Способ дезагрегации почечной ткани

Способ дезагрегации почечной ткани

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Сов

Социапистичесиик республик (11) 623869

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 121076 (21)2411511/28" 13 с присоединением заявки М— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 1509.78.Бюллетень № 34 (45) Дата опубликования описания 030878 (51) М. Кл.

С 12 К 9/00

Государственный комитет

Coseta Министров СССР но делам изобретений и открытий (53) УДК

581. 143. 6 (088. 8) (72) Авторы изобретения

К. M Малышева, Н. Д. Хомякова и В. В. Прохоров (54) СПОСОБ ДЕЗАГРЕГАЦИИ ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ пергирующий раствор. В качестве диспергирующего раствора . используют смесь 0,05%-ного раствора трипсина и 0,005%-ного раствора коллас назы.

Растворы ферментов готовят на какойлибо питательной среде (0,53-ный гидролизат лактальбумина, СИ Rb — 1969) при рН 7,4. До введения циспергирующего раствора сосудистую систему почки промывают 0,5 л раствора, Дюльбек" ко без кальция и магния. Затем в почку нагнетают диспергирующий раствор.

Через 10-12 мин прокачивания диспергирующего раствора почка размягчается и перфуэию прекращают. Диспергирующий раствор удаляют, почку промывают 0,5Ъ-ным гидролиэатом лактальбумина с 20% сыворотки крупного рогатого скота. Затем в колбу с 150-200 мл питательной среды пинцетом слущивают корковое вещество перфузированной почки и колбу помещают на магнитную мешалку на 2-3 мин для получения гомогенного концентрата клеток.

После фильтрации через марлю концентрат, минуя центрифугирование,разбавляют до нужной концентрации питательной средой с сывороткой рассевают в культуральные сосуды различной емкости.

Изобретение относится к области вирусологии.

Известен способ дезагрегации почечной ткани, заключающийся в том, что в почки через сосуще органа ssoдят смесь 0,5Ъ-наго раствора трипсина и 0,043-ного раствора версена. Выход жизнеспособных клеток 90-120 млн

ЫОднако известный способ не обеспечивает высокого выхода жизнеспособных клеток.

Целью изобретения является повышение выхода жизнеспособных клеток.

Эта цель достигается тем, что в качестве диспергирующего раствора используют смесь 0,05-0,25%-ного раствора трипсина и 0,005 — 0,01%-ного раствора коллагеиазы.

Способ осуществляют следующим образом. у предварительно обескровленного

3-4-недельного поросенка асептически, повреждая капсулы извлекают поч д8 ки с участком брюшной аорты в месте ответвления почечных артерий.

Делают продольный разрез брюшной аорты и в устье почечной артерии вставляют канюлю, через которую в со- ЗО судистую систему органа нагнетают дис(71) )аяВИтЕЛЬ Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт

623869

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред А. Алатьцзев КорректорА. Власенко

Редактор Т. Девятко

Заказ 5112/19 Тираж 568 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, ж-35, Раущская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Так как отсутствует иэмельчение ткани, центрифугированне клеток н разделение перфузированной ткани на изолированные клетки в гомогенизаторе, то процент выхода живых клеток сЬставляет 95-97%. Вследствие одновременного быстрого воздействия двух ферментов в пониженных концентрациях на все Ь межклеточные связи клетки сохраняют морфологическую целостность наружных мембран, дают монослой на четвертые сутки и проявляют высокую чувствительность к вирусу ящура, !О

Применение предлагаемого способа позволяет осуществлять процесс дезагрегации клеток в мягких режимах, увеличить выход, клеток о сравнению с классическим способом (выход жизнеспособных клеток 400-420 млн иэ 1 r почечной ткани, что составляет 9095%, при классическом способе выход составляет 24-56 млн иэ 1 r почечной ткани) .

Предлагаемый способ поэволит значительно упростить и сократить число операций, расходы рабочего времени, растворов, питательных сред, сывороток, оборудования, животных — доноров.

Способ дезагрегации почечной ткани путем введения в почки .через сосуды органа днспергирующего раствора, отличающийся тем, что, с целью повыаения выхода жизнеспособных клеток, в качестве диспергирующего раствора используют смесь 0,050,25%-ного раствора трипснна и 0,0050,01%-ного раствора коллагенаэы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе«.

1, Авторское свидетельство СССР

В 340698, кл. С 12 К 9/00,.1972.