 С учитывают об 8 разованке крепкого сгустка в максимальном разведении. Активность выражают в условных единицах на 1 мп испытуемого раствора, реакция сопровождается контролем на способность плазмы к спонтанному свертыванию.

П р и м e p 2. Культуру выращивают так жв, как указано в примере 1, но на среде, имеющей следующий состав, г/лг

Гидролкэат казенка 6,3

Глюкоза 20

КСР 0,4 мусг 0,5

CeCR< 0,022

Р0 Св4"Й < 0,024

3к 804 0,014 + s04 0,015 йа Н,Уо 4,4

Вседа дистиллированная, рН 6,0.

35 В процессе культивирования гриба рН среды подщелачивают до 6,8-7,3.

Активность коагулазы достигает максимальных значений (480 усл.ед./мл) к 72 ч культивирования.

40 Активное вещество выделяют из культуральной жидкости после отделения мицелия гриба, приливая к 1 объему культуральной жидкости 2 объема охлажденного до -20 С ацетона. Выпавший осадок отделяют центрИфугированием, растворяют в дистиллированной воде, диализуют и лиофильно сушат.

Таким образом, предлагаемый штамм не патогенен, при работе с ним можно выделять целевой продукт из культуральной жидкости выход коагулаэы достаточно высокий.

На синтетической среде, содержащей в качестве источника углерода к азота каэеик, неокрашенная масса жид,кой консистенции состоит из отдельных нитей гмицелия.

На синтетической среде, содержащей в качестве источника углерода к азота фкбриноген человека, отдельные шарики диаметром 1,0-3,0 ь84 окрашены в оранжевый цвет. Культуральная жидкость соломенного цвета на синтетической среде,, содержащей в качестве источника углерода глюкозу, в качестве источника азота - гйдролизат каэеина, буроватая масса средней густоты, состоящая кз шариков диаметром

0,5-1,0 мм. Культуральная жидкость цвета некрепкого чая.

Физиолого-биохимические признаки.

Оптимум роста 26-28 С.

Хорошо усваивает глюкозу, сахарову, мальтозу, лактозу, глицерин, органические кислоты.

Из источников азота утилизирует нитраты, аммонкйные соли, 4пянйокислоты, пептон, гкдролиэат казенка.

Может испольэовать в качестве единственного источника азота и углерода каэеин и фибриноген человека.

Обладает эстераэной .активностью в отношении тоэиларгкнинметилового эфира

Иакскмальная активность коагулазы обнаруживается в 48-72-.часовой культуре гриба и достигает на сусле 6Б

480 усл.ед./мп, на полусинтеткческой среде с пептоном 240-480 усл.ед./мп, на минеральной среде Чапека 120 усл. ед./мл. Активное вещество осаждают кз культуральной жидкости после отделения мкцелия гриба фильтрованием.

В качестве осадителя можно использовать ацетон, этанол,, сернокислый аммоний.

Пример 1. Штамм Яэна фjfgug.

och» аceuз HP-19 поддерживают в пробирках на агарцэованной среде Чапека при комнатной температуре. В качестве посевного материала используют суспензию конидий .7-10-суточной культуры,. выращенной на 48-с9слоагаре кли агаре

Чапека.

Гриб культивируют на качалках прк

2Ü-28 С в колбах емкостью 750 мл со

100 мл среды в каждой, которая имеет следующий состав, г/л

Глюкоза 40

Пептон 2

КНРО, 3

@У з04

КГ8 0,5

Вода водопроводная, рН 5,9-6.

Формула изобретения условиях рост в виде негустой бежевато"розовой массы, состоящей из шариков до l мм в диаме гре Встречаюзся склероцки, окрашеннйе в темно-кирпичный цвет, размером до 1-2 мм.

Штамм ASpe r g i Etude och r caus

HP-19 продуцент коагулаэы хранится в коллекции культур кафедры микробиологии биологического факультета ИГУ

60 под номером 19.

Культурно-морфологические признаки.

Толщина конидненосцев до 10 мкм, высота 400-700 мкм. Размер вэдуткй

15-37х25-37 мнм, стеригмы двухъярус65 ные, размер 1 яруса стеригм 2,0-3,0х

602545

Составитель М.андреева

P акто Е.К г чеза Тех М.Борисова Ко кто, .Мельниченко

Заказ 1768/23 Тираж 568 Подписное

?ЩИИПИ Государствеииого комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытиф.

113035 Москва Ж-35 Ра кая наб. . 4 5

Филиал ППП Патент ., r. ужгород, ул. Проектная, 4 х6,2 8,7 мкм, Q яруса - 1,5-2,5х х8,7-12,5. Конидий 2,5-3,0 мкм, шиповатые, окрашенные в кирпичный цвет, шаровидные или полушаровидные. Arap

Чапека. При 26-28 С на седььвюе сутки 5 роста диаметр колоний достигает 3,14Ä0 см. Колонии плоские, приподнятые

s центре в виде хохолка, с выраженной зональностью в окраска от медовожелтого до цвета охры в центре. Края колонии ровные, не погруженные в агар, 10 белые. Обратная сторона колонии цвета слоновой кости, с возрастом темнеет.

Радиальная складчатость выражена слабо. Сусло 6В. При 26-28 0 на 2-3 сутки рост интенсивный, в виде буроватой массы, состоящей из шариков от

0.,5-1,0 мм в диаметре. Толщина нитей мицелия достигает 2,5-4,0 мкм.

Синтетическая среда, содержащая в качестве источника углерода и азота казеин. Неокрашенная масса жидкой консистенции состоит. иэ отдельных нитей мицелия.

Синтетическая среда, содержащая в качестве источника углерода и азота > фибриноген человека. Отдельные шарики диаметром 1,0-3,0 мм окрашены в оранжевый цвет. Культуральная жид кость соломенного цвета.

Синтетическая среда, содержащая в качестве источника углерода глюкозу

I в качестве источника азота - гидролиэат казеина. Буроватая масса средне. густоты, состоящая из шариков диаметром 0,5-1,0 мм. Культуральная жидкость цвета некрепкого чая.

Физиолого-биохимические признвки.

Оптимум роста 26-28 С. Хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, мальтоэу, лактоэу, глицерин, органические кислоты.

Из источников азота утилиэирует нитраты, аммонийные соли, аминокис» лоты, пептон, гидролиэат каэеина. Может использовать в качестве единственного источника азота и углерода каэеин и фибриноген человека.

Обладает эстераэной активностью в отношении тозиларгининметилового зфи ра °