Способ получения 5- инозиновой кислоты

Способ получения 5- инозиновой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О „.фЙЙе

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 61,5130

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 30.09,76 (21) 2408841/28-13 с присоединением заявки ¹(23) Приоритет (43) Опубликовано 15,07,78,Бюллетень № 26 (45) Дата опубликования описания ÂÚ.06.?8 (51) М. Кл.

С 12 З 13/06

Госудврственнв1й иомитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 668.394 (088.8) (72) Авторы изобретения

Л. И, Ерохина, Л, А. Казаринова, Н. С, Лукин и А. А. Нудлер

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (?1) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-ИНОЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению 5-инозиновой кислоты методом глубинной ферментации с помощью микроорганизмов, и может быть использовано в пищевой промышленности для улучшения вкусов ых ка ч ест в п и щи.

Известно несколько способов получения

5-инозиновой кислоты путем микробиологического синтеза.

Известен способ, основанный на способности культур Breviaacterium ammoniagenes, Nicrococus glutamicus, Micr sodonensee и др. синтезировать 5-инозиновую кислоту из ее предшественника — гипоксантина, добавленного извне или образованного другой культурой (1).

Известны также способы получения 5-ино зиновой кислоты, заключающиеся в прямой ферментации кислоты.

Преимущество прямого способа получения 5-инозиновой кислоты состоит в том, что он не требует использования дорогостоящих предшественников — гипоксантина и инозина, добавляемых к среде в виде чистых кристаллических препаратов, либо в виде культуральной жидкости, полученной в результате предварительного культивирования их продуцентов. Однако для достижения высоких выходов 5-инозиновой кислоты путем прямой ферментации в питательHhIx средах в известных спосооах используют чистые препараты аминокислот, витаминов, пуринов, поверхностно-активных веществ.

Известен способ получения 5-ииозииовой кислоты, путем глубинной ферментации продуцента Briviaacterium ammoniagencs «a питательной среде, содержащей источник углерода, азота, необходимые минеральные соли в присутствии источника ростовых фак1О торов с последующим выделением целевого продукта (2) .

Этот способ является наиболее близким решением к предлагаемому изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту.

15 По известному способу получают в культуральной жидкости 7-10 г)л 5-инозиновой кислоты.

В Советском Союзе производство 5-пнозиновой кислоты микробиологическим синтезом не осуществляется из-за OTcvTcTBHR гс способа, доступного для организации отечественного производства этого нуK;IcoTHäa.

Цель предлагаемого изобретения заключается в создании более простого и дешевого микробиологического способа получения

g5 5-инозиновой кислоты на основе использова615130 ния отечественных штампов микроорганизмов и питательных сред, содержащих простые и доступные компоненты, производимые отечествен ной промы шлеи н остью.

Цель достигается тем, что по предлагаемому способу в качестве продуцента 5-инозиновой кислоты используют штаммы Briviaacterium ammoniagenes ВНИИгенетика-377 и ВНИИгенетика-380, а в качестве источника ростовых факторов — кукурузный экстракт или автолизат дрожжей.

Эти штаммы получены в результате применения генетико-селекционных методов работы, в частности приобретения резистентности к 8-азагуанину. Штаммы хранятся в Центральном музее промышленных культур микроорганизмов ВНИИгенетика под регистрационными номерами ЦМПМ

 — 1366 и ЦМПМ В вЂ” 1367, соответственно.

В предлагаемом способе может быть также использован известный штамм ВНИИгенети ка — 255 — 5.

Эти штаммы требуют для роста и биосинтеза 5-инозиновой кислоты в глубинных условиях ферментации аденин, цистеин, биотин и ряд других витаминов группы В (тиамин, пантотеновую кислоту, никотиновую кислоту). Вместо чистых препаратов аденина, аминокислот, витаминов в питательных средах предлагаемого способа используют отходы пищевой промышленности — кукурузный экстракт, а также дрожжевой автолизат, кормобактерин, выпускаемые отечественной микробиологической промышленностью. В качестве источника углерода может быть использована техническая глюкоза.

Штаммы ВНИИгенетика — 377 и — 380 по культурно-морфологическим признакам идентичны штамму 255 — 5.

В отличие от известного штамма Br.

"ammoniagenes 255 — 5 оба штамма обладают способностью к росту на синтетической среде в присутствии 8-азагуанина. Кроме того, штамм Вг. ammoniagenes ВНИИгенетика—

377 отличается пониженной потребностью в аденине для биосинтеза кислоты, а штамм

ВНИИгенетика — 380 накапливает меньшее количество побочных продуктов.

