Патент 608833

Способ получения рибофлавина

 

О П И С А Н И Е п11608833

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 13.06.74 (21) 2034242/28-13 с присоединением заявки № (51) М. КлР С 12D 5/04

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.05.78. Бюллетень № 20 (53) УДК 577.16(088.8) (45) Дата опубликования описания 07.06.78 (72) Авторы изобретения

3. С, Ерофеева, В. Д. Кувшинников, В. М. Благодатская и В. К. Ерошии

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР (71) Заявитель

1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕН ИЯ РИБОФЛАВИНА ф .;:-, /;,„

Изобретение относится к области микробиологического синтеза белково-витаминных веществ, в частности к получению рибофлавина на основе метилового спирта.

Известен способ получения рибофлавина, предусматривающий выращивание микроорганизмов — продуцентов рибофлавина в условиях аэрации па питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли (1).

Недостатком известого способа является использование недостаточно перспективных микроорганизмов и субстратов для их выращивания, его сложность и недостаточно высокий выход продукта.

Цель изобретения — упрощение процесса и повышение выхода продукта, Поставленная цель достигается тем, что в предлагаемом способе получения рибофлавина в качестве продуцента используют дрожжи вида Candida boidinii, при этом в качестве источника углерода при выращивании дрожжей используют метанол.

Кроме того, в качестве продуцента используют штамм ИБФМ у 671.

Способ осуществляют следующим образом.

Культуру Candida boidinii штамм ИБФМ у

671 выращивают в условиях аэрации на питательной среде, содержащей минеральные соли, источники азота и источники углерода.

В качестве источника углерода при выращивании используют метанол, поступающий в виде паров. Метанол подают с помощью автоматического дозатора, поддерживая на уровне не выше 1%, контроль за содержанием метанола осуществляют хроматографом.

Штамм Candida boidinii ИБФМ у 671 имеет следующую характеристику.

10 Морфологические и культуральные признаки.

Через 3 дня в жидком сусле 7 Бал. при 28 С клетки овально-удлиненные, реже округлые.

Размеры клеток (1,5 — 3) Q (3 — 5) p.. Пленка беловатая сухая, припудренная, осадок скудный. Через месяц при 17 С штрих на суслоагаре кремового цвета, матовый, бархатистый. Псевдомицелий (на стекле, на луковом агаре) хорошо развит, древовидно-ветвящийся, бластоспоры овальной формы, собраны в цепочки. Колонии на сусло-агаре круглые, беловатые, матовые, складчатые в центре, края ровные.

Образования аскоспор, баллистоспор, телиоспор не наблюдают.

Физиологические признаки.

Сбраживают только глюкозу.

Ассимилирует глюкозу, этанол, метанол, глицерин, этиленгликоль, эритрнт, сорбит, 30 маннит, янтарную н яблочную кислоту.

608833

60

Изд. Ма 428

Заказ 688/16 нпо

Тираж 568

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2

Не ассимилирует галактозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, сорбозу, целлобиозу, трегалозу, мелибиозу, мелицитозу, раффинозу, инулин, крахмал, D-ксилозу, D-арабинозу, рибозу, рамнозу, адонит, дульцит, молочную кислоту, лимонную кислоту, инозит, винную кислоту, углеводороды.

Нитр аты ассимилирует. Кир не расщепляет.

Крахмал и внеклеточные полисахариды не образует.

Арбутин расщепляет слабо.

5Келатину не разжижает.

Нуждается в биотине (0,0005 у мл), оптимальная температура роста 29 С, максимальная температура роста 32 С.

Штамм Candida boidinii ИБФМ у 671 хранится в коллекции культур Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН

СССР под указанным номером.

Аминокислотный состав Candida boidinii

ИБФМ у 671, в % от белка:

Лизин 3,46

Гистидин 0,78

Аргинин 2,42

Аспарагин 5,64

Треонин 2,53

Серии 2,73

Глутамин 5,30

Пролин 1,5

Глицин 2,05

Алании 2,58

Валин 2,05

Мети онин 0,58

Изолейцин 2,07

Лейцин 3,07

Тирозин 1,59

Фенилаланин 1,69

Цистеин 0,75

Итого 41,09.

Пример. Культуру Candida boidinii штамм ИБФМ у 671 поддерживают на агаризованной среде 8Е следующего состава, г: (NH4) НР04 15

КН Р04 0,7

MgSO4-7Н О 0,8

NaCI 0,05

Микроэлементы, мг:

CaCI> 2Н О 0,66

CuSO4 5Н О 0,16

ZnSO4 6Н О 0,18

MnSO4 4Н О 0,15

СоС1 6Н О 0,18

FeCI3 6Н О 8,35

Витамины:

Биотин, мл 0,0005 р1

Агар, г 20

Вода дистиллированная, л До 1

В качестве источника углерода и энергии используют метанол в виде паров.

Засев инокуляционной среды производят с

Зо

40 косяков после выращивания их в течение

48 ч при 27 — 28 C.

Для выращивания инокулята используют колбу, в которую вносят 100 мл минеральной среды указанного выше остатка. Колбу укрепляют на качалке при 200 об/мип и выращивание проводят при 27 — 28 С 24 ч.

Полученную культуру используют для засева лабораторного ферментера. Ферментер с рабочей емкостью 1,5 л заполняют средой 8Е и инокулятом в количестве 100 мл.

Метанол подают в среду автоматически дозатором и поддерживают на уровне не выше

1%, контроль за содержанием метанола осуществляют с помощью хроматографа «Хром-4» (ЧССР) .

Расход воздуха в ферментере 0,8 — 1,0 л/мин при 500 об/мин мешалки, температура 28 С, рН 5,5 поддерживают автоматически подтитровкой 5% -ным раствором аммиака.

Контроль за ростом культуры осуществляют по сухому весу биомассы и по расходу аммиака.

Выращивание проводят 4 суток, после чего содержание рибофлавина в биомассе

27 мг/л и всего в 1 л содержится 71 мг рибофлавина. Биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием, высушивают лиофильно и взвешивают. Из 1,5 л получают 48 г сухой биомассы, что составляет

32 г/л.

Предлагаемый способ получения рибофлавина по сравнению с известным техническим решением той же задачи позволяет повысить содержание биомассы в 5 — 7 раз, увеличить содержание рибофлавина с 20 мкг/мл до 70—

80 мкг/мл, т. е. в 3,5 — 4 раза.

Способ прост в осуществлении и позволяет использовать более перспективные микроорганизмы и субстрат для их выращивания.

Формула изобретения

1. Способ получения рибофлавина, включающий выращивание микроорганизмов — продуцентов рибофлавина в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отл ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода продукта, в качестве продуцента используют дрожжи вида Candida boidinii, при этом в качестве источника углерода при выращивании дрожжей используют метанол.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют штамм

ИБФМ у 671.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР № 330189, кл. С 12Р 5/04, 1972.