Способ получения протеаз

Способ получения протеаз

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Саюз Саветскми

Соцмавмстмческни

Республик,, (11) 60 (61) Дополнительное к авт. свил-ву

2 (51) И. Кл.

С 12 D 13/10 (22) Заявлено 19.07,76. (21) 2384155/28-13 с присоединением заявки №вЂ”

Гооудеротеенный комитет

Совета Министров CGCP ео делам изооретеиий и открытий (23) Приоритет

{43) Опубликовано 05.05.78. Бюллетень №17 (53) УДК

577.15.663.1 (088.8) (45) Дата опубликования описания 04.04.78

Н. С. Егоров, М. А. Аль — Нури, Н. С, Ландау и Л. И. Буяк (72) Авторы изобретения

Московский Ордена Ленина и Ордена Трудового Красного Знамени

Государственный Университет нм. М. В. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕАЗ

Изобретение относится к производству ферментных препаратов и может быть применено в медицине и микробиологической промышленности.

Известен способ получения протеолитического фермента, обладакецего казеинолитическим и фибри- 6 политическим действием, предусматривающий совместное культивирование на питательной среде микроорганизмов Actinomyces двух видов rimosus u

Actinomyces violaceus активного и неактивного в отношении образования протеаз с последующим вы- lp делением их иэ культуральной жидкости.

Недостатком способа является то, что выход целевого продукта недостаточно высок.

Целью изобретения является повышение выхода протеаз, обладающих каэеинолнтическим, фиб- 15 ринолнтии:ским и тромболитическим действием.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве активного в отношении образования протеаз микроорганизма используют культуру плесневых грибов Aspergiltus Kanagawaensis, а в качестве неактивного — культуру плесневых грибов Aspergil.Ьа wentii, при этом микроорганизмы вносят в питательную среду в равных количествах, а выращивание их проводят при 28 — 30 С в течение 48-72 час. 25

Способ поясняется конкретным примером его осуществления.

Пример. В известную синтетическую среду (глюкоза —, 0,36%, сахароза — 0,72%, KNOs — 0,2%, INgSO4 — 0,123%, Ко НРО® — 1,37%)после стерилизации вносят 5% по объему двухсуточного жидкого посевного материала Азрегя! 1Ьв kanagaewaens is, выращенного на жидком 4 бал. сусле, и 5% по объему двух-трехсуточного жидкого вегетативного материала Aspergiltus wentu, выращенного на извест. ной синтетической среде. Культивирование смещенной культуры осуществляют глубинным способом в колбах на 750 мл со 100 мл среды на качалках при 28 С в течение 56 часов. По истечении этого времени культуральна я жидс ость содержит

1160 усл. ед/мл фибринолитической активности и растворяет тромб за 3 часа. Каэеинолитическая ак: тивность культуральной жидкости равна 9,8 каз. ед/мл.

Для вьщеления фермента клетки отделяют от культуральной жидкости центрнфутированием и проворргг высаливание фермента сернокислым аммонием при насыщении 0,7 в течение 32 часов при 4 С. Выпавший осадок растворяют вводе,,диализуют в течение 24 часов при 4 С против 0,01 М трис-буфера рН 7,4 с 0,005 М CaCI или CoCI, после чего

3 проводят лиоффильное высущнвание и получают препарат, обладающий специфической активностью

l! 20 ед/мг белка.

Полученные результаты свидетельствуют о

Т0М, что в смешанной культуре грибов происходит образование протеаз с каэеннолитическим действием в 3 раза больше, а с фибринолитическим и тромболитическим действием в 2-2,5 раза больше, чем в чистой культуре Aspergtttus kanagaewaen

sis. Увеличение ферментативной активности сопро- 10 вождается столь же интенсивным в 2 — 2,5 раза воз растанием продуцирующей способности клеток.

Способ получения протеаэ путем совместного выращивания на питательной среде двух видов миРедактор О, Иванова

Заказ 2339/17 Тираж 568 Подписное

QHHHHH Государственного комитете Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москве, Ж-35, Раушскаа наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная,4

Формула изобретения

605826

/ кроорганизмов — активного и неактивного в отношении образования протеаз и их последующего вы. деления из культуральной жидкости, о т л и ч а н шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве активного в отношении образования протеаз микроорганизма используют культуру плесневых грибов Aspergitbs kanagaeччаепа1в, à B качестве неактивного — культуру плесневых грибов Aspergit4s wentii, при этом микроорганизмы вносят в питательную среду в равных количествах.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выращивание микроорганизмов проводят при 28-30 С в течение 48-72 асов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Авторское свидетельство СССР 1т" 436086, кл. С 12 D 13/10, 1974.

Составитель И, Привалова

Техред Н.Вабурка Корректор А.власенко