Пример 1. Культуру штамма BreviBacterium ammoniagenes ВНИИ генетика 377 выращивают в течение 24ч при 28 С на агаризованной среде Хоттингера. Затвм петлей высевают в колбы Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащие 100 мл посевной среды следующего состава, /ц.

Глюкоза 2,0

Пептон 1,0

Дрожжевой экстракт 1,0

NA Сl 0,25 в водопроводной воде при рН 7,2, при давлении 0,8 атм в течение 30 мин.

Посевной материал выращивают на качалке (220 — 240 об/мин) в течение 18 — 24 ч при 30 С. Полученный посевной материал передают в количестве 10 об. о/o в колбы указанной емкости, содержащие 30 мл ферментационной среды следующего состава, /o.

Глюкоза 10,0

Кукурузный экстракт 4,0

КН РО 1,0

К НРО, 1,0

xgso.Ä 1,0 в водопроводной воде (рН среды до стерилизации доводят до 5,0 фосфорной кис10 лотой, а после стерилизации — до 7,65 н. раствором КОН(при давлении 0,8 атм в течение 30 мин.

После стерилизации к ферментационной среде добавляют раствор мочевины, стерилизуемый отдельно при 0,5 атм в течение 30 мин, до конечной концентрации 0 6О/о.

Ферментацию проводят на качалке (220 — 240 об/мин) при 30"С. После 144 ч ферментации в культуральной жидкости накапливается 10,3 г/л 5-инозиновой кислоты.

Пример 2. Культура и условия выращивания посевного материала те же, что в примере 1. В составе ферментационной сре25 ды, приведенном в примере 1,4 /p кукурузного экстракта заменяют на 0,7О/р автолизата дрожжей и добавляют 30 мкг/л биотина.

Режим стерилизации, засев ферментационных колб и условия ферментации как в примере 1. После 144 ч в культуральной жидкости образуется 8,0 г/л 5-инозиновой кислоты.

Пример 3. Культуру штамма Breviaacterium ammoniagenes ВНИИгенетика — 380 выращивают на агаризованной среде в таких

3s же условиях, как в примере l. Выход 5-инозиновой кислоты после 144 ч ферментации сост а вл ят 10,2 г/л.

Пример 4. Культуру штамма Br. ammoniagenes ВНИИ-генетика — 380 выращивают на посевной среде следующего состава, о/o..

Глюкоза 2,0

Кукурузный экстракт 2,0

NaC1 0,25 рН 7,2, 4 при давлении 0,8 атм в течение 30 мин.

Условия выращивания посевного материала, состав ферментационной среды и режим стерилизации такие же, как в примере 1. Выход 5-инозиновой кислоты после 144 ч ферментации составляет 9,9 г/л.

Пример 5. Штамм — продуцент Breviaacterium ammoniagenes ВНИИгенетика 225 — 5. Состав сред, условия выращивания посевного материала и ферментации те же, что и в примере 1. Выход 5-инозиновой кислоты после 144 ч ферментации составляет 10 г/л.

По предлагаемому способу на ферментационной среде с технической глюкозой, фос60 фатами калия, солью магния, автолизатом

615130

Составитель М. Ларина

Техред О. Луговая Корректор А. Лакида

Тираж 568 Подписное

Редактор В. Блохина

Заказ 3846/19

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 дрожжей, кукурузным экстрактом с помощью адениннедостаточных штаммов ВНИИгенетика 225 — 5, ВНИИгенетика — 377 и

ВНИИгенетика — 380 Brev. ammoniagenes получают в культуральной жидкости 8 — 10 г/л

5-инозиновой кислоты. В посевных средах используют техническую глюкозу, кормобактерии, кукурузный экстракт, дрожжевой экстракт, соль натрия, пептон.

Совокупность предлагаемых признаков, заключающихся в применении новых штаммов-продуцентов ВНИИгенетика — 377 и — 380, способных осуществлять биосинтез

5-инозиновой кислоты на простых и доступных по составу средах, содержащих техническую глюкозу, дрожжевой автолизат, кукурузный экстракт, обеспечивает простой и дешевый способ получения 5-инозиновой кислоты.

Формула изобретения

Способ получения 5-инозиновой кислоты путем глубинной ферментации продуцента

BreviBacterium ammoniagenes на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, необходимые минеральные соли, в присутствии источника ростовых факторов с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения и удешевления способа, в качестве продуцента 5-инозиновой кислоты используют штаммы Breviaacterium ammoniagenes ВНИИгенетика — 377 и ВНИИгенетика — 380, а в качестве источника ростовых факторов — кукурузный экстракт или автолизат дрожжей.

Источники информации, принятые во вни15 мание при экспертизе:

1. Патент США Хо 3268415, кл. 195 — 28, 1966.

2. Agricul Bid. chem, 1971, 35, 7, 1061.