Патент 603347

Способ получения моеномицина

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ (63) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 14.О7 75{21) 2153965я8-13 (28) Приоритет - (32) 23.О7.74 (31) P. 24 35 260.1 (33) ФРГ (43) Опубликовано 15.04.786вллетеиь 3614 (45) Дата опубликования описаииар .gg.ß, Сев Ссас

Сецмалмстмчаааа

Реса убамк (11) 603347 (51) М. Кл.

С 12D 9/14

Гфнуднрнтненнмй кнмнтет

N6Nm Внннтрнн МР

as аннам нннбрвпнн» н нтнннпнй (72) Авторы изобретения иностранцы

Щген дитрих (ФРГ), Мнроспав Мрацек (ЧССР ,Питер Сукач и Георг Неземанн (ФРГ)

Иностранная фирма

"Хехст АГ" (ФРГ) (7 t) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ MOEHOMHUHHA

Предпочтительными углеводородными радикалами для выращивания моенрмнцина являются октил, попил, децил, ундецил, додецил, тридецил, тетрадеци,н, пентадецил, деценил, ундеценил, додеценил, тридеценил, тетрадеценил, > пентадеценил, гексадеценил, гептадеценил и октадеценнл, а также оксиоктил, оксинонил, оксидецил, оксиундецил, оксидодецил, окситрндецил, окситетрадецил, оксипентадецил, оксигептадецил, а также оксиоктадецил. Оксигруппа у всех вышеназванных остатков может сто19 ять у первого, второго, третьего ит. д. допредпоследнего С-атома; С| — С у октила, <,1 — Св у нонила, С l — Cg у децила, С вЂ” С I O у ундецила, С вЂ” С 1 у додецила, С1 — С > г у тридецила, C> — C» у тетрадецила, С вЂ” Cj у пентадецила, С.— С у гексадецила, C — Сig у гептадецила, Ci — С у октадецила.

По отношению к положению гндпоксильной группы в молекуле предпсчтнтельны такие соединения, которые на практике являются самыми легко доступными, как например, 12-окуз си-Л-9,10-октадеценовая кислота или 12-окси-Л-6,7-октадеценовая кислота илн 12-окги-Л-

-9,10-тетрадеценовая кислота или 12-окси-h,--5,6-тетрадеценовая кислота.

Среди тензидов предпочтительными являются такие, молекулярный вес которых 1000—

2Ь 1500, точка помутнения (1 г вещества

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получений антибиотика моеномицина, Известен способ получения моеномицина путем микробиологической ферментации моеномицинообразующих стрептомицетов и в качестве дополнительного углеводородного источника используют жиры (11.

Известен также способ получения моеномнцина путем выращивания продуцента Streрtomyces ghanaensis АТСС 14.672; Streptomyces namaergiensis АТСС 13.879 или Streptomyces ейегепз1з АТСС 15.304 или Streptomyces

glysiriensis АТСС 15.303 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли с последующим выделением целевого продукта (21.

Целью изобретения является повышение выхода препарата.

Эта цель достигается тем, что выращивание осуществляют в присутствии жира и неионогенного тензида с молекулярным весом 1000 — 1500 общей фор,мулы.

К вЂ” Π— (СНя — СНз — О) пН, где К вЂ” углеводородный радикал, содержащий 8 — 18 атомов углерода и который может содержать также одну гидроксильную группу, а п=18 —.30. (+) lN 6 15.779.932 (088,8) 3347 ф

3 60

s 10 мл 100%-ного раствора поваренной со ли) 73 — 79, гидроксильное число 39 — 78 и значение липофильиогидрофильного баланса 16 — 18.

П редпочтительными тензидами являются такие, у. которых n=25 и К является смесью, состоящей из 6 — 9% октила, 5 — 7% децила, 48 — 54% доцедила; 18 — 20% тетрадецила, 7 — 9% гексадецчла и 8 — 10% октадецила, или и = 18, 20, 22 и Р обозначает додецил.

Ферментацию стрептомицетов проводят в аэробных условиях в водной среде, которая вместе с неорганическими солями в качестве углеводородного источника содержит крахмал, глюкозу, тростниковый сахар или мелазу и дополнительно животный, растительный или синтетический жир, а также в качестве источника азота раздроблеину1о сою или соевую муку, экстракт дрожжей, муку из семян хлопчатника или его ростков, нитраты или соли аммония, а т<к.к тензид.

Ферментацию проводят до достижения максимальной антибиотической активности. Ее определяют измерением концентрации растворенного азота в ферментативной среде или определением веса образовавшейся сухой массы.

