Способ очистки основы питательной среды для выращивания микроорганизмов

Способ очистки основы питательной среды для выращивания микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

О П И С А Н И Е („) 611933

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 20,05:76(21)2353401/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.06.78,Бюллетень )) е 23

2 (51) М. Кл.

С 12 К 1/06

Гасударстаенна)й номнтет

Совета йтнннстроа СССР на делам нзобретеннй н открытей (53) УДК -576.8. .093.1 (088.8) (45) Дата опубликования описании 17.05 78

В, Н. Милютин, Л, Г. Бендас, А. Б. Габрилович, Э. А, Меркуров, В. А. Копылов, E. И, Преображенская и Г. Д. Харабаджахян (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Ростовский-на-Дону государственньгй научно-исследовательский противочумный институт.(54) СПОСОБ ОЧИСТКИ ОСНОВЫ ПИТАТЕЛЬНОЙ

СРЕДЫ ДЛЯ ВЫРАШИВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к области .медицинской микробиологии н может бьтгь использовано при изготовлении сред для выделения и культивирования микроорганизмов. б

Известен способ очистки основы питательной среды для выращивания микроорганизмов, полученной из белково-витаминного сырья от балластных примесей с применением фильтрования jl J .

16

Однако такой способ является недостаточно эффективным, так как не обеспечивает высокого качества основы питательной среды.

Целью изобретения является повышение 1к качества основы питательной среды для вь рашивания микроорганизмов.

Это достигается тем, что к полученной основе добавляют гидрат окиси кальция до рН 10-10 5, смесь подогревают до йй

70-75 С, добавляют двузамешенный фосфоро йо-кислый натрий, смесь вьтдерживатоа при укаэанной температуре, а затем в фильтрат добавляют соляную кислоту до рН.

7,0-7,2. И

Пример 1. 100 л гидролизата, полученного известным способом, помешают в котел емкостью 250 л, добавляют 4 л

30 ного известкового. молока (131" Са(ОН) тта 1 л гидролизата) и тщательно перемешивают в течение 5 мин. Величина рН 10,5.

Гидролизат при такой реакции подогревао ют go 70 С. Для удаления избь)тка кальция в него при тщательном перемешивании вводят мелкими: порциями 900 г сухого кристаллического, двузамешенного фосфорнокисло»

to . натрия (9 г на 1 л гидролизата). Количество введенного фосфата HBTpg$t меньше рассчитанного стехиометрически, так как часть

Са(ОН) остается нерастворенной или связьваесся с вешествами субстрата. После добавления фосфорнокислого натрия исчезает положительная реакция на кальций-ион и появляется положительная, реакция на фосфаты-ион.

Величина рН снижается до 9,5, В течение

15 мин продолжают прогревать, смесь прн о температуре 70 С, затем под давлением, 0,5 атм подают на фильтр ФС- 7. фильтрующим материалом служит бельтинг. После окончания фильтрации фильтр промывают

1933

61

Ю

10 л дистиллированной воды, которая внесе.на в общий объем фильтрата, Аминный азот 260 мг%

Хлоридов в пересчете на хлор-ион l,25%

Фосфатов 20 Ml 9о

Сухих веществ 9%.

Б таком виде гидролизат пригоден для использования в широкой бактериологической практике в качестве основы для жидких и плотных питательных сред.

В табл. 1 приведены данные роста патогенных микроорганизмов на полученной основе.

Таблица 1

Микроорганизмы Среда

Морфология

Число коло .Морфология

Число коло ний колоний колоний

Жидкая

23+1

34+1

ЗО+О

Типичная

Типичная

Плотная

Та же

36+ 1

Пл отная

П р и м е ч а н и е; Среды готовились по общепринятым прописям для соответствующих, возбудителей.

1 1;2%

0,1%

Полная и бьк:трая

В табл, 2 приведены данные роста па тогенных микроорганизмов на средах из

:ухого дрожжевого экстракта, Выход фильтрованного гидролиэата составляет 78 л, B него вводят 5 н. соляную кислоту иэ расчете 20 мл на 1 л фильтрата, Величина рБ снижается до 7,1. Гидролизат прозрачный и сохраняет прозрачность после о автоклавирования при температуре 110 С в течение ЗО мин.

Гидролизат имеет следующие химические по ка за тели:

Основа, полеченная по предложенному способу, имеет полную прозрачность, которая сохраняется и нри подщелачивании, и при сте- 35 рилизации, Основа, полученная по известному с способу, имеет значительную устойчивую о муть, при подщелачивании происходит усиление мутности, при стерилизации - мутность значительная, выпадает осадок. 40

Пример 2, 14 кг сухих углеводородокисляющих дрожжей размешивают с 200 л водопроводной воды. После выдержки в течение ЗО мин дрожжевую массу отделяют цептрифугированием на сверхцентрифуге. Фу 45 гат, собранный s количестве 170 л, коно центрируют вынариванием при 95 С до обьема 15 л. Затем к концентрату добавляют 20% известкового молока из расчета

