Штамм проактиномицетов продуцент антимикробного вещества

Штамм проактиномицетов продуцент антимикробного вещества

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е <„, ео5нэ2

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

{61) Дополнительное к авт. свид ву (22) Заявлено 01.07.76 (21) 2378549/30-15 с присоединением заявки №вЂ” (53) М. Кл.

С 12 К 1/00

Государственный номнтет

Совета Иннистрое СССР по делам иэооретеннй н открытий (23) Приоритет— (43) Опубликовано 0505.78. Бюллетень № 17 (45) Дата опубликования описания 05.04,78 (53) УДК

631.466.2 {088.8) (72) Авторы. изобретения

P. И. Пиковская и Л. P. Бахтадзе (71) Заявитель (54) ШТАММ ПРОАКТИНОМИЦЕТОВ PROACTlN0MYCES PROSPHATiCUS

ПРОДУЦЕНТ АНТИМИКРОБНОГО ВЕЩЕСТВА

Изобретение относится к области:микробиологии и представляет новый штамм проактиномицета, обладающий антимикробными свойствами.

Известны различные штаммы микроорганизмов, например ппамм Реп с1Иегп notatum, обладаявцие антагонистическими свойствами по отношеншо к стафилококкам, пневмококкам, гонококкам и лр. (1).

Штаммы Proaotinomyoesl обладающие аитимик- 1О робными свойствами, в литературе не описаны.

Предлагается штамм проактиномицетов Proact inomyces phosphat icus — нродуцент антимикробного вещества, позволяющий расширить ассортимент продуцентов антибиотиков. Культура выделена из 1з перегнойно-карбонатной почвы Кицхи (Земо-Имеретия) в 1966 году на среде Пнковской и с тех Нор хранится в коллекции микроорганизмов лаборатории почвенной микробиологии НИИ почвоведения, агрохимии и мелиорации МСХ ГССР, успешно нод- 20 держиваемая на питательных средах.

Замеченное у культуры свойство стойкой s течение ряда лет стерильности на питательных средах послужило основанием для лредложення об антагонистических свойствах, что было подтверждено 2о

2 дальнейшими исследованиями. Изучение антимикроб ных свойств культуры ведется. с 1972 года.

Штамм хорошо растет на среде Пиковской с трифосфатом магния и с другими фосфатами. Хорошо развивается и на других синтетических средах, в том числе лишенных азота, но практически азот не связывает, что позволяет отнести его к олигонитрофилам.

Оптимальная температура инкубаци т штамма

28 — 29 С.; Прогрев при 100 С в течение 20 мин полностью не iuaurтшируют;его. Рост на .среде без глюкозы положительный; На второй день инкубации культура имеет вид колоний молочного цвета слизистой конснстентпти. На 3 — 4 день биомасса пигментируется, окрашиваясь в разные тона в зависимости or катионной части фосфата, который она трансформирует. На среде с Mga (PO )е конечная окраска темно-коричневая, с Сан (РОи) > — светлокоричневая, с А!РОи — горчичная.

На МП вЂ” средах микроб развивается слабее, фермеитирует желатину и молоко. На гляжозе, сахарозе, манните, инозите образует кислоту, на ара. бинозе, рамнозе, сорбите, лактозе, дульците — щелочь. Газа ни в одну из названных сред не выделяет. Крахмал ие гидролнзует, нитраты редуцирует

605832

Таблица 1

Тест- микроб

Среда Пиковской Среда pose и Ре далла

25

Bac. mycaides

26,7

Вас. subtilis

21

St. aureus

17,3

Escherichia coli

Титры антимикробнои активности жидкой куль- среде Пиковской (тест-микроб Бх, aureus), даны туры Ргоасбпотусез phosphatiws, выращенной на 60 а табл. 2.

3 до г40 . На МПА, СА, картофеле, образует слегка маслянистые колонии. Вьщеляет в среду фосфатазу, Реакция в культуре нейтральная.

Мицелий культуры воздушный, колонии слегка пушистые, конидии свальные и круглые, кони диеносцы и рямые.

Антимикробные свойства штамма проверяют на модифицированной среде N 1 по Д. С. Грову и В. A. Рендаллу следующего состава: дистиллированная вода 1000 мл, пептон 6 г,. дрожжевой экстракт 3 мл, глюкоза 5 г, агар-агар 20 г, рН 6,6 — 6,8.

Стерилизация при 0,5 атм. На этой среде хорошо растут штамм и тест-микробы, на других средах синхронность роста культур нарушается.

Культура выделяет вещество, задерживающее рост граммположительной микрофлоры: Staphliococus aureus 8357, Вас. mycoides 531, Bac. subtilis (споры) Ез, но зоны задержки роста Вас. зиЬОНз зарастают вторичной культурой. Ha Beet. Eschar ichia 20

coli действует слабо.

Лнтимикробиые свойства культуры проверяют на двухслойном агаре одинакового состава. Инкуба. ция при 28 — 29 С. Результат отчетливо выражен через 48 — 72 ч. Проверяют на Вас. subtilis (споры),:26

Ез, Рас. вусоЫез 537, St. aureus 8357, Beet. Esche.

richia co!i. Первые хри хест-микроба получены из коллекции института им. Тарасевича, четвертьп1— из музея культур Института микробиологии AH СССР.