После достижения максимальной антнбиотнческой активности ферментацию прерывают.

Для выделения антибиотика всю культуру гомогеиизируют и после этого экстрагируют, или отделяют мнцелнй от раствора центрнфугированием и обе эти составные части экстрагируют.

В качестве экстрагирующих средств использу ют растворители, которые частично или хорошо смешиваются с водой: метанол, этанол, -бутанол, этнленгликоль, монометиловый эфир, ацетон или дноксан.

Из полученного экстракта выделяют антибиотик путем испарения растворителя при пониженном давлении. Остаток для дальнейшей очистки экстрагнруют горячим полярным орга ническим растворителем, например метанолом, и антибиотик выпадает из экстракта, сконцентрированного при пониженном давлении, путем осаждения умеренно полярным органическим растворителем, как этиловый эфир, диизопроннловый эфир или этилацетат.

В качестве моеномицинообразующих стреитомицетов применяют Streptomyces dhanaensis

АТСС 14.672, Strep omyces aamaergiensis

АТСС 13.879, Streptomyces ederensis

ATCC 15.304 и Strep tomyces glysiriensis . АТСС 5.303, а также их мутанты и ревертанты.

В качестве животных жиров используют жиры животного происхождения, как свиной смальц или бараний жир, или полученные ис-, кусственным путем фракции этих жиров с определенным содержанием углерода. В качестве растительных жиров используют жирные масла, например оливковое, подсолнечное, бобовое кокосовое и рацннусовое масла. Кроме того, . применяют синтетические жиры, например трнг. лицерид масляной кислоты или трнглнцерид стеариновой кислоты. Все жиры применяют в концентрации О,l — 16%, предпочтительно 2в

5 вес. %. выход целевого продукта моеномицина.

Формула изобретения

Способ получения моеномицнна путем выращивания продуцента Streptomyces ghanaensis АТСС 14.672, Strep tomyces ващвегgiensis ATCC 13.879, Streptomyces ederensis

АТСС 15.304 или Streptomyces glysiriensis

АТСС 15.303 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли. с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода препарата, выращивание осуществляют в присутствии жира и неионогенного тензида с молекулярным весом 1000 — 1500 общей формулы

R — Π— (CH> — СНг — О) пН, где R — углеводородный радикал, содержащий 8 — 18 атомов углерода и который может содержать также одну гидроксильную группу, а h= 18 — 30.

Источники информации, принятые во внимание прн экспертизе:

1. Патент ФРГ № 1210514, кл. 30 h 6, 1966.

2. Патент США № 3674866, кл. 424 — 118;—

1972.

Добавка тензида оказывает стимулирующее действие иа образование моеномицина.

Пример. S treptomyces ghanaensis

АТСС !4472 прививают в 300 мл колбе Эрлеи-. мейера на 30 мл питательной среды следующего состава, вес.%: 4,0 глюкозы, 3,0 соевой муки, 0,3 барды сухой, 0,25 поваренной соли, 0,25 карбоната кальция, воды до 30 мл. После прививки культуру встряхивают при температуре 28—

30 С два дня с частотой 300 об/мин.

Ферментативная среда имеет следующий

N состав, %:

Соевое масло 3,0

Соевая мука 3,0

Маисовый крахмал 3,0

Сахароза 1,0

Сульфат аммония 0,3

Карбонат кальция 0,4

Дрожжи 2,0

Вода до 30 мл

Добавку одного из тензидов к ферментативной среде осуществляют в виде 100%-ного водного раствора с дважды дистиллированной водой. Раствор стерилизуют непосредственно после этого в течение 10 мин при 123 — 127 С.

Ферментативную среду смешивают с 1,5 мл раствора тензида при 37 С. Затем добавляют 5 мл культуральноя жидкости. Затем культуру встряхивают при 28 — 30 С в течение 120 ч при 260 — 300 об/мин.

Затем добавляют 60 мл метанола и встря-. хивают еще 2 мин в вибросмесителе и после этого фильтруют .через складчатый фильтр. В

Зп одной аликвотной части фильтрата определяют содержание моеномицина в результате его действия на стандартную культуру Staphylococcus

aureus tuaidimetriscb в сравнении с эффективностью моеномицинового раствора известного содержания.

М Предлагаемый способ обеспечивает высокий

LlHl .ÈÏÈ Заказ 16

Филиал ППИ «Патент

79/63 Тираж 568 I! одн исное

», г. Ужгород, Ул. Проектная, 4