Способ получения антибактериального вещества

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

eyh_#_V He т(,; 8è÷åñí д:1

»

»...ВаФи o»åê rip

Союз Советских

Социалистических

„л (и) 618()53

СПИ

Республик (61) Дополнительный к патенту— (22) Заявлеио27,09,73 (21) 1968937/30-1 5 (23) Приоритет — (32) 12.10.72 (31) 297173 (33) США (43) Опубликовано30,07.78.Бюллетень №28 (45) Дата опубликования описания 25.07.78

2 (51) М. Кл.

С 12 Д 9/22

Государственный номнтет

Совета Инннстраа СССР по делам нзобретеннй н открытнй (53) УДК 615.779.9 (088.8) Иностранцы

Джон Генри Эдвард Джеймс Мартин, Гомер Дэвид Треснер и Джон Н орман П ортер (США) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Американ Бианамид Компани" (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБАКТЕРИАЛ ЬНОГО

BFLUECTBA

Изобретение относится к способу получения антибактериального вещества, образующегося при выращивании культуры микроорганизма) оса ч3 а gp. ИЧЯ)„¹ 56 46.

Известны способы получения антибактериальных веществ путем выращивания продуцентов из различных культур микроорганизмов в питательной среде, содержащей ассимилируемые источники углерода, азота и неорганические соли, с последующим !О выделением целевого продукта общеизвестными приемами jig.

1Лелью изобретения является получение нового эффективного антибактериального вещества, расширяющего арсенал извест ных антибактериальных средств, Поставленная цель достигается тем, что культуру микроорганизма NOCapj j a

&$-Н3Ч L М 5646 выращивают в водной питательной среде, содержащей ассимилируемые источники углерода, азота и неорганические соли, в аэробных условиях в течение 45-240 ч с последующим выделением целевого продукта с помощью З ионообменной колонки в виде смеси или отдельных фракций.

Целевой продукт выделяют в виде альфа-, бета- или гамма- активных фракций.

Новые антибактериальные средства обозначены: ВМ 123 Х,, ВМ 123/ ) и

ВМ 123 $ . Штамм-продуцент нового антибиотика выделен из образца почвы в

Оцеола (Айова) и хранится в коллекции культур "Американ цианамид компани, Пирл Ривер, Нью-Йорк, под номером

ВМ1 23. Жизнеспособная культура нового микроорганизма хранится в Culture

СоИее4ort Laboratory, 5orhHer 1Ж Rization Research and Ъечет.орп еит. Dlp

of )ф-чсиИи е,7eovia, И i иотб, под номером 5646.

Культуральные признаки штамма приведены в табл. 1.

Физиологические признаки штамма приведены в табл. 2.

Данные об утилизации штаммом источников углерода приведены в табл. 3,»

618053

Таблица1

Агар с дрож- Умерен- Беловатый, жевым ный светлый акс трактом

Горчичный (3 е) От бесцветноro до желтовато-зеленого

Агар с аспа- Умерен- Беловатый рагиновой ный (следы) декстроэой

Янтарный (3a с) Рыжеватокоричневый

То же

Беловатый, . светлый

Среда

Бенедикта (4Я с) Среда

Беннета

Беловатый (следы) То же

Неоргани- Следы ческие со лик ракмал

Бесцветный

Агар с овся- Следы ными хлопьями Кустера

То же

То же

Среда Чапека Следы

Умеренный

Бел оважй, сне алый

Незначительный

Бесцветный

То же

Незначи- То же тельный

Кормовой агар

Среда Хикея и Треснера

Агар, с картофельной декстразой

Агар с тс матной пастой и овсяной мукой

Незначителный

B оздушный мицелий отсутствует

Воздушный мицелий отсутст" вует

Воздушный мицелий отсутствует

Верблюжьей шерсти (31 е) Верблюжьей шерсти (3 je) Темные поверхности в субстрате мицелия

Коремия на поверхности мицелия

Периферические поверхности колоний становятся оливк ов о-зелеными

Слегка морщинистая поверхностьь коремия на поверхности мицелия

Слегка морщинистая поверхность

618053

Продолжение табл. 1

Среда

Рост

11вет воздуш ного мицелия

Приме чание

Следы

Рисовый. агар

Агар Вайн-, Умеренштейна ный о

П р и м е ч а н и е: 1. Инкубация 14 дней, 32 С

2. Растворимые пигменты не образует.

