-а цилированный пентапептидамид или его динатриевая соль, обладающие способностью природного гастрина стимулировать выделение желудочного сока

-а цилированный пентапептидамид или его динатриевая соль, обладающие способностью природного гастрина стимулировать выделение желудочного сока

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИ-Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ (ii)624911

Союз Советских

Социалистииескин

Республик (61) Дополнительное к авт, свил-ву— (22) Заивлеио07.06.76 (21) 2387222/23-04 с присоединением заявки № (23) Приоритето†(43) Оиубликовано25.09.78 Бюллетень № 35 (45) Дата опубликовании описании 01.09.78

2 (51) М. Кл

С 07 С 1 03/52

А 61 К 31/195

«тосударотвенны9 юатет

Совета Министров СССР ов делан изооретений н открытий (53) УЙК 547.964, .4(088,8) (72) Авторы изобретении

П. Я. Романовский, Т. N. Шевелева, И. К. .Лнепкаула, В. Э. Муйжниекс и Г. И, Чипенс

Ордена Трудового Красного Знамени институт органического синтеза AH Латвийской ССР (71) Заявитель (54) Й -AUHJIHPOBAHHbIA НЕНТАПЕПТИДАМИД ИЛИ ЕГО

ДИНАТРИЕВАЯ СОЛЬ, ОБЛАДАЮШИЕ СПОСОБНОСТЬЮ

ПРИРОДНОГО ГАСТРИНА СТИМУЛИРОВАТЬ ВЫ ДЕЛЕНИЕ КЕЛ ДОЧНОГО СОКА

Изобретение относится к новому биологически активному соединению

В литературе известны многочислен- щ ные аналоги-производные С-концевого тетрапептида гастрина (1), наибольшее значение для целей диагностики функционального си:тояния желудка в практической медицине имеет трет-ВОС-производное (2 ) .

ВОС-Тгр-МеЛ.- Аьр-Ртте-МИ .И

Однако его применение затруднено из-за низкой растворимости в физию ологическом растворе, необходимом для введения соединения в организм.

Я -4opMnarmma-Top- Net-they e NH 1П

R. обладает в 3 раза более высокой раство», римостью, чем соединение П, недостат- z% ком этого препарата является способ его очистки, который состоит в переосаждении водой из диметилформамида (31.

Иель настоящего изобретения - расширение средств воздействия на живой организм, создание HB доступном сырье: с использованием простой технологии нового соединения, обладающего хорошей раст воримостью в воде и физиологическом растворе () 10 мг/мл), что значительно упрощает методику приготовления раствора активного препарата для биологических исследований, кроме того препарат обладает высокой биологической активностью и может быть использован в практической медицине для диагностики функционального состояния желудка.

Поставленная цель достигается приме-tтением и -ацилированиого пеитапептида- . мида обшей формулы I сукцинил»саркозил-триптофил-лейцил-аспартил-фенилаланиламип или его динатриевой солью.

Синтез И-ацилированного пептида формулы Х осущеспзляется известным мето3 6249 дом, ступенчатым наращиванием цепи ме тодом активированных 4-пиридинальдоксимовых эфиров И -amuraposaalx аминокис; лот (4), начиная с фениламида, Все реакции образования пептидной связи проводят в однотипных условиях, побочные продукты и избыток ацилирующего агента по окончании реакции полностью удаляют экстракasek реакционной смеси кислыми и основ иИЫи водными растворами.

Л р и м е р. Органические растворители уцаривали на ротационном испарителе при остаточном давлении 1218 мм рт. ст. и температуре бани 15

Q O С.

Температуры плавления (разложения) определяли в открытых капиллярах (без коррекции), углы вращения - на поляриметре Леркин Злмер» (модель 141).

ИК-спектры образцов снимали на нрнбо ре UR -10 фирмы «Карл Иейсс (ГБ ).

Зля хроматографического анализа исполь зовали бумагу Фильтрак ФН-3 (ГДР) в системе н-бутанол- уксусная кислота1 25 вода (4:1 6). Электрофоретический ана11 4 лиз на бумаге Фильтрак ФН-16 (ГЙР) проведен в буферных системах: 30% уксусная кислота (рН 1,9) при потенциальном градиенте 18 в/см и пиридин. ацетатный буфер (pH-5,0) при 9в/см, время - 1,5 час. Электрсфоретическая подвижность соединений (E „-z ) охарак теризована по отнощению к гистидину, Пятна на хроматограммах н электрофореграммах проявляли нингидрином, реактивом Эрлиха и раствором перман а . ната калии в разбавленной серной кислоте. Образцы для элементарного анализа были высушены в течение 10 час в вакуумном эксикаторе над пятиокисыо фосфора и гидроокисью калии.

