Способ измерения электрофоретического переноса высокомолекулярных соединений

Способ измерения электрофоретического переноса высокомолекулярных соединений

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ к ьетоеекомю сеидвтельствю (61) Дополнительное к авт. свиа-иу (11 615936

eels она»

Социалнстииасюа

Реслубпнк

2 (511 и. Кл. (22) Заявлено 09.02.77(21) 2453490 18-25, А 61 1е 1/30

С 01И 27У22 с присоединением заявки №

Геефвретвенньй неннтет

6ееете Инннетрев ИР ее денни нюебретеннй н етн зитюй (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.07.78рюллетень № 27 (45) Дата опубликования описания 19.06.78 (53) УДК 543.544 (овв.в) (72) Авторы изобретения

А. И. Перцовский и В, И, Емелькин

Ялтии :кий, научно-исследовательский институт i Физических методов лечении и медицинской климатопогии с (71) Заявитель (54) СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО

ПЕРЕНОСА ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ

СОЕДИНЕНИЙ .

Изобретение относится к физико-химическим методам исследования лекарственного эпектрофореза и микет бйть испспь зовано дпя комплексного измерении ence ,т и3форетич9скогО переноса высокомопещ 4 лярных соединений, например белковю фер ментов и т. и.

В современных физика химических ме тодах исследования лекарственного эпев трофореза применяют разпичные способы

:определении полярности и епектрофоретв ческой подвижности веществ, выбора расю» верителя и оптимума концентрации водо родных ионов в растворителе, сравнения действия разных видов епектрических тюк ков и т, д. 1 и1 2).

Существующие способы подготовки рас творов дпя измерении эпектрофоретичеокого переноса фармакопогически активных веществ не приспособлены дпя определения у высокомолекулярных соединений указанных выше параметров и не позво.. ляют достаточно точно оценить их эпев трофоретическую подвижность, Известен способ «опичественнса о измерения эпектрофоретического переноса фармвхвигически актвввых ветеств $3).

В этом способе раствор исследуемого

5 веществау arраниче нный проницаемы ми мембранами, размещают в среде растворителя, затем проводят впектрофорез и ,по окончании его измеряют разницу кон» центрацин данною о вещества в раствори16 теле боковых отделов.

Однако такой способ имеет погрешноо ти в измерениях за счет диффузии иссле дуемых веществ. Например, способ приемю5 лем дпя низкомопекулярных веществ,диф» фузия которых через проннцаемые мембраны составляет всего 58% от их впеатрофоретической подвижности, но не рас4 счнтан на высокомолекулярные соедине2© ния, медленно движущиеся в эпектрнческом попе, вследствие чего диффузия их через проннцаемые мембраны превышает щюевтрофоретическую подвижнос юь, Эта диф фузия еще более усиливается в процессе

>: отбора проб, что еще больше снижает

615936

НИИПИ Заказ 3967/8 ираж одписное точность измерения апектрофоретическоге переноса.

1Ueab изобретения, - повышение точности комплексного измерения электро» форетического переноса выс окомопекулярных соединений (белков, ферментов и

5 т. д.), Это достигается тем, что в способе измерения апектрофоретического переноса высокомолекулярных соединений, при котором раствор исследуемого вещества в среде растворителя помещают в среднее отделение электролитической камеры, про-водят эпектрофореэ и измеряют конценчрацию вещества, раствор исследуемого вещества перед проведением апектрофоре 5 эа с помошью капроновой мембраны разделяют на две части и после проведения апектрофореэа эти части изолируют одну от другой, Разграничение раствора исследуемогд вещества на две равные части с адинаковой исходной концентрацией вещества и последующая изоляция этих частей пре-1 дотвращают перемешнвание растворов прн заборе лроб, а разница концентраций вещества в обеих частях обусловлена топь ко апектрофоретическим переносом, Измеряют апектрофоретический перенос высокомолекулярного фермента трипсина йутем проведения апектрофореэа, с .размещением раствора исследуемого вещества в среде растворителя и по следующим измерением разницы его концентраций в двух разграниченных частях раствора . 2 мп раствора трипсина в концентрации 15 мкг/мп раз мещают в среднем отделе эаектрапитической камеры, отделенном от боковых отделов, содержащих растворитель, целло; феновой пленкой, не проницаемай дпя 40

«рупномонекулярных ионов трипсина, но легко проходимой дпя низкомапекулярных,. ионов растворителя, .вследствие чего исключается диффузия трипсина и раство ритель при сохранении целостности апви- трической цепи. Раствор трипсина раэграничивают капроновой мембраной с раз мером пор от ЗО. до 70, мкм на две равные части, с одинаковой в них концентрацией ферменте, что предотвращает диффузию вещества через мембрану. Платиновые апектроды помещают в отдельные стаканчики с растворителем,.соеди ненаым мостиками из фильтровапьнай с растворителем боковых отделов камеры, B качестве растворителя используют

0 01%ный раство соляной кислоты с ф рН 3,0. Уровень жидкости во всех емкостях одинаков. Электроды присоединяют к разным полюсам гальванического аппарата и проводят апектрофореэ в течение.

30 мин при плотности тока 0,3 мА/см .

По окончании апектрофореэа растворы в анодной и катодной половинах среднего отдела камеры изолируют один от другого пластмассовой заслонкой и измеряют в них концентрацию трипсина.

После проведения эпектрофореэа концеи трация трипсина в растворе анодной поло вины равна 9 мкгlмл, а катодной21. мкг/мп Следовательно, ионы трипсина двигаются от положительного полюса к отрицательному (т, е, имеют попожитель, ный заряд) и за 30 мин через мембрану проходит 6 мкг фермента, что при площади капроновой мембраны в 3 см составляет 2 мкг.трипсина на 1 см .

Предлагаемый способ нозвопяет иовы сить точность комплексного измерения апектрофоретического переноса высокомо лекулярных соединений, Он позволяет: определять папярность высокомопекулярных соединений, количественно измерять их апектрофоретическую подвижность;сопоставлять особенности переноса высокома» лекулярных соединений различными видами апектрического тока; выбирать ваство» ритель и .оптимальную концентрацию водо родных ионов в растворителе.

4 ормула. изобрете ния

Способ измерения электрофоретическо го переноса высокомолекулярных соедине ний, нри котором раствор исследуемого вещества в среде растворителя помещают в среднее отделение апектропитической камеры, проводят апектрофорез и измер ас; концентрации вещества, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повьцпения точности измерения, раствор исследуемо ро вещества перед проведением апектрофореэа с помощью калроновой мембраны разделяют на две части и после проведвния апектрофореза эти части изолируют одну от другой»

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1, Авторское свидетельство СССР а 3О3661, л. А 61 К 1/Зо, 1971, 2, Авторское свидетельство СССР

М 464917, кл. А 61 Я 1/30, 1974.

3. Улацик В. С„1 еория и практика лекарственного апектрофореза, Минск, Бела сь 1976 с, 34,