10 г Са(ОН)2 на 1 л концентрата (всего, о

750 мл)., Смесь нагревают до 70 С,pH смеси достигает 10,6. Затем в горячую смесь дробными порциями добавляют сухой кристаллический двузамещенный фосфорнокислый натрий под контролем качествен ных проб на иов кальция и фосфа1ион в растворе до исчезновения положительной реакции на кальций и появления слабо положительной рекации на фосфат. Раеход фос60 фата составляет B,l г на 1 л концеи?рата

1всего 120 г) рН смеси снижают до 9,3, о

Смесь прогневают пои 70 С в течение

15 мин и профильтровывают под давлением через бельтинг. Фильтр промывают 2 л

0,05%-ного раствора двуэамещенного фосфор» накислого, натрия. Выход фильтрата с промьюными водами составляет 11,5 л. Реакцию фильтрата устанавливают. 18%-ной соляной кислотой на уровне 7,1 на что расходуют 370 мл раствора кислоты.

Нейтральный фильтрат высушивают в распылительной сушильной установке. Он поступает в употребление в качестве дрожжевой основы питательных сред, Это сыпучий, свечло-желтый порошок с характерным запахом дрожжей, гидроскопичный. Сухая дрожжевая основа имеет следующие химические показатели;

Общий азот 4,8%

Аминный азот 3,5 мг%

Зола 27,5%

Хлориды в пересчете на хлор

Фосфор

Растворимость

611933

Таблица 2

Типичная

48+ 7

43+ 5

67+11

Типичная

41+9

Плотная

Та же

Та же

Плотная

Таблица 3

7 2+ 10 Типичная

92+ 1 2 Типичная

)Кидкая

Плотная

V.eh@ Eevae

Та же

38+6

66+ 6

Та же

40+ 4

76+ 18

Y. yes% is

Плотная

V.СЙОРЮРЛ 8 Жидкая

ПримерЗ.К 50 л казеинового гидролнзата, полученного известным способом путем нагревж ия казеина с восьмикратным количеством

5%-ного раствора соляной кислоты под давлением, добавляют 3,3 л 20Ъ-ного известкового молока и смесь нагревают до

75 С. В смеси устанавливают рН 10,8. о

Затем дробными порциями в гидролизат добавляют двузамещенный фосфорнокислый натрий в виде горячего раствора, содержащего 1 кг соли в 1 л до исчезновения положительной качественной реакции на кальций и появления сла бо-положительной реакции на фосфат-ион. Расход фосфорнокислого натрия составляет 10,2 г на 1 л гидролизата. рН смеси снижают до 9,1.

Температуру смеси снова поднимают до о .75 С и выдерживают в течение 15 мин, после чего удаляют выпавший осадок фильтрацией под давлением через бельтинг, фильтр промывают 10 л 0,05%-ного раствора двузамещенного фосфорнокислого натрия. Выход с добавленными в фильтрат промывными водами 41 л. Добавлением 1,6 л

5 н, соляной кислоты реакцию фильтрата доводят до 7,0, после чего подвергают его о стерилизации при 110 С в течение 30 мин, Полученная казеиновая основа питательных сред имеет следующие показатели:

Сухих веществ 12,1%

Общий азот 1,15%

Аминный азот 480 мг%

Хлориды в пересчете на хлор-исн 2,2О

Фосфаты, мг% 38

Прозрачность Полная

Прозрачность после стерилизации Полная

Из полученной основы по общепринятым прописям) приготовлены жидкие и плотные питательные среды (результаты испытаний нх ростовых свойств приведены в табл. 3).

611933

Способ очистки основы питательной среды для вырашивання микроорганизмов, полученной из белково-витаминного сырья, от. балластных примесей с применением фильтрования, отличающийся тем, что, с целью повышения качества, к полученной основе добавляют гидрат окиси кальция до рН 10-10,5, смесь подогревают до 70-75 С, добавляют двуэамещенный фосфорнокислый натрий, смесь выдерживают при укаэанной температуре, а затем в фильтрат добавляют соляную кислоту до рН 7,0-7,2, Источники информаций, принятые во внимание при экспертизе:

1. Лабинская А..С. Микробиология с техникой мн> ;робнологических исследований, М„

1972

Составитель С. Малютина

Редактор А. Бер Техред Ц. Андрейчук

Корректор В. Сердюк

Заказ 3403/26 Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Предлагаемая основа обладает преимушеством по сравнению с известной по такому важному физическому свойству как прозрачность, Среды, приготовленные из нее, являются более продуктивными. при выращивании патогенных микроорганизмов, Эффект от применения изобретения наблюдается в повышении качества и стандартности применяемых в медицине, ветеринарии и других отраслях питательных бактериоло-® гических сред. При помощи предлагаемого способа для изготовления полноценных питательных сред могут быть использованы новые, ранее не применявшиеся виды сырья (в том числе непищевые). Благодаря этому снижается стон- мость сред и для пищевой промышленности сохраняется мясо и другие ценные продукты, 8

Формула изобретения