Таблица2

Незначи- Не разжижает тельный

Желатина

Хороший То же

То же

То же

Пептоновый агар с железом

24-28(ч) Пурпурное молоко

Хороший

Умеренный

Бульон с органическим нитратом йрожжевой экстракт, агар +. хлористый натрий (4,7,10 и 13%ный) 1(вет культуры с обратной стороны

От бесцветного до желтоватого

Хороший В осстанавливает нитраты в нитриты

Хороший М еланиновый пигмент не образуется

Отсутствие пепто низации или створаживания

Переносим ость к хлористому натрию 4%, но - 7%

618053

Таблица3

У тилизация

Адонит

$ -Арабиноза

Глицерин

С -Фруктоэа

Ь

< -Инозит

Мальтоза

Сахароза

g-Трегалоза

J -Ксилоэа

Йекстроза

Отрицательный к онтроль

3 - хорошее использование, 2 — удовлетворительное, 1 — слабое, 0 - не испольэуеп:я.

Лактоза

d -Маннит

Салицин

d -М олибиоэа

Д -Раффиноза

Рамноза

Химический с остав. Микроорганизм 45 относится к клеточной оболочке типа Pf т.е. содержит меэо 2,6-диаминопимелиновую кислоту и по сахаридам относится к типу А, т.е. содержит арабиноэу и галактоэу. Метилированный экстракт клеток so обнаруживает при газовой хроматографии картину жирных кислот, аналогичную продуцируемой МОСа Ыа ОИЕЮ йеа

М С С М 3308.

Микроморфология. Воздушный мицелий вырастает иэ мицелиального субстрата в виде слаборазветвленных умеренно длинных извилистых элементов, обычно заканчивакнцихся удлиненными примитивными спиралями. Извилистые элементы неравномерно сегментированы на короткие эллиптические — цилиндрические секции, легко расчленякициеся, Спиральные конечные части сегментированы менее заметно. Размер сегментан обычно в интервале 0,8-1,7 ммк х0,,3-0,5 ммк, в среднем 0,4 ммк х 1,2 ммк.

Эксперименты с предяарительным выделением тонкослойной и бумажной хроматографией показали, что в процессе аэробной ферментапии NOeOf Àà вр. ЯЗЛ Ь

Мв 5646 продуцируюжя по крайней мере три антибиотика: ВМ123 <, ВМ123/3

:и ВМ123 g,. Èçó÷åèèå питательных

618053

l0 сред выявило наличие двух типов питательных смесей: типа гамма, продуцирую щей, в основном, ВМ123 g с небольшими количествами ВМ123 ф и ВМ 123 о6, и типа альфа, продуцирующей в основном

ВМ123 с6 . Процесс ферментации идет, главным образом, в направлении из.— бирательного продуцирования ВМ 1 23 альфа.

Выращивание NoCardia SP.ЯКР) ¹ 5646 можно проводить в различных жидких культуральных средах. Среда, пригодная для продупирования новых антибиотиков, включает; ассимилируемые источники углерода, такие как крахмал, сахар, меласса, глицерин и т.п; ассимилируемые

15 источники азота, такие как протеин, гидролизаты протеина, полипептиды, аминокислоты, замочная жидкость ржи (кукурузы) и т.п.; и неорганические анионы и катионы, такие как калий, натрий, кань20 ций, сульфаты, фосфаты, хлориды и т.п.

Микроэлементы-бор, молибден, медь и т, п. вносятся в виде следов или примесей других компонентов смеси. Процесс ведут при аэрировании (в танках и

25 баллонах) стерильным воздухом через массу или на поверхности ферментативной среды, Необходимо также механическое перемешивание в танках. При надобности можно внести противовспенивающее средство, например лярд.

Для получения ВМ123 е инокулум Цо

pppgjg gy ЩЯ М. 5646 для колб-качалок получают инокуляцией 100 мл стерильной жидкой среды следующего состава, r:

Мясной экстракт 3

Бактотриптон 5

Дрожжевой экстракт 5

Крахмал 24

Декстроза 1

В ода до 1000 (мл) рН среды доводят едким натром до 7,0.

Колбы или матрацы (емкостью 500 мл)

45 инкубируют при 25- 29оС предпочтительо

1 но 28 С, и энергично перемешивают на ротационной качалке 30-48 ч. Отбирают порции по 100 мл прививочного материа50 ла и инокулируют.1 л и 12 л той же среды в 2-х и 20-литровых стеклянных ферментерах. Инокулированную смесь аэрируют стерильным воздухом в процессе роста в течение 40-55 ч. Эти партии

55 инокулума используют для H) окуляции танков-ферментеров.

