Способ расщепления клеток микроорганизмов

Способ расщепления клеток микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

626118

Составитель Г. Гуревич

Техред Н. Рыбкина

Корректоры: В. Дод и О. Данишева

Редактор М. Дмитриева

Заказ 1694/13 Изд. М 655 Тираж 526 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Я(-35, Раушская наб., д. 4/5

Сапунова, 2

Типография, пр.

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что в нем возможно регулирование процесса изменением времени контакта клеток с гранулами, существенно улучшены геометрические характеристики зоны контакта клетки с подложкой, несущей литнческой фермент (многоточечный, многократный контакт), что обеспечивает достижение заданной цели.

П р и м ер 1. Еультуру Е. Со11 В выра- 10 щнвают на мясопептонном бульоне с аэрацией в течение 20 ч. Полученную клеточную массу промывают водным раствором, содержащим 0,85% NaC1, затем центрифугируют.

Осадок ресуспендируют в 0,3%-ном раст- 15 воре ХаС! с 25 мг/мл ЭДТА до концентрации 10 кл/мл, и полученную суспензию насосом пульсирующего действия прокачивают через реактор, внутри которого помещены ультрамнкропористые ячеистые стек- 26 лянные гранулы размером от 60 до 300 мкм с иммобплизоваHíым на них лизоцимом в количестве 0,1 мг/г. Насыпной объем гранул равен объему проточного реактора и составляет 10 мл. Рабочий объем реактора 25

5 мл. Насос пульсирующего действия обеспечивает подачу в реактор 20 доз суспензпи в минуту объемом по 0,8 мл. Время обработки клеток в реакторе составляет

3 мин при 20 С. Эффективность расщеп- 60 ленпя (дезинтеграции) клеток 90% от IHCла исходных.

Пр им ер 2. Культуру Е. Coli В выращивают IIB мясопептонном бульоне с аэрацией в течение 5 ч. Полученную клеточную 35 массу дважды промывают в 0,05 М трисбуфере, затем центрифугируют. Осадок ресуспендируют в 0,05М трис-буфере (рН 8,0) до концентрации 10 кл/мл. В суспензию вводят сахарозу до концентрации 0,5 М и 40

0,01 объема раствора ЭДТЛ с концентраци ей 25 м г/мл.

Полученную суспензию насосом пульсирующего действия прока чивают через реактор, внутри которого помещены ультра- 45 микропористые ячеистые стеклянные гранулы размером от 60 до 300 мкм с иммобилнзованным на них лизоцимом в количестве 0,1 мг/г. Насыпной объем гранул равен обьему проточного реактора и состав- 59 ляет 10 мл. Рабочий объем реактора 5 мл.

Насосом пульсирующего действия для получения сферопластов подают в реактор

60 доз суспензнн в минуту, а для получения протопластов 24 дозы суспснзии в минуту. Объем каждой дозы 0,5 мл. При этом время обработки клеток в реакторе составляет 10 с при получении сферопластов и 25 с при получении протопластов при 20 C. Эффективность получения сферонластов 70%, протопластов 80 /о.

JI р и м е р 3. культуру Micrococcus

lisodeicticus выращивают на мясопептонном бульоне с аэрацией в течение 24 ч.

Полученную клеточную массу промывают водным раствором, содержащим 0,850

NaCI, затем центрифугуют. Осадок ресуспендируют в 0,3/ц-ном растворе NBC1 с

25 мг/мл ЭДТА до концентрации 10 кл/мл, и полученную суспензию насосом пульсирующего действия прокачивают через реактор, внутри которого помещены ультрамнкропористые ячеистые стеклянные гранулы размером от 60 до 300 мкм с иммобилизованным на них лизоцимом в количестве 0,05 мг/г. Насыпной объем гранул равен объему проточного реактора и составляет 10 мл. Рабочий объем реактора

5 мл. Насос пульсирующего действия обеспечивает подачу в реактор 20 доз суспензии в минуту объемом 0,5 мл каждая. Время обработки клеток в реакторе составляет 3 с при 20 С. Эффективность расщепления (дезинтеграции) клеток 95% от числа исходных.

Формула изобретения

Способ расщепления клеток микроорганизмов, предусматривающий ферментативное воздействие на клеточные стенки иммобилизованным на твердой поверхности литическим ферментом, о т л и ч а ю щ и йся тем, что, с целью регулирования процесса и повышения его эффективности и производительности, клетки микроорганизмов суспендируют в гипотоническом или стабилизированном изотоническом солевых растворах и пропускают в импульсно-проточном режиме через ультрамикропористую подложку, выполненную в виде гранул ячеистого строения с размером ячеек

0,5 — 10 мкм.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент СШЛ No 3849254, кл. 195—

116, опублик. 1974.