Способ иммобилизации кислых протеиназ

Способ иммобилизации кислых протеиназ

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Свциалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДИТВЛЬСТВУ. (И) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 15.07.76(21) 2385116/2Е -04 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.08.78 Бюллетень ph 32 (45) Дата опубликования описания 22.07.78

Гоеударстееиивб иенитет

Совета Миииетрев NCP ае делан иаеаретеиий и еткрытий

В; В, Янишпольский, В. А. Тертых, А. А. Чуйко, E. И. Крыпова, Л. B. Козлов и B. К. Антонов (72) Авторы изобретения

Институт биоорганической химии им. М. М. Шемякина и институт физической химии им. Л. В. Писаржевского (7l) Заявители (54) СПОСОБ ИММОБИЛИЗАЦИИ КИСЛЫХ

ПРОТЕИНАЗ

Изобретение относится к способу попучения иммобипизованных препаратов ферментов, а именно к способу получения. иммобилизованных киспых протеиназ, которые могут найти широкое применение

5 в пищевой, химической, микробиопогической промышленности, а также в лабораторной и медицинской практике. Сорбентами, проходящими дпя этих целей, могут быть кремнеземсодержаыие материалы, инертные в реакционных средах и разрешенные к применению в соответствующих отраслях промышленности (пищевой, медицинской) .

В литературе описано бопьшое число способов иммобилизации ферментов на кремнеземсодержащих носителях. B частности, для иммобинизации киспых протеиназ используют сипохром, активированный хлористым циануром (1).

Однако в таком способе активность получаемых препаратов низкая, а связь фермента с носителем недостаточно прочная,. поскольку образующаяся связь 25

-5i - Π— С вЂ” легко подвержена гидролизу.

Известен также способ иммобипизации кислых протеиназ на стекпе и сипохроме, модифицированных аминооргсипаном, который осуществляют с помощью агента, сшивающего бепок и носитель, растворимого карбодиимида, Однако в этом способе активность получаемых препаратов низкая. Кроме того, водорастворимый карбодиимид является дорогостоящим и маподоступным реактивом.

С целью повышения прочности связи ферментов с носитенем и увеличения удельной активности препаратов предпагается способ иммобилизации кислых протеиназ, который осуществляют иа кремнеэемсодержаших носителях, модифицированных аминооргсипаном, предварительно активированных хлористым ци1нуром, и заключающийся в том, что ферменты вводят во взаимодействие с носителем, предварительно активированным хлористым циануром.

621680

Составитель А. Бочарова

Редактор В. Мирэаджанова Техред М. Борисова Корректор A. Гриценко

Заказ 5019/9 Тираж 559 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по депам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Ра. шская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Препараты иммобипизованных кислых протеиназ, полученные предложенным способом, более чем в 10 раэ превосходят по активности препараты, полученные известным способом.

Процесс проводит следующим обра:зом.

Иммобинизация кислых протеиназ происходит в две стадии. На первой стадии кремнеземсодержащий материап, модифицированный аминооргсиланом, активируют

1О путем его обработки хлористым циануром, На второй стадии ферменты вводят в контакт с активированным носителем, при этом ферменты связываются с носителем

15 кова пентно.

Предложенный способ может быть ис= пользован дня иммобилизации многих ферментов и белков. Кроме того, целевая иммобипиэация кислых протеиназ

20 интересна тем, что эти ферменты неустойчивы при нейтральных и щелочных значениях рН и теряют активность в усповиях большинства методов иммобилизации.

Пример. Активация аминоаэросипа

25 хлористым циануром.

Аминоаэросип (1 г) добавляют в 5%иый раствор хлористого цианура в смеси диоксан-тоцу (15 мп, 4:1, по объему), смесь перемешивают на магнитной мешалЗО ке 30 мин, активированный носитель промывают смесью диоксан-топуоп (4:4, по объему, 3 Х 50 мп) и диоксаном (100 мп)

Продукт высушивают в вакууме при комнатной температуре.

Активация аминосилохрома хлористым циануром.

Аминосипохром (3 г) активируют аналогично аминоаэросипу, испопьзуя 20 мп

5%-ного раствора хпористого цианура в ло той же смеси растворителей.

Иммобигиэация пепсина на активированном хлористым циануром . аминоорганоаэросипе.

Активированный хлористым циануром

45 аминоорганоаэросил (1, г) .вносятврасчiвор (27 мп) пепсича (460 мг) в 0,1 М ацетатном буфере (рН 4,5), перемешивают 1 ч при комнатной температуре и 18 ч при 4 С. Иммобипизованный феро мент отделяют от несвязанного фермента путем промывания препарата 1 М водным раствором хлористого натрия до исчезновения светопогпощения при 280 нм B промывных водах и 0,1 М ацетатным буфером (рН 4,5) до отсутствия ионов хлора, Активность полученного препарата иммобилизованного пепсина по гемогпобину составляет 155000 ед./г сухого препарата. Препарат хранят в О, 1 М ацетатном буфере, рН 4,5, Иммобипизация пепсина на активированном хлористым циануром аминоорганоси лохроме.

Активированный хлористым циануром аминоорганосилохром (1 r) вносят в раствор (7,5 мп) пепсина (46 мг) в

0,1 М ацетатном буфере (pH 4,5), затем проводят иммобипиэацию аналогично описанному дпя аминоорганоаэросипа. Активность полученного препарата иммобипиэованного пепсином по гемогпобину составляет 51000 ед./r сухого препарата. Препарат хранят в О, 1 M ацетатном буфере« рН 4,5.

Формула изобретения

Способ иммобилизации кислых протеинаэ на кремнеэемсодержащих носителях, модифицированных аминооргсипаном, о ти и ч а ю ш и и с я тем, что, с цепью повышения прочности связи ферментов с носитепем и увеличения удепьной активности препаратов, киспые протеиназы вводят во взаимодействие с носитепем, предваритепьно активированным хлористым циануром.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе;

1. Крылова К). И, Коэпов Л. В., Антонов В. К., Гаина Б. С.,йатунашвили E. Н.

Павленко H. М. Иммобипизация киспых

II протеинаэ. — Биоорганическая химия, 1976, 2, с. 273,