Для продуцирования ВМ123 х в танке-ферментере используют среду следующего состава, г;

Бак топептон 10,0

Декс тр оза 10,0

М еласса 20,0

Железо-аммоний лимонно-кислый 0,1

Карбонат кальция 1,0

В ода L1o 1000(мл)

Танк инокулируют 3-10% вышеполученного инокулума, Аэрацию проводят из расчета 0,2-0,8 л стерильного воздуха на 1 л бульона в минуту, и ферментационную смесь перемешивают мешалкой при 50-200 об/мин. Температуру подо держивают 25-29 С,. предпочтительно

28 С. Ферментация длится 180-240 ч, По окончании ферментации отфильтровывают ферментационную массу, содержащую ВМ123 Ж, предпочтительно при помощи диатомовой земли или других обычных фильтровальных вспомогательных средств. Обычно мицелиальный

"пирог" промывают водой и объединяют фильтрат с промывной жидкостью. Объем фильтрата составляет в среднем 30 л.

Доводят рН до 6,5, добавляют фтористый натрий, и смесь перемешивают около часа. Образовавшуюся суспензию фильтруют, например через диатомовую землю.

Фильтрат перколируют через колонку с

AC — 50 (Ng ) (50-100 меш) со сла бокислой смолой (выпускаемой фирмой

"Ром и Хаас", Филадельфия, Пенсильвания) с объемом слоя в 1 л. Колонку со смолой промывают 4 л воды.ВМ123< элюируют, пропуская через колонку 0,3н. серную кислоту. Элюат собирают во фракции обшим объемом 500 мл. Фракции 1-7, содержащие действующее начало ВМ123а объединяют и доводят едким барием до рН 7,2, Образовавшийся сульфат бария отфильтровывают, получают прозрачный фильтрат. Этот фильтрат пропускают через колонку с П, С вЂ” 50 (Н ) с объемом слоя в 650 мл. Колонху промывают водой и элюируют по вышеописанному методу 0,3 н. серной кислотой, Активные фракции (1-7) также доводят — при помощи едкого бария — до рН 7,0 и отфильтровывают, получают прозрачный фильтрат. Этот раствор упаривают под вакуумом для последующей хроматографии на угле. Гранулированный Дарко

С-60 (20-40 меш) суспендируют в воде, переносят в стеклянную колонку и отстаивают, сливают избыток воды и концентрат ВМ123с медленно пропускают в колонку. Загруженную колонку промывают водой и проявляют 50%-ным водным метанолом, собирая фракции по

50 мл. Объединяют активные фракции

618053

12 (18-68), (водный слой) упаривают под вакуумом, лиофилизируют, получают белый твердый остаток В1ф123Ф . Дополнительное количество ВМ123 <х можно извлечь дальнейшим проявлением блонки с углем 50%-ным подкисленным водным метанолом (pH 1,8, серной кислотой), получая дополнительно 16 фракций, Кислые, фракции объединя»от, упаривают под вакуумом (до водной фазы), доводят рН едким барием до 7,2, фильтруют и лиофилизируют.

При ферментации для избирательного продуцирования в основном ВМ123 6 и BN123 g приготовление инокулума производят так же, как для ВМ1ДЗсб..

Для получения BM123 g в танке-ферментере обычно используют среду следующего состава, г:

Декс тр оза lO,0

Мясной экстракт 4,0

Бактопептон 4,0

Хлористый натрий 2,5

Дрожжевой экстракт 1,0

В ода До 1000 (мл) рН доводят едким натром до 7,0.

Танк инокулируют 3-,10% полученного инокулума. Аэрируют из расчета 0,2-0,3л стерильного воздуха на 1 л бульона в минуту, ферментационную смесь перемешивают мешалкой (50-200 об/мин).

Температуру поддерживают 25-.29 С, о обычно около 28 С. Продолжительность ферментации 45-85 ч.

Отфильтровывают ферментационную массу, содержащую ВМ123 ф и ВМ123

1 используя в качестве фильтровального вспомогательного средства,1% диатомовой земли. Пирог" промывают водой. Фильтрат объединяют с промывной жидкостью и пропускают через 10- литровый слой

1RC 50 (Ny ) под действием тяжести, со скоростью потока 330 мл/мин. Загруженную колоцку промывают водой. .Пействующее начало элюируют из колонки, используя 0,3,н. серную кислоту.

Зпюат собирают в две порции. Первая порция содержит элюат с рН 7,0-5,0.