Щтамм проверяют в виде блоков и в растворе раэ- 80 ной концентрации в цилиндрах диаметром 8 мм методом диффузии в агар.

Для первого слоя среду разливают в чашки

Петри по 20 мл. В расплавленную среду того же состава и охлажденную до 50 — 55 С добавляют И извесь тест-микроба в концентрации 1 млн/мл. Вас.

subtilis используют в виде спор, остальные тест-микробы — в виде смыва суточной вегетативной культуры на МПА. Культуры перемешивают с агаром

4 и по 4 — 5 мл разливают на застывший слой. Затем на тот же слой помещают блоки испытуемоч куль туры или же смыв ее в 6 цилиндрах.

Для накопления антимикробного вещества штамм Ргоасбпопзусез рйозрйабсоз можно выращивать как на среде Пиковской с Мяэ (PO4)z хвер дой и жидкой, так и на вышеуказанной модифицированной среде Грова и Рендалла, Накопляемое вещество на этих средах заметно не меняется. Оптимальный возраст накопления культурой ангимикробного вещества 5 — 10 дней.

При испьпании антимикробного титра культуры применяют жидкие культуры или смывы культур с твердых сред в разных разведениях. Для осйабождения смывов от балласта их можно с соблюдением стерильности обработать активированным углем, что способствует некоторому повышению активности.

Антимикробное вещество получают в результате фильтрации отцентрифугированной кульхуральной жидкости через бактериальный фильтр Шамберлена Ез. Фильтраты стерильны и полностью подавляют St. aureus u Bac. mycoides. Зоны задержки

I ° роста St. aureus 0,1 мл фильтрата в среднем 42 мм, Bac. mycoides 26 мм.

Через 14 дней после первого просмотра чашек подавление пошло за зону, захватив дополнительную культуру. Это свидетешствует о литических свойствах Proactinomyces phosphaticus в отношении названного микроорганизма.

При многократном пользовании одним фильт ром вещество теряет стерильность, что можно объяснить повреждением фильтра s результате регенерации в муфеле. Кроме того„при фильтрации значительная часть. антимикробного вещества несомненно адсорбируется на фильтре.

Результаты определения антибактериальных свойств шестидневной нативной культуры Ргоасб nomyces phosphaticus приведены в табл. 1.

605832

Таблица 2

Зоны задержки pocra, мм

Разведение

35, 1; 10

1: 100

1: 1000

1: 10000

17,5

Составитель И. Тареева

Техред Н.Андрейчук

Корректор А . Власенко

Редактор 3. Бородкина

Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открьггнй

113035, Москва,,Ж вЂ” 35, Раушскал наб„д. 4(5

Заказ 2с39/17

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектнаи, 4

Неразведенная культуральная жидкость

Формула изобретения

Штамм проактнномнцетов Ргоаст inоmyсеs

phosphaticus — продуцент антимикробного вещества. Штамм хранится в коллекции лаборатории почвенной микробиологии НИИ почвоведения, агрохи. мни и мелиорации МСХ ГССР. 25

Культуральные и морфологические свойства.

Оптимальная температура инкубации штамма 28—

29 С. На второй день инкубацин культура иа всех

cpegsx имеет вид колоний молочного цвета слизи- стой консистенции. На 3 — 4 день биомасса нигменти- 3а руется, окрашиваясь в зависимости от среды в раЭные тона (горчичный, светло коричневый, темно-коричневый) .

Мицелий культуры воздушнын, колонии слег- Зэ ка пушистые, конидии овальные и круглые, кони. диеносцы прямые.

Штамм хорошо растет на среде Пиковской.

Хорошо развивается и на других синтетических средах. Оптимальной для исследования антнмикробньтх 49 свойств штамма является среда следующего состава: дистиллированная вода 1000.мп. 1йептон б г, дрожжевой экстракт 3 мл, глюкоза 5 r, агар-агар 20 r, рН б,б — б;8. Стерилизация прн 0,5 атм.

Биохимические свойства. Штамм ферментнрует желатину и молоко На глюкозеу сахароэер маннитеф инознте образует кислоту, на арабинозе, рамноэе, сорбите, лактозе, дульците-щелочь. Газа ía s одну из названых сред не выделяет. Крахмал не гидролизует, нитраты редушарует до ИОз. Оа МПА, СА, картофеле колонии слегка ьвслянистые. Выделяет

s среду фосфатазу. Реакции в культуре нейтральная.

Рост se среде без глюкозы. положительныйАнтибактериальнью свойства. Культура выделяет вещество, задерживающее рост грамположитель-. ной и грамотрнцательнои микрофлоры: Staphi lococ.

)cus aufans 8357, Вас. mycoidas 537, Вас. subtilis (споРы) 2з, Beet. Еэйаг1сЮа сой. Активное антимикробное вещество, выделяемое продуцентом, получают s стерильном фильтрате культуральной яащ кости при фильтрации через бактериальный фильтр

Шамберлеиа Zs.

Источники информации, принятые во внимание лри экспертизе:

1. Аничков С. В., Беленький М. П. Учебник фармакологии, М., Медицина, 1968, с. 401.