4-пнридинальдоксим оные эфиры ф -ациламинокислот

4-пиридинальдоксимовые эфиры Н -трет-ВОС-(P-и-нитробензилового эфира)-аспарагиновой кислоты,.N -трет-ВСС-лейпина, М -трет-ВСС-триптофана и Я -карбобензоксисаркозина получены согласно (4 ; аналитические данные, характеризующие полученные соединения, приведены в табл. 1, И о о о

CO о.

0 о

О о (О

Р} (j$

3 д

М а.

>, с}

0+ э g0 о

«+ х.

62493. 1

t (» о (О х

О

Ф м

И

Ig

0 о

Я о"

«Ф

СЦ

0о

7 6249

N -трет-бутилоксикарбонил-аспартил-, -(Р -и-нитробензиловый эфир)-фенил» аланил-амид, К суспензии 1,0 г гидрохлорида фенилаланил-амида в 15 мл тетрагидрофурана добавляют 0,69 мл триэтиламина, 2,4 г Д» -(4-пиридинальдоксимового)

Р-п-нитробензилового эфира Я -третбутилоксикарбонил-аспарагиновойrmello ы и 0,3 мл уксусной кислоты, пере- 10 мешивают в течение часа и оставляют на 16 час нри комнатной температуре, Реакционную смесь выливают в 50 мл воды, экстрагируют 50 мл этилацетата,/Органический слой последовательно 1$ .цроьпывают 3 х .20 мл 5% раствора бисульфата калия, 1х20 мл воды, Зх20мл

Я% раствора бикарбоната натрия и lõ20 мл воды. ОрганиЧеский слой Высушивают над безводным сульфатом магния„2О упаривают. Сухой остаток кристаллизуют из петролейного эфира. Выход 1,55 г

{60%). Т. пл. 158-160 С.Qj = 21,0 С (с 1,0, тетрагидрофуран).

Найдено,%: С 58,56; Н 5,93;

A 10,31.

С о Н 0 0б

Вычислено,%: С 58,40; Н 5,84;

Ю 10,91.

М -трет-бу тил оксикар6онил-лейцил-аспартил (P -и-нитробензиловый эфир)-фе ни цапаний-амид, Растворяют 2,98 .гHOS-Аьр(ОВ ЯМО }-РИ© НН>, в 15 мл трифторуксусной кислоты, выдерживают 20 мин при комнатной тем-" пературе, упаривают в вакууме. К остатку добавляют 50 мл диэтилового эфира, вещество отфильтровывают и высушивают

w вщсуумном эксикаторе.

46

Полученное вещество суспендируют в

10 мл тетрагидрофурана и нейтрализуют

0,8 мл триэтиламина и .добавляют 2,5 г

4-пиридинальдоксимового эфира А -трет бужлоксикарбониллейщща и 0,30 мл уксусной кислоты и оставляют на 16 час при комнатной температуре, Выделение продукта аналогично описанному выше.

Получают 3,0 г (74%). Т, пл. 167-16УО

)/) =33>7W (с 1,0 тетрагидрсфуран), йайдейо,%: С 59,69; Н 6,66;,Й11,00

С> H-«ht,Îö

Вычислено,%: С 59,63; H 6,63;

N 11,15.

N -трет-бутил оксикарбонил-триптофил

55 лейцил-аспартил (Я -п-нитробензиловый эфир)-фенилаланил-амид;

Растворяют 2,7 г й>С-LRU-Àéó(овъЕ ко }-р е Кй в 10 л триФто р уксусно@

ll 8 кислоты, выдерживают 20 мин при комнатной температуре, упаривают в вакууме. К остатку добавляют 50 мл диэтилового эфира, вещество отфильтровывают и высушивают в вакуумном эксикаторе над гидроокиськ. калия.

Полученное вещество суспендируют в

20 мл тетрагидрсфурана, добавляют 1,1мл триэтиламина и упаривают полученный" раствор в вакууме. Остаток растворяют в 20 мл -.етрагидрофурана, добавляют

2,43 г 4-пиридинальдоксимового эфира

Ф -Tpew6ymaoKcMKap6ozap6oamnTpamoфана, 0,6 мл уксусной кислоты и mbдерживают 16 час при комнатной температуре. Выделение продукта аналогично описанному выше. Получают 2,7 г {81%).