Первую поршпо отставляют из-за высокого содержания соли, вторая порция имеет рН около 1,4. Эту кислую порцию доводят едким барием до рН 6,0. Образующийся сульфат ба-, рия отфильтровывают через диатомовую землю. Пирог" промывают водой, объединяют фильтрат с промыв»ной жидкостью и упаривают под вакуумом. Концентрат нагревают на паровой бане до 50 С и вносят в горячий раствор соли Рейнеке

» 150 г на 1500 мл при 75 С). Горячий раствор оставляют на 48 ч, затем отфильтровывают, получают пурпурно-красное твердое вещество. его промывают водой. Влажное твердое вещество перемешивают со смесью воды и бутанола-1

Ъ (2:5) и доводят рН до 1,5 при помощи

0,25 н. серной кислоты. Смесь отфиль» тровывают,, и водную фазу фильтрата доводят до рН 6-8, вновь фильтруют и !

О

- второй фильтрат упаривают под вакуумом.

Койцентрат пропускают через колонку со 100 мл Дауэкс 1-х4 (GE ) и лиофилизируют.

Порошкообразную целлюлозу смешивают с верхней фазой, полученной нри

»5 смешении 90%-ного фенола, хлороформа, пиридина, уксусной кислоты (в соотношении 1500: 300: 45: 45: 750).

Затем постепенно загружают в стеклянную колонку, через верхнюю часть, вы шеописаннуЬ лиофилизированную смесь компонентов, растворенную в верхней фазе, и смоченную порошкообраэную целлюлозу (1:2 объем/вес). Колонку проявляют под давлением воздуха иэ резервуара, присоединенного к верхней части стеклянной колонки. Всего собирают

75 фракций (по 25 мл каждая), ucrîëüçóÿ автоматический коллектор фракций.

Активность устанавливают биоавтографией бумажных кружков, высушенных на воздухе и промытых эфиром, до нанесения на большие агаровые плас»

35 тины, засеянные К Qt(BONO»»» 0s, штамм

АЗ, Наблюдаются две отдельные активные полосы, Одна из них состоит (ВМ123 ) из фракций 3-18, а вторая (ВМ123 fb ) — из фракций 31-52. Объе40 диняют фракции 3-18 и вносят в хлороформ, образуется двухфазная система.

Нижнюю фазу оставляют, а верхьюю водную фазу (рН 4,5) дважды экстрагируют равным объемом эфира для удаления оставшегося фенола, доводят до рН 6,5

45 -М используя Я 45 (ОН ) лиофилизируют и получают ВМ123 g . Объединяют фракции 31-52, обрабатывают их аналогичным образом и получают ВМ123 P .

Три антибактериальных средства срав-. нивают»»» ч» 1» о, используя разнообразные грамположительные и грамотрицательные бактерии, а также М,бнифщйа методом разведения агара. Результаты в виде ( минимальной ингибирующей концентрации приведены в табл. 4. Для сравнения взят сульфат гентамицина.

Антибактериальные вещества ВМ 1 23 а .ВМ123 р и ВМ123 II действуют»д ч»чО ка различные микроорганизмы. Их можно

618053

21

22 ной фазы, доводят рН едким барием до

7,2, фильтруют, лиофилизируют, получают еще 1,5 г ВМ 123а, Обе порции твердого, вещества представляют, по данным тонкослойной хроматографии, смесь а 1 и ой 2. Этот

ВМ 123 а: сушат 16 ч в сушилке бдергальдена над кипящим этанолом, затем производят микроанализ.

ВМ 123 C не.имеет четкой точки плавления, постепенное разложение начи1О о нается около 200 С. Микроанализ,%:

С 33,89; Н 5,71; И 11,88 (непосредсч венно 35,40), зольность О. ВМ 123 и пропускает свет в области 220-340 нм

35 в 90%ном метаноле при концентрации

200 мкгlмл.

ja) > =+52 (с 1,00 в Н О).

ВМ 123 K обнаруживает характерную абсорбцию в инфракрасной области спектра при длине волны, см 1: 780, 815, 950, 1050, 1110, 1250, 1340, 1395, 1560, 1670, 1705, 2950, 3330, Пример 4. Ферментация с применениемМОСЯ ЙЯ Sp.ЯЯ „No 5646 и среды, обеспечивающей цродуцирование ВМ 123с ( и BlV!123 g .

Приготавливают ферментационную среду следующего состава. r:

Декстроза 10,0 î

Мясной экстракт 4 Q

Бактопептон 4,0

Хлористый натрий 2,5

Дрожжевой экстракт 1,0

Вода lie 1000 (мл)

Едким натром доводят рН до 7,0.

