Патент 626117

Способ получения токсина

 

1н 626И7

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 26.01.77 (21) 2447649/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.09.78. Бюллетень Ы 36 (45) Дата опубликования описания 22.08.78 (51) М. Кл.

С 12D 7! 00

Государственный комитет

Совета Министров СССР

fl0 делам изобретений и открытий (53) УДК 615.45:Л576. .8.097.29 (088.8) (72) Лвторы изобретения И. А. Баснакьян, А. Н. Лобанова, В. С. Грунтович, А. П. Власенко, В. A. Мельникова, И. Ю. Ильницкая и В. И. Иващенко (71) Заявитель Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТОКСИНА

Изобретение относится к области медицины и KBcder ñH микрооиологии.

Известен способ получения токсина путем выращивания инокулюма культуры ClustriЙшп perl ringens с последующим посевом 5 инокулюма для культивирования и выделением целевого продукта (1).

Однако такой способ не обеспечивает высокого выхода токсина. Кроме того, способ трудоемок. 10

Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода токсина.

Это достигается тем, что выращивание инокулюма осуществляют в течение 2,5—

",5 ч и для посева отбирают инокулюм, име- 15 ющий удельную скорость роста популяции

0,7 — 0,8 1/ч; удельную скорость нарастания токсигенных свойств токсина 450 — 550

Dlm/ìëðä.÷ и удельну.ю скорость нарастания антигенных свойств токсина 7,0 — 9,0 21

L+/ìëðä ч.

На фиг. 1 изображена зависимость удельных скоростей роста биомассы р от времени 1; на фиг. 2 — зависимость токсигенных

rpr свойств токсина от времени t; на фиг. 3 — 25 зависимость антигенных «р свойств токсина от времени t.

Пример. Штамм Clostridium perfringens типа Л 28 ВРбК вЂ” 28 культивируют в казеиново-панкреатической питательной среде с зр добавленne» 1% глюкозы при 37"C во флаконах в течение lб — 18 ч. (1ересевают в бутыль с той же средой с рабочим объемом

9 л, затем культуру в бутыли используют в качестве посевной (илн маточной — инокулюма) для засева реактора с рабочим объемом 250 л. В процессе культивирования в бутылях пробы отбирают каждый час, в пробах определяют концентрацию биомассы х путем подсчета микробных клеток в камере 1 оряева.

AKTHBHocTb культуральной жидкости также изучают в динамике, определяя нарастание токсигенных р (Dlm/мл) и антигенных ра (1+/мл) свойств токсина.

На основе получегп.ых данных рассчитывают удельные скорости роста популяции р, и нарастания токснгенных «рт и антнгенных

«ра свойств токсина (см. таблицу) .

Строят графики зависимости (как показано на фиг. 1) удельных скоростей роста биомассы р, нарастания токснгенных «р, и антигенных «р, свойств токсина (оси ординат) от времени (ocn абсцисс) выращивания.

Определяют период развития популяции, в котором удельная скорость роста ц составляет 0,7 — 0,8 1/ч, удельная скорость нарастания токсигенных свойств токсина «р1

450 — 550 Dim/ìëðä. ч, а удельная скорость

626117 нарастания антигенных свойств токсина rp>

7 — 9 L+/Mëðä. ч. Этот период в нашем примере соответствует 2,5 — 3,5 ч от начала культивирования. Он ограничен пунктирными линиями на фиг. 1.

В производстве обычно используют б — 8часовую культуру, в которой, как видно из фиг. 1, значения всех трех удельных скоростей приближаются к нулевым. Использование инокулюма в периоде развития 2,5—

3,5 ч от начала культивирования для засева реактора позволяет получить в нем сбалансированный рост, который характеризуется совпадением во времени максимальных значений удельных скоростей роста популяции, нарастанием токсигенпых и антигенных свойств токсина и повышением активности (выхода) токсина от 7 до 8,7 — 9,5 L+/ìë, что по сравнению со среднегодовым процессом, дающим 7 L+/ìë, на 28% больше.

В таблице приведена формула для расчета удельных скоростей роста биомассы р, нарастания токсигенных rpi и антигенных p., свойств токсина. !

Ipe;rëàràåìûé способ обеспечивает повыитепие активности (выхода) токсина от 7 до

8,7- 9,5 L+/ìë, что по сравнению со среднегодовым vðoöåññoì, дающим 7L+/ìë, на

28% больше. Кроме того, отмечается значительное упрощение способа, поскольку сокращается время подготовки маточной культуры (ипокулюма) культуры Clostridium рсг(г1п(спз от 6--8 до 3 ч при обеспечении г, 100% случаев интенсивного роста культуры и высокой активности токсина в реакторе.

Таблица

Обозначение показателя, 5 размерность

Формулы для расчета

dx 1

Р =

dt x и 1/ч

2, 3 (Ig х — Ig хо)

10 (ti — to) <А гРч =

dt x

rpi

Dlm/ìëðä ч

2,3 (Pii — Pio) (Igxi — Igxo) гр, (t1 — to) (xi — xo) 15

dPo

rp =

dt x гр, Lf/ìëðä ч

2 3 (Poi — Pao) (Ig xi — 1Яхо) гР, (ti — to) (Х вЂ” Х,) 20

Формула изобретения

Способ получения токсина путем выра25 щивания инокулюма культуры Clostridium

perfringens с последующим посевом инокулюма для культивирования и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повыше30 ния выхода токсина, выращивание инокулюма осуществляют в течение 2,5 — 3,5 ч и для посева отбирают ипокулюм, имеющий удельную скорость роста популяции 0,7—

0,8 1/ч, удельную скорость нарастания ток35 сигенных свойств токсина 450 †5 Dlm/ млрд. ч и удельную скорость нарастания антигенных свойств токсина 7,0 — 9,0 L+/ìëðä. ч.

626117

500

".1ь е (! 1 — — т 5 У5

Редактор М. Дмитриева

Корректор О. Тюрина

Заказ 1822/11 Изд. ¹ 631 Тираж 554

I-1Г10 Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобрстсиий и открытий

113035, й1осква, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2 о 1.

Составитель В. Головин

Техрсд Н. Рыбкина