Т. пл, 169-172 С бЯ .29,2 (с 1,0 тетрагидрофуран) .

Найдено,%: С 60,89; Н 6,59;

Й 11,96.

Сю Н 5101010 аа

Вычислено,%: С 60,75 Н 6,44;

М 12,02.

g --карбобензоксисаркозил.-триптофил-лейцил-аспартил (p -и-нитробензиловый эфир) -фенилаланил-амид „

Растворяют. 2,62 г ЗОС-Тгр-Ьео-Аьр»

<(OBzE Й0} - рЬВ И" в 4% растворе меркапто этанола в трифторуксусной кислоте, ВЬИ держивают 10 мин при комнатной температуре и упаривают В Вакууме. К остатку добавляют 30 мл диэтилового эфира, вещество отфильтровывают и высушивают

В Вакуумном эксикатореа

Полученное вещество суспендируют

В 25 мл тетрагидрсфурана, добавляют .

0,83 мл триэтиламина и упаривают полученный раствор в вакууме, К остатку добавляют 20 мл тетрагидрофурана, 1,47 г 4-ниридинальдоксимового эфира карбобензоксисаркозина и 0,3 мл уксусной кислоты и Выдерживают 1 6 час при комнатной температуре. Выделение продукта аналогично описанному Вьпие.

Получают 2,56 г (96%). Т, пл, 169-175oC-fr/) =24 8 С (С 1,0 дим етилформамид) .

Найдено,%: С 55,89; Н 5,69;

V10,77.

СМН ЬЯ

Вычислено,%: С 56,93; Н 6,08;

Й 11,20.

Сарк озил-трицт Мил-лейцил-аспартилг

-фенилаланин-амид, РастВоряит 1,1 4 г Z Of"=TFp liQU-Asp"

1(ОвхГ ИО }РИАЗ ИИ В 20 мл смеси метанолуксусная кислота-вода (6:1:1), добавляют палладиевый катализатор и гидрируют при атмосферном давлении в течение 10 час.

Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, к остатку добавляют 5 мл н-бутанола, растирают и отфильтровывают.

Вещество на фильтре промывают 5 мл н-бутанола и 30 мл днэтилового эфира.

Выход 0,75 г (82%} Е 0,58. (рН 1,9), ЕН 0.52 (pH 5>0) И 0>70>Щ =О>2 "С (с 1,0 уксусная кислота).

Найдено,%: С 53,76; Н 7,12; И 12,97

33 4З 1 1 Й

Вычислено,%: С 53,6; Н 7,18; И13,28

Сукцинил-саркозил-триптофил-лейцил-аспартил-фенилаланил-амид ..

Растворяют 0,325г бсн -Tqp- (au- Aspв 10 мл HHpHl1HHB H добавляют

0,070 г янтарного ангидрида, Реакционную смесь выдерживают 16 час при комнатной температуре, растворитель упаривают, к остатку добавляют 15 мл диэтилового эфира, растирают и отфильтровывают, Вещество на фильтре промывают

10 мл эфира и высушивают на воздухе.

Полученное вещество растворяют в 20 мл

1%. раствора бикарбоната натрия, фильтруют фил ьтрат подкисл пот 5% раствором бисульфата калия до рН 3. Отфильтровывают выпавшее в осадок вещество, промывают осадок ча фильтре водой и высушивают в эксикаторе над фосфорным ангидридом и гидроокисью калия.

Получают: 0,318 г (94%) Е „-,, 0,32 (рН 1,9) Ен,-s0,32 (pH 5,0).

К10,83. Р) - 32,9 (с 1,1 диметилформ амид) .

Найдено,%: С 57,32; Н 6,38;

И 12,43;

, И„О„Н,О

Вычислено,%: С 57,88; Н 6,43; (12,77.

Йинатриевая соль .сукцинил-саркозил-трип т офйлле йцил-аспартил-фенилаланил45

-амида.

Растворяют 0,255 г Suc-Sat.-Тгрьео-Аср-р еиН и 0,057 г бикарбоната натрия в 5 мл воды, раствор фильтруют и фильтрат промывают 5 мл воды. Обьединенные фильтраты лиофилизируют, получен50 ный продукт высушивают в эксикаторе.

Получают 0,3 r (слегка превышает теоретический).Е (3 = 34,3 С (с l,ÎH Î).

Найдено,%: С 50,03; Н 6,11;

/V11,О7.

С Н4 5 +7010 ФП 5Н О;

Вычислено,%: С 50,28; Н 6,27;

N 11,09.

93 1 10

Опыты по определению биологической

> активности проводили по известным м»тодикам, Биологическую активность сукцинил саркозил-триптофил-лейцил-аспартил-феннлаланиламид и его динатриевой соли оценивали по способности соединений влиять на киспотообразоватепьную функцию желудка. Показателями жепуцочнгй секреции спужипи количество и общая кислотность желудочного сока, выделившегося из фистулы Басова, вставленной оператив-. ным путем в желудок до опыта.

Данные вещества вводили ненаркозированным кошкам с желудочными фистулами парентерально. Активность соединений определяли по четырехточечному методу в процентах по отношению к стандарту. ,В качестве стандартного препарата использовали синтезированный в лаборатории пептидов ИОС AH Латв. CCP с-терминальный пентидамид гастрина трет-бутилоксикарбонил-Р алании-триптофил-метионил-аспартил-фенилананинамид (препарат пеигастрин), который предварительно был стандартизован по отношению к биологическому стандарту Human gaskr n I неьвагсй Ыапдои3 68/439,Э1ч1Моп о Bio Со г1са 6 бЬяп dard,Nai. Jnst. fey Вед. Яеэес гсп, Епц бтра..

Опыты проводили в августе, сентябре.

В каждом опыте использовали две дозы (большую и маленькую) стандарта и две дозы (большую и маленькую) излучаемого соединения. Желудочный сок собирали каждые 15 мин в течение 1 час йосле подкожного введения препарата.

В каждой пробе измеряли выделенное количество сока в миллилитрах. После определения количества соляной кислоты в аликвотной части пробы вычисляли общее количество соляной кислоты и пробе в миллиэквивалентах. Выделенное количество соляной кислоты в миллиэквивалентах в течение 1 час под влиянием изучаемого препарата сравнивали с соответствующим показателем, полученным на данной кошке в тех же условиях при введении стандарта.

Влияние динатриевой соли 5 uc - Ь сл н Т„р.LeU Цур ЩеЯ Н на кислотообразовательную функцию желудка кошки определяется следуюшим образом.

Активность соединения определяли по формуле кс активность % = Р 1 >

624911

12 где kc — доза стандартного препарата) и — доза исследуемого препарата;

Р— определяется согласно формуле

2 q z 1 где Т4 — срдй оет на мжую дозу исследуемого препарата;

Т - средний ответ на большую дозу исследуемого препарата;

Соотношения доза-эффект (на одной кошке), полученные при введении стандартного и исследуемого препаратов, приведены в табл. 2.

Таблица 2

8 5

Г 10

20

2,04

0,58

2,29 о,ве. 2,29-Я,О4- 1,%

2,29-О,58+2О4- 1,38

25 Формула изобретения

М -ацилированный пентапептидамид обшей формулы:

Сукцинил-саркозил-триптофил-лейцил-аспартил-фенилаланиламид или его динатриевая соль, обладающие способностью природного гастрина стимулировать выделение желудочного сока.

P=1,10 активность,% =

1,10 100 = 55%

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1.МогСе X.t-. "81госЫге - Xunction

l-eeationships in аз.Ьг1п — Kite рер1й3еь ", Расс. Row. 8ос. В., 4967, 170,97, 40

Z.Rosehg l"en Я.,SvenSSon S E,Crotstt!in denivc4t,ives tnvestigated ог secvetot- potencv and аг chotnges in

gG! э t г1с nl Qсо so 6 flic o ï1ïe f оl 1па11оп) ,Бг4 I . $. Peal-m. 1970, 58,473 средняя активность 61%

3. Авторское свидетельство СССР/. № 368243 кл. С 07 С 103/52, 14. 11.72.

4. Авторское евидетельство СССР

l4 487884, кл. С 07 d 31/40, 1975. средняя активность 67%

БНИИПЦ Заказ 5338/23 Тираж 559

Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Нри расчете активности основного вещества в образце получают: ,gag ploy

На основании полученных даьп.ых вычислены средние величины биологической активности исследуемого соединении в проиентах по отношению к стандартному препарату:

Динатриевая соль сукцинил-саркозилтриптозил-лейцил-аспартил-фенилаланинамида кошка № 1 500//О кошка № 2 74% кошка № 3 57%

Саркозил:триптофил-лейцил-аспартил; .фенил-аланинамид кошка №. 1 74% кошка № 2 61о кошка № 3 66%0 средний ответ на малую дозу стандартного препарата; средний ответ на большую дозу стандартного препарата отношение между большими и малыми дозами препарата.