Ферментационную среду стерилизуют

60 мин при 120 С паром под давлением

8 кг/м, рН стерилизованной среды

6,7. 1350 л стерильной среды в 4о

2000-литровом танке-ферментере инокулируют 150 л инокулума. Ферментацию о ведут при 28 С, используя лярд в качестве противовспенивающего средства.

Аэрацию ведут из расчета 0,4 л возду- 45 ха на 1 л среды в минуту, Массу перемешивают при 50 об/мин. Ферментацию ведут 85 ч, Пример 5, Выделение ВМ123ф и ВМ123 g .

1350 л ферментационной массы, попученной описанным в примере 4 способом, фильтруют, используя 1% диатомовой земли в качестве фильтрующего средства, пирк " промывают 50 .л воды и отстаивают. Объединенные фильтрат и промывную жидкость пропускают через 10-литровый слой 1 2 С 50 (Ng ) под действием собственной тяжести со скоростью потока 330 мл/мин. Колонку промывают затем 30 л воды, Активные компоненты элюируют иэ колонки, используя для этого

170 л 0,3 н. серной кислоты. Элюат собирают в две порции. Первая порция содержит элюат с рН от 7,0 до 5,0. Первые

45 л отстаивают из-за высокого содержания соли. Вторая порция (120 л) имеет рН 1,4. Эту кислую порцию доводят едким барием до рН 6,0, отфильтровывают образовавшийся сульфат бария, используя при этом 1 кг диатомовой земли в качестве фильтрующего средства "пирог промывают 5 л воды, фильтрат вместе с промывной жидкостью упаривают под вакуумом до объема 2 л. Концентрат нагревают на паровой бане до 50 С и вназят в горячий раствор соли Рейнеке (150 г в 1500 мл воды при 75 С), Горячий раствор оставляют на 48 ч при комнатной температуре, затем фильтруют и получают твердое вещество краснолилового цвета, которое промывают 600мл воды, Влажное твердое вещество перемешивают с 2 л воды и 5 л бутанола-l, доводятрН до 1,5 при помощи 0,25 н. серной кислоты, Смесь отфильтровывают и водную фазу фильтрата обрабатывают твердым едким барием, доводя рН до 6,5.Смесь отфильтровывают и упаривают под вакуумом, доводя объем до 350 мл. Концентрат пропускают через колонку (объемом 100 мл) с Йауэкс 1-х4 (Cl ), лиофилизируют и получают 50 r продукта. ".

250 г порошкообраэной целлюлозы смешивают с 200 мл верхней фазы, полученной при смешении BQ/0-ного фенола, хлороформа, пиридина, уксусной кислоты, во ды (1 500:300: 45:45:7 50 по объему) .

Затем через верхнюю часть колонки загружают смесь 10 r лиофилизированного продукта в 16 мл верхней фазы и 20 r увлажненной порошкообразной целлюлозы.

Колонку проявляют, используя воздух под давлением 0,2 кгlм из резервуара, присоединенного к верхней части стеклянной колонки. Собирают 75 фракций по

25 мл.

Активность устанавливают биоавтографией смоченных бумажных кружков, вы- . сушенных на воздухе и промытых эфиром, до нанесения на большую агаровую пластину,, засеянную К.ри60ФО ФЩЬ штамм Ag. Наблюдаются две отдельные активные полосы. Одна из них (BN123g} состоит из фракции 3-18, а вторая (ВМ123 P ) — из фракций 31 — 52. Объединяют фракции 3-18, добавляют 1400мл

}хлороформа, получают двухфазную.систе618053

25 му. После разделения верхнюю водную фазу (рН 4,5) дважды экстрагируют равным объемом эфира для удаления остаточного фенола. рН водной фазы доводят до 6;5 при помощи 1 R 45 (OH ), лиофилизируют и получают 1,62 г BN123 g .

Объединяют. фракции 31-52, обрабатывают аналогично и получают 1,05 г

ВМ123 ф.

1 г ВМ123 g перемешивают 15 мин с 20 мл абсолютного метанола, суспенэию отфильтровывают, получают 305 мг твердого вещества, фильтруют, к фильтрату приливают 60 мл эфира, получают суспензию белого хлопьевидного материала в эфире-метаноле, отфильтровывают, 15 получают белое твердое вешество и беловатый фильтрат. Твердое вешество промывают на воронке Бюхнера эфиром и сушат на воздухе, получают 602 мг

ВМ123 g, сушат под вакуумом в су20 шильном аппарате Абдергальдена над кипящим этанолом 16 ч.

ВМ123 F не имеет четкой точки плавления, постепенное разложение нао чинается около 200 С.

Микроанализ,%; С 46,13; Н 6,65;

К 17,0 (непосред. — 24,96); зола

0,90, Соединение обнаруживает в 90 /-ном метаноле максимум абсорбции в УФ-об30

Ф/ ласти при,286 нм (Е „,,„=200).

«ф) = + 53;8 (С=1,004 в H20)

ВМ 123 обнаруживает характерную абсорбцию в инфракрасной области спектра при длине волны, см: 765, 870, -i

980, 1045, 1112, 1175, 1230, 1340, 1400, 1465, 1510, 1570, 1610, 1660, 2190, 3333, 670 мг ВМ123 Р перемешивают с

12 мл метанола в течение 15 мин, отфильтровывают, в фильтрат приливают

36 мл эфира, получают белый осадок.

Его собирают на фильтре, промывают эфиром, сушат на воздухе, получают

466 мг ВМ123Р, который сушат под вакуумом над кипящим этанолом в течение 4 ч (до микроаналиэа).

ВМ123 не имеет четкой точки плавления, но начинает постепенно разлагаться около 200 С.

Микроанализ,%: С 47,53; Н 7,39;

16,54; зольность 1,04. В 98 /-ном метаноле он обнаруживает максимум

УФ-абсорбции при 286 им при Е, =200, Положение максимума не изменяется и 55 зависимости от рН.

$0) =+53,2 (С= 1,250 в Hg0).

ВМ 123 Р обнаруживает характерную абсорбцию в инфракрасной области спектр а при длине волны, см : 826, 870, 922, 980, 1035, 1105, 1170, 1220, 1340, 1390, 1510, 1560, . 1600

1670, 2950, 3080, 3350, Пример 6. Распределение на бумаге и тонкослойная хроматография активных компонентов.

Антибактериальные средства можно различить методом хроматографии на бумаге. Лля этой цели на полоски ватманской бумаги %1 наносят водный или метанольный раствор веществ и уравновешивают 1-2 ч в присутствии верхней и нижней фаз. Полосы проявляют с нижней (органической) фазы, полученной при смешении 900/-ного фенола; м-крезола; уксусной кислоты, пиридина, воды (100:

:25:444 75 по объему). Полоски удаляют из камеры, сушат на воздухе 1-2 ч, промывают эфиром для удаления остаточного фенола и подвергают биоавтографии на больших пластинах агара, засеянных

<. иеижой(аь. для ВМ123 А -0,20, 0,47;

ВМ 123 Р -0,62, 0,71; BM123g -0,88. ф и ф -компоненты представляют собой смесь двух антибиотиков. fb компонент состоит из главного антибиотика (=0,62), названного ВМ123ф1 и мень шего компонента ВМ 123 fb 2 (gy =0,71 ) .

Наиболее полярный компонент BN 123 и (Rg =0,20) назван ВМ123 1, а менее полярный (К =0,47) назван BN123e .

ВМ123с6 разделяется на два компонента методом, основанным на тонкослойной хроматографии, на Полиграм Цел !Я

254 с тонкослойной целлюлозой, выпускаемой фирмой Бринкманн Инструментс лимитед", Ныо-Йорк. Тонкослойные пластины с пятнами раствора вещества проявляют водой, содержащей 1% тринатрийцитрата. Зоны проявляют автографически на агаровых пластинах, как описано выше, в результате две эо- ны: ВМ123 сА с К =0,90 и ÂÌ123 0 2 с Ry =0,65.

Формула изобретения

1, Способ получения антибактериальноговещества, отличаю щи йс я тем, что культуру микроорганизма )JQCgtt-.

diO БЯ. КЧР1 % 5646 выращивают в водной питательной среде, содержащей ассимилируемые источники углерода, азота и неорганические соли, в аэробных условиях в течение 42-240 ч с последующим выделением целевого про» дукта с помощью ионообменной колонки в виде смеси или отдельных фракций.

618053

Составитель Л. Мурая

Редактор Н, Хубларова ТехредА. Богдан Корректор H. Тупица

Заказ 4131 Тираж 568 Подписное

UHHHIIH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что, целевой продукт . выделяют в виде альфа, бета или гамма-активных фракций.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Патент США % 3597325> кл. 195 